• KSBB Journal
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• 제22권1호
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• pp.48-52
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• 2007

본 연구에서는 sonificator를 장착하여 세포막을 파쇄하고 현장에서 형광을 이용하여 조작이 간편하고 단시간에 DNA와 단백질을 동시에 측정할 수 있는 자동화된 형광기를 개발하기 위하여 단백질을 측정하는데 최적의 파쇄조건을 확립하고자 하였다. 용액 중에 녹아 있는 공기 중의 oxygen은 collisional quenching을 일으키는데 sonification이나 가열처리를 시키면 oxygen이 제거되어 quenching 효과가 크게 감소되어 높은 형광값을 나타내었다. 0.7 X 이상의 형광시약 농도에서는 반응시작 후 1분 이내에 측정해야 하며, 0.3 X 이하의 형광시약 농도에서는 반응시작 후 2$\sim$3분 사이에 반응을 시킨 후 측정하는 것이 바람직한 것으로 나타났다. $100{\mu}g/m{\ell}$ 이상의 BSA 농도에서는 형광시약이 포화되었으며, 시료를 sonification시키면 단백질이 변성되어 눈에 보일 정도로 불투명해져서 시료 용액의 불투명도로 인해 형광 값이 감소되는 경향을 나타내었으며, $1{\mu}g/m{\ell}$ 이하의 BSA 시료에서는 sonification을 시키지 않은 시료보다 sonification을 시켰을 때 $0.125{\mu}g/m{\ell}$의 BSA를 훨씬 더 구분이 잘 되어 낮은 단백질 농도에서는 sonification시키는 것이 훨씬 유리한 것으로 나타났다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제42권3호
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• pp.252-255
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• 1999

Chalcones 유도체들을 합성하고 farnesyl protein transferase(FPTase) 저해활성을 측정하여, 기질분자의 치환기 변화에 따른 구조와 활성과의관계(SAR)를 Free-Wilson법과 Hansch법으로 검토하였다. Benzoyl group 중 X-치환기가 styryl중 Y-치환기보다 활성에 더욱 큰 영향을 미쳤으며 meta- > ortho-, para-치환기의 순으로 활성을 나타내었다. 또한, X및 Y-치환기의 소수성이 적정값$(({\Sigma}logP)_{opt}\;=\;3.915)$에 근접할수록 활성이 증가 하였으며, X-치환기의 입체효과와(Es > O) 전자밀게 Y-치환기에 의한 공명효과(R < O)가 활성에 미치는 중요한 요소로 인식되었다. 다루어진 화합물중에서 비 치환체, 8은 가장 높은 FPTase저해활성$(pl_{50}\;=\;4.30)$을 나타내었다. 그리고 기질 수용체간의 상호작용을 가정하여 제안하였다.

• 생명과학회지
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• 제23권8호
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• pp.978-983
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• 2013

Kinesin-II는 다양한 운반체들을 미세소관을 따라 운반하는 motor 단백질의 하나이다. Kinesin-II는 두 개의 motor 단백질 KIF3A와 KIF3B, 그리고 motor 단백질의 말단에 결합하는 kinesin superfamily-associated protein 3 (KAP3)로 구성되어 있다. KAP3는 Kinesin-II의 기능에 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있으나 명확한 기능은 아직 밝혀지지 않았다. 본 연구에서 KAP3와 결합하는 단백질을 분리하기 위하여 효모 two-hybrid system을 사용하여 탐색한 결과 HS-1-associated protein X-1 (HAX-1)을 분리하였다. KAP3은 HAX-1의 C-말단 부위와 결합하며, HAX-1은 KAP3의 C-말단부위와 결합함을 효모 two-hybrid assay로 확인하였다. 그러나, HAX-1는 KIF3A, KIF3B, KIF5B, 그리고 kinesin light chain (KLC)과는 결합하지 않았다. KAP3와 HAX-1의 단백질 결합은 glutathione S-transferase (GST) pull-down assay와 공동면역침강으로 추가 확인하였다. 생쥐의 뇌 파쇄액을 HAX-1 항체와 KIF3A 항체로 면역침강을 행한 결과 Kinesin-II의 구성단백질인 KIF3B와 KAP3가 같이 침강하였다. 이러한 결과들은 KAP3가 Kinesin-II와 HAX-1의 결합을 매개한다는 것을 시사한다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제23권6호
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• pp.784-788
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• 1995

The lambda Integrase (Int) carries out site-specific recombination between the two partner DNA sequences, attachment P (attP) and attachment B (attB). In order to study the recombination mechanism, a large quantity of pure integrase is required. Then, we constructed an int gene inserted recombinant plasmid (pNYL3) by using the pQE31 HIS-Tag vector, and produced the fusion protein, 6xHIS-Int from the E. coli TG1 strain carrying the pNYL3 plasmid. The recombinant protein produced was purified by phosphocellulose and Ni$^{++}$-NTA affinity column chromatographies. The result of the in vitro recombination assay using the standard reaction mixture containing 6xHIS-Int and partially purified integration host factor (IHF) showed that the 6xHIS-Int tagged recombination Integrase had the full recombination activity.

