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Carboxydobacteria 를 위한 재조합 Plasmid 백터와 형질전환방법 개발

  • 김진욱;송택선;김영민
    • 미생물학회지
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    • 제30권3호
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    • pp.218-224
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    • 1992
  • Carboxydobacteria 의 일산화 탄소 산화에 대한 유전학적 연구를 위해 Pseudomonas caarboxydovorans 에 존재하는 pYK100 plasmid 와 pBR322 를 이용하여 pYK322 (7.2 kb, Ap, Tc) 와 pYK324 (7.2 kb, Ap, Tc) 등 두가지 재조합 plasmid shuttle 백테를 만들고, pYK100와 pACYC184를 이용하여 pYK210(5.2 kb, $CM^{r}$ ), pYK220 (5.2kb,$CM^{r}$ ), pYK230 (5.2 kb, $Cm^{r}$ ), pYK232 (5.2 kb, $CM^{r}$) 등 네가지 shuttle 벡터를 만들었다. 재조합된 벡터들은 보두 대장균에서 안정되게 복제되었다. pYK322 와 pYK220 을 이용한 carboxydobacteria 의 형질전환 실험에서 Bagdasarian 과 Timmis 의 방법 (Curr. Top. Microbiol. Immunol., 96 :47-67, 1982) 을 변형하여 0.2% succinate 가 포함된 무기염류배지에서 지수성장 중기까지 배댜ㄷ한 세균을 이용하고, 형질전환용액의 10 mM RbCI 을 100 mM KCI 로 대체하며, 형질전환용액 처리후 4.deg.C 에서의 방치시간을 12시간으로 하고, DNA첨가휴 45.deg.C 에서 3 분간 heat shock 을 준 경우에 높은 형질전환이 일어났다. 형질전환된 세균으로 부터 형질전환에 사용한 plasmid 를 발견할 수 없었는데, 이는 도입된 plasmid 가 염색체 DNA 에 결합되었기 때문인 것으로 추측된다.

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김치로부터 분리한 효모가 생산하는 휘발성 화합물이 김치의 풍미에 미치는 효과

  • 김혜자;양차범;강상모
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제24권4호
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    • pp.512-518
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    • 1996
  • Eleven strains had been previously isolated from kimchi and identified in our laboratory. The ability of each strain in aroma production was investigated by sensory evaluation. Among them Saccharomyc s sp. YK-17, Saccharomyces sp. YK-18, Saccharomyces sp. YH-3 and Saccharomyces fermentati YK-19 produced fruity flavour. Especially, Saccharomyces fermentati YK-19 produced apple and pineapple-like flavours. Pichia media YK-11, Saccharomyces sp. YK-20 and Pichia chambardii YH-4 produced wine-like flavour. Debaryomyces sp. YK-6, Debarymyces coudertii YK-10, Saccharomyces sp. YK-12 and Pichia haplophilia YH-5 produced alcoholic flavours. Using the good flavour producing strains as starters, various groups of kimchi were fermented, and the sensory characteristics of each group such as odor, taste and total acceptability were evaluated. The acidic odor, moldy odor and taste were reduced by adding starter, while the fresh sourness odor and taste similar to fruity fiavour were increased by starter. Comparing with the control group, these odor, taste and total acceptability were increased in the starter-added groups, such as Pichia edia YK-11, Saccharomyces sp. YK-17, and Saccharomyces,fermentati YK- 19. Saccharomyces fermentati YK-19 added kimchi group was higher siginificantly (P<0.05) than the others at the total acceptability. Volatile compounds of the culture broth of Saccharomyces fermentati YK-19 were analysed by gas chromatography, and 6 species of esters and 4 species of alcohols were identified. Among them, the ester substances which broth largely responsible for the apple-like flavour in the sensory evaluation, were found to be ethyl 2-methyl butvrate, ethyl pentanoate and ethyl acetate.

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Home-made 요구르트와 시판 중인 요구르트에서 분리한 젖산균의 기능적 특성 조사 (Studies on the Functional Properties of Lactic Acid Bacteria Isolated from Home-made Yogurt and Commercial Yogurt)

  • 최문섭;윤현명;오계헌
    • 미생물학회지
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    • 제50권1호
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    • pp.8-14
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    • 2014
  • 본 연구는 home-made 요구르트에서 분리한 Lactobacillus casei SK-7과 시중에서 판매되고 있는 요구르트에서 분리한 Lactobacillus bulgaricus YK-11의 기능성을 비교 분석하기 위해 실시하였다. 먼저 분리세균인 SK-7과 YK-11의 생리화학적 특성조사를 진행하였다. 이들 균주는 16S rRNA 염기서열을 이용한 계통유전학적 분석방법으로 동정하여, 각각 L. casei SK-7와 L. bulgaricus YK-11로 명명하였다. 16S rRNA 염기서열을 바탕으로 SK-7과 YK-11의 유전적 계통수를 작성하였다. 72시간 동안 SK-7과 YK-11 배양에서 lactic acid와 acetic acid의 생산, 그리고 pH 변화를 조사하였다. 배양기간 동안 L. casei SK-7과 L. bulgaricus YK-11의 몇가지 기능성을 조사하였다. L. casei SK-7과 L. bulgaricus YK-11 배양상등액은 주어진 nitrite를 각각 93.9%와 88.2% 소거하였다. SK-7 and YK-11 배양상등액의 항산화능은 각각 62.6%와 54.9%였으며, ${\beta}$-galactosidase 활성은 14.9 units/mg과 13.1 units/mg로 측정되었다. 항미생물능력은 SK-7과 YK-11 배양의 20배 배양농축액으로 조사되었으며, SK-7은 이 조사에 사용된 모든 미생물에서 명백한 것으로 관찰되었으나, YK-11에서는 관찰되지 않았다. 부가적인 기능성 연구가 이루어져야 되겠지만, 본 연구에서는 home-made 요구르트에서 분리된 젖산균의 기능성은 시판요구르트에서의 기능성과 비교하여 우수한 것으로 조사되었다.

Burkholderia cepacia YK-2에서 페녹시계 제초제 2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid에 의한 스트레스 충격 단백질 DnaK와 GroEL의 생성 (Production of Stress Shock Proteins DnaK and GroEL in Burkholderia cepacia YK-2 by Phenoxyherbicide 2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid as an Environmental Contaminant)

  • 조윤석;박상호;김치경;오계헌
    • 미생물학회지
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    • 제35권4호
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    • pp.270-276
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    • 1999
  • 환경오염원으로서 페녹시계 제초제인 ,2,4-D(2,4-dichlorophenoxyacetic acid)에 노출된 토양으로부터 분리된 세균인 Burkholderia cepacia YK-2에서 2,4-D에 의한 스트레스 충격 단백질의 생성을 조사하였다. 활발하게 생장을 하고 있는 B. cepacia YK-2의 배양은 다양한 농도의 2,4-D에 노출되어 스트레스 충격단백질을 생성하였다. 이 반응은 43kDa의 DnaK와 41kDa의 GroEL 단백질의 생성을 수반하였으며, 이 단백질들은 anti-DnaK 단일 항체와 anti-GroEL 단일 항체를 사용한 SDS-PAGE과 Western blot을 통하여 확인되었다. 생성된 총 스트레스 충격 단백질은 2-D PAGE 에 의하여 분석되었다. 다양한 2,4-D농도와 노출 시간에 따른 B. cepacia YK-2의 생존율을 분석한 결과, 이 세균의 생존율은 스트레스 충격 단백질의 생성과 비례하였다.