• BMB Reports
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• 제37권1호
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• pp.28-34
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• 2004

The discovery of biochemical and cellular functions of unannotated gene products begins with a database search of proteins with structure/sequence homologues based on known genes. Very recently, a number of frontier groups in structural biology proposed a new paradigm to predict biological functions of an unknown protein on the basis of its three-dimensional structure on a genomic scale. Structural proteomics (genomics), a research area for structure-based functional discovery, aims to complete the protein-folding universe of all gene products in a cell. It would lead us to a complete understanding of a living organism from protein structure. Two major complementary experimental techniques, X-ray crystallography and NMR spectroscopy, combined with recently developed high throughput methods have played a central role in structural proteomics research; however, an integration of these methodologies together with comparative modeling and electron microscopy would speed up the goal for completing a full dictionary of protein folding space in the near future.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제49권5호
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• pp.633-638
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• 2007

본 연구는 진도자견에 대한 단백질의 급여 수준이 질소평형에 미치는 영향을 조사하여 단백질 급여 표준 설정을 위한 기초 자료를 얻기 위하여 실시하였다.생후 평균 18~20주령의 진도견 암컷 12두를 대상으로 단백질 수준을 21, 23 및 25%로 설정한 실험사료를 급여하여 체중, 사료섭취량 및 분뇨 배설량을 측정하였다. 일당 증체량은 조단백질 함량 21, 23 및 25%구에서 각각 65.42, 79.58 및 99.17g으로 나타났으며 조단백질 25%구가 유의하게 높았다(p<0.05). 축적된 질소량은 각각 0.74, 0.96 및 1.31g/kgBW.75/ d로 계산되었으며, 25% 조단백질 급여구가 21 및 23% 급여구에 비하여 유의하게(p<0.05) 높은 결과를 나타내었다. 질소섭취량(x, g/d)과 질소축적량(y, g/d)간에 y = -2.519x2 +12.79x-14.79의 회귀식이 도출되었고 매우 높은 상관관계가 인정되었다(R2=0.782, p<0.05). 이 식을 이용하여 계산한 결과 자견의 유지 조단백질 요구량은 11.25g/kg BW0.75/d로 추정되었다.본 연구의 결과는 진도자견의 단백질 요구량을 설정하는데 좋은 기초 자료가 될 것으로 생각되나, 진도견의 단백질 요구량을 최종적으로 설정하기 위해서는 전 생애에 걸쳐서 성별 및 사육환경에 따른 영양소 요구량에 대한 추가적인 연구가 요구된다고 사료된다.

• BMB Reports
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• 제32권6호
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• pp.567-572
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• 1999

We have previously shown that a DNA fragment is responsible for the anticoagulatory effect of an earthworm, Lumbricus rubellus. The anticoagluant increased the activated partial thromboplastin time (APTT) and also inhibited the thrombin activity observed with either N-${\alpha}$-p-tosyl-L-arginine methyl ester (TAME) or H-D-phenyl-alanyl-L-pipecoil-L-arginine-p-nitroanilide (S-2238). Since trypsin digestion of the anticoagulant further increased the APTT, the possible presence of a regulatory protein for the anticoagulatory DNA was investigated by digesting the anticoagulant with trypsin and isolating the DNA fragment with C4-reversed phase HPLC. The DNA fragment lacking a regulatory protein was eluted in the flow-through fraction, and analyzed with thrombin and activated factor X. Activated factor X activity was more strongly inhibited than thrombin activity. For DNA digestion, we treated the anticoagulant with DNase and purified the DNA-binding protein with a FPLC Resource-S cation exchange column. The regulatory protein, with an $M_r$ of 55.0 kDa, reduced the anticoagulatory effect of the DNA fragment.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제39권3호
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• pp.242-247
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• 1992