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YK-209뽕잎이 Streptozotocin 유발 당뇨쥐 소장의 이당류분해 효소 활성과 혈당강하에 미치는 영향 (Effects of YK-209 Mulberry Leaves on Disaccharidase Activites of Small Intestine and Blood Glucose-Lowering in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats)

  • 유수경;김미지;김진원;이순재
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제31권6호
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    • pp.1071-1077
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    • 2002
  • YK-209뽕잎이 STZ유발 당뇨쥐의 혈당강하작용에 미치는 영향을 관찰코져 정상군(normal group)과 STZ 유발 당뇨군으로 나누고 당뇨군은 다시 식이내 YK-209 뽕잎 함량에 따라 각각 YK-209 뽕잎을 공급하지 않은 당뇨 대조군(DM group),0.1% 뽕잎 공급군(DM-0.1Y group),0.2%뽕잎 공급군(DM-0.2Y group) 및 0.4% 뽕잎 공급군(DM-0.1Y group)으로 나누어 자유섭식시켰다. 3주후 STZ으로 당뇨를 유발한 후 9일째에 희생하였다. 본 실험에 사용된 YK-209 뽕잎 시료의 기능성 성분 함량은 DNJ(1-deoxynoijirimycin), rutin GABA(${\gamma}$-aminobutyric) 및 vitamin C는 1.93 mg/g,2,97 mg/g, 2.36 mg/g, 1.3 mg/g이었으며 청일 뽕잎에 비해 각 1.3배, 1.4배, 1.3배, 1.6배 높았다. 체중증가는 당뇨유발 후 모든 당뇨군에서 현저하게 감소되었으며 당뇨군간에 유의적인 차이는 없었다. 소장의 길이는 실험군간에 유의적인 차이가 없었다. 혈당수준은 YK-209 뽕잎 공급 군에서 비공급군에 비해 유의적으로 감소되었으며 농도에 따른 유의적인 차이는 보이지 않았다. 소장 점막중의 maltase, sucrase 및 lactase 활성은 DM군의 소장 proximal 부분에서 증가되었으나 뽕잎 첨가군의 proximal 부분에서는 모두 저해되었다. 결론적으로 뽕잎은 STZ 유발 당뇨쥐 소장의 proximal 부분의 이당류 분해효소 활성을 억제시켜 혈당 상승을 완하시킴을 알 수 있다.

Bleaching of Kraft Pulp with Lignin - Degrading Enzymes

  • Harazono, Koich;Kondo, Ryuichrto;Sakai, Kokki
    • 펄프종이기술
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    • 제29권2호
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    • pp.83-90
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    • 1997
  • An unbleached hardwood kraft pulp was bleached in vitro with partially purified manganese peroxidase (MnP) from the fungus Phanerochaete sordida YK-624 without the addition of MnSO$_4$ in the presence of oxalate, malonate or gluconate known as manganese chelator, When the pulp was treated without the addition of MnSO$_4$, the pulp brightness increased by about 10 points in the presence of 2 mM oxalate, but the brightness did not significantly increase in the presence of 50 mM malonate. Residual MnP activity decreased faster during the bleaching with MnP without MnSO$_4$ in the presence of malonate than in the presence of oxalate. Oxalate reduced MnO$_2$ which already existed in the pulp or was produced from $Mn^{2+}$ by oxidation with MnP and thus supplied $Mn^{2+}$ to the MnP system. Thus, bleaching of hardwood kraft pulp with MnP, using manganese originally existing in the pulp, became possible in the presence of oxalate, a good manganese chelator and reducing reagent. Properties of partially purified MnPs from liquid cultures of white rot fungi, Ganoderma sp. YK-505, Phanerochaete sordida YK-624 and Phanerochaete chrysosporium were compared. MnP from Ganoderma sp. YK-505 was superior to MnPs from P. sordida YK-624 and P. chrysosporium in stabilities against high temperature and high concentration of $H_2O$$_2$. The MnP from Ganoderma sp. YK-505 differed in pH-activity profile from other MnPs. These data suggest that MnP from Ganoderma sp. YK-505 has different structure from those of other fungi. Bleaching of hardwood kraft pulp using the MnP from ganoderma sp. YK-505 is now in progress.

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YK-209 뽕잎이 Streptozotocin 유발 당뇨쥐 간조직에서의 HMG-Coa Reductase 활성과 지질조성에 미치는 영향 (Effects of YK-209 Mulberry Leaves on HMG-CoA Reductase and Lipid Composition of Liver in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats)

  • 홍정희;이순재;박모라
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제31권5호
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    • pp.826-833
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    • 2002
  • 본 연구는 YK-209뽕잎이 STZ유발 당뇨 간조직 중의 콜레스테롤대사에 미치는 영향을 규명하기 위해 수행되었다. 실험동물은 100$\pm$10 우의 Sprague-Dawley종 수컷을 정상군(nor-mal group)과 당뇨군으로 나누고 당뇨군은 다시 식이내 YK-209뽕잎 함량에 따라 각각 YK-209뽕잎을 공급하지 않은 당뇨군(DM group), 0.1% YK-209 뽕잎 식이군(DM-0.1Y group),0.2% YK-209 뽕잎 식이군(DM-0.2Y group) 및 0.4% YK-209 뽕잎 식이군(DM-0.4Y group)으로 나누어 자유섭식 시켰다. 3주 후 STZ으로 당뇨를 유발한 후 9일째에 희생하여 혈액 및 간장에서의 콜레스테롤대사 개선능에 대해 관찰하였다 YK-209 뽕잎중의 flavonoid 함량을 조사한 결과 rutin은 4.19 mg/g, iso-quercitrin은 2.01 mg/g, kaempferol-3-O-ru-tinose은 1.64 mg/B, 및 astragalin은 0.36 mg/g이었으며 총 flavonoid 함량은 8.19 mg/g 으로 청일 뽕잎보다 그 함량들이 높았다. 혈청중의 중성지방 함량은 정상군에 비해 DM군이 105% 높았으나 YK-209 뽕잎 공급군은 정상군 수준이었다. 총 콜레스테롤 함량과 LDL-cholesterol함량은 정 상군에 비해 DM군은 증가되었으며, YK-209뽕잎 공급군은 DM군에 비해 유의적으로 감소되었다. 반면 HDL-cholesterol 함량은 정상 군에 비해 DM군에서 감소되었으나 YK-209뽕잎 공급군은 정상군 수준이었다 동맥경화 지수(AI)는 DM군은 정상군에 비해 약 3배 정도 높았으나 UM-0.1Y군과 DM-0.2Y군은 정상군 수준이었다. 간조직 중의 총지질 함량과 중성지방함량은 정상군에 비해 DM군에서 감소되었으며 YK-209 뽕잎을 공급한 군에서 DM군에 비해 증가되었다. 간조직의 콜레스테롤 함량은 DM군에서 정상군에 비해 160%증가되었으나YK-209 뽕잎 공급군은 정상군 수준이었다. 간조직 중의 HMG-CoA reductase 활성은 정 상군에 비 해 DM군이 43% 감소되었으나 DM-0.1Y군과 DM-0.2Y군은 정상군 수준이었다. 결론적으로 YK-209 뽕잎은 STZ유발 당뇨쥐의 간조직의 HMG-CoA reductase활성의 조절 및 혈액과 간조직의 콜레스테롤 농도를 감소시키는 효과가 있음이 규명되었다.