연구배경 : Surfactant 단백은 surfactant의 물리학적 성상의 결정 및 대사를 조절하는데 있어서 중요한 역할을 한다. 유전자 발현의 조절을 연구하기 위하여서는 cDNA의 탐지자에 의한 mRNA의 정량측정이 중요하다. 방법 : 쥐의 surfactant 단백 B의 cDNA에 대한 coding 부위를 PGem 3Z 또는 4Z에 subclone하여 SP6 RNA polymerase 효소를 이용하여 antisense와 sense을 얻었다. Sense을 이용한 filter hybridization올 시행하여 정상곡선을 얻었다. Antisense는 $^{32}P$를 표지시켜 탐지자로 이용하였다. 결과 : SP-B에 대한 sense 복사체의 정상곡선은 Y=2034.9X+159.1(X=SP-BmRNA 복사체, Y=CPM)이고, 상관계수는 1.0이었다. 결론 : 이상의 결과로 filter hybridization 방법은 mRNA을 정량측정 하는데 있어서 빠르고, 재현성이 높으며, 많은 시료를 한꺼번에 시행할 수 있는 유용한 방법이다.

• 한국식품과학회지
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• 제21권5호
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• pp.726-734
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• 1989

우유 지방구막의 고밀도 표피에 결합된 지질의 조성을 분석하기 위하여 지방구막의 고밀도 표피부분을 여러 농도의 비이온성 세제 Triton X-100으로 처리하였고 세제에 용해되지 않는 물질, 즉 지방과 결합된 성분을 분석하였다. 유지방구막의 단백질, 인지질, 콜레스테롤과 ganglioside의 양은 Triton X-100의 농도가 증가함에 따라 감소하였다. 불용성 표피물질로서 butyrophilin(band 12), xanthine oxidase (band 3)와 band 16이 SDS-polyacrylamide gel을 이용한 전기영동에서 나타났다. Phosphatidyl ethanolamine, phosphatidyl choline, phosphatidyl serine, phosphatidyl inositol 및 spingomyeline 함량은 처리되지 않은 원래의 막의 것과 큰 차이가 있어 표피물질의 주요 인지질로 규명되었다. 전체 지질에서 지방산은 myristate, palmitate, stearate(주요 포화지방산), oleate, linoleate(주요 불포화지방산)이었다. 단백질에 결합된 콜레스테롤은 다른 성분에서보다 단백질에 더 견고하게 부착되어 있었다. Ganglioside의 함량은 Triton X-100의 농도가 증가함에 따라 비례 감소하였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제6권
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• pp.79-87
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• 1965

콩고오지 제조중(製造中)에 일어나는 콩 단백질(蛋白質)의 형태적(形態的) 변화(變化) 및 대두단백질(大豆蛋白質)이 Aspergillus soya가 분비(分泌)하는 protease의 작용(作用)을 받아 생성(生成)되는 peptide의 총체적(總體的)인 동향(動向)을 알기 위(爲)하여 제국중(製麴中) 경시적(經時的)으로 채취(採取)한 시료(試料)에 대(對)하여 불용성단백태질소(不溶性蛋白態窒素) 수용성단백태질소(水溶性蛋白態窒素) peptide 태질소(態窒素)를 측정(測定)한 다음 peptide군(群) 액(液)을 cross linkage가 각각(各各) 다른 여러 가지 Dowex-50을 사용(使用)하여 분자사별(分子篩別)을 한 각(各) fraction에 대하여 전질소(全窒素) amino태(態) 질소(窒素), 및 average peptide lingth을 측정계산(測定計算)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. 불용성단백태질소(不溶性蛋白態窒素) 및 peptide 태(態) 질소(窒素)는 균사발생시(菌絲發生時)까지 별변화(別變化)가 없었으나 균사발생시(菌絲發生時)부터 불용성단백태질소(不溶性蛋白態窒素)는 급격(急激)히 감소(減少)되고, peptide 태(態) 질소(窒素)는 급격(急激)히 증가(增加)되었다가 포자발생시(胞子發生時)를 한계점(限界點)으로 하여 감소율(減少率) 및 증가율(增加率)이 완화(緩和)되었다. 수용성단백태질소(水溶性蛋白態窒素)는 콩고오지 전면(全面)을 균사(菌絲)가 피복(被覆)할때까지 일정(一定)하나 그후 포자발생시(胞子發生時)를 한계점(限界點)으로 하여 증가(增加)되었다가 다시 서서(徐徐)히 감소(減少)하였다. 2. Peptide 군(郡)을 분자식별(分子篩別)한 결과(結果) 제국초(製麴初)는 각(各) fraction의 비(比)에 별(別) 변동(變動)이 없으나 균사(菌絲) 발생후(發生後)에는 X-16, X-12, X-8, X-4, X-2 fraction은 상당(相當)한 증가(增加)를 보이다가 포자잘생후(胞子發生後)에는 큰 변동(變動)이 없고 effluent fraction은 출국(出麴)까지 계속(繼續)하여 증가(增加)되고 있다.