미생물제초제 생산을 위한 식물병원성 곰팡이 YK101 균주의 액체배양 방법

  • 박선호;구경본;박재성;홍연규
    • 한국생물공학회:학술대회논문집
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    • 한국생물공학회 2001년도 추계학술발표대회
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    • pp.471-474
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    • 2001
  • 강한 제초활성을 띠는 곰팡이 균주 YK101의 배양조건을 최적화하기 위하여 균사와 균체 생산에 대한 온도, 교반속도 그리고 배양배지의 영향을 조사하였다. YK101의 최적 배양온도와 교반속도는 각각 $28^{\circ}C$, 150rpm 이었다. 최적화된 배지조성은 1.0$^{\sim}$2.0% total sugar, 1.0% yeast extract 그리고 0.05% $MgSO_4$ ${\cdot}$ $7H_2O$이었다.

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YK-209 뽕잎이 Streptozotocin 유발 당뇨쥐 간조직의 항산화계에 미치는 영향 (Effects of YK-209 Mulberry Leaves on Antioxidative Defense System of Liver in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats)

  • 유수경;이순재
    • 한국식품영양과학회지
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    • 제31권6호
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    • pp.1065-1070
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    • 2002
  • YK 209 뽕잎이 STZ 유발 당뇨쥐 간조직의 항산화계에 미치는 영향을 관찰코져 하였다. Sprague Dawley 흰쥐 수컷을 정상군(normal group)과 STZ 유발 당뇨군으로 나누고 당뇨군은 다시 식이내 YK-209뽕잎 함량에 따라 각각 YK-209뽕잎을 공급하지 않은 당뇨대조군(DM group),0.1% 뽕잎 공급군(DM-0.IY group), 0.2% 뽕잎 공급군(DM-0.2Y group) 및 0.4% 뽕잎 공급군 (DM-0.4Y group)으로 나누어 자유섭식 시켰다. 3주후 STZ으로 당뇨를 유발한 후 9일째에 희생하였다. 단위체중당 간무게는 정상군에 비해 당뇨군 모두 유의적으로 증가되었으나 뽕잎 비공급 당뇨군(DM group)에 비해 뽕잎공급군들은 감소되었다. 간조직중의 SOD 활성은 정상군에 비해 당뇨유발군에서 유의적으로 감소하였으며 뽕잎공급으로 인한 차이는 없었다. GSHpx 활성은 정상군에 비해 DM군은 7.3%저하되었으나, DM-0.1Y, DM-0.2Y군은 정상군 수준이었다. 간조직 중의 지질과산화가는 정상군에 비해 DM군은 144%증가되었으나 DM-0.1Y, DM-0.2Y군은 정상군 수준이었다. 리포푸신 함량은 정상군에 비해 DM군에서 100%증가되었으나 YK-209 뽕잎 공급군은 DM군에 비해 유의적으로 감소되었다. 간조직 중의 superoxide radical(O$_2$ ) 함량은 정상군에 비해 DM군에서는 81% 증가되었으나 DM-0.1Y군과 DM-0.4Y군은 정상군과 유의적인 차이가 없었다. 이상의 결과에서 YK-209 뽕잎은 항산화계를 강화시켜 조직의 산화적 손상을 감소시키므로서 산화적 스트레스 억제 효과가 있었다.

세균 Pseudomonas sp. YK-32 균주에 의한 Formaldehyde 분해 최적조건 (Optimum Conditions of Formaldehyde Degradation by the Bacterium Pseudomonas sp. YK-32)

  • 김영목;이윤경;김경란;이은우;이명숙
    • 한국수산과학회지
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    • 제41권2호
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    • pp.102-106
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    • 2008
  • Formaldehyde, an indoor volatile organic compound, is considered toxic due to its carcinogenic risk. Recently, we isolated a formaldehyde-degrading bacterium Pseudomonas sp. YK-32. A crude enzyme prepared from YK-32 also degraded formaldehyde, suggesting that YK-32 cells have formaldehyde hydrogenase activity which is one of the important factors in formaldehyde degradation. The formaldehyde hydrogenase activity was increased 1.25 fold by adding 0.1 % glucose and formaldehyde to the culture medium. In addition, treatment with 1 mM EDTA as a permeabilizer promoted the degradation of formaldehyde and increased the enzymatic activity.