대추나무가 대추나무 빗자루병(病)마이코플라스마(Jujube witches' broom mycoplasma)에 감염(感染)되었을 때 식물체내(植物体內)의 단백질상(蛋白質像)에 어떠한 변화(變化)가 일어나는가를 위해, 잎과 줄기조직(組織)의 단백질추출액(蛋白質抽出液)을 2-30% polyacylamide linear gradient disc gel 상(上)에서 전기영동(電氣泳動)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1) 건전조직(健全組織)과 감염조직(感染組織)의 단백질기영동상(蛋白質氣泳動像) 간(間)에는 뚜렷한 차이(差異)를 보였다. 즉, 건전엽(健全葉)에서 뚜렷하게 나타난 단백질영동대(蛋白質泳動帶) (분자량(分子量) 약(約) 50 kd)가 감염엽(感染葉)에서는 관찰(觀察)되지 않았다. 한편, 감염엽(感染葉)에서는 25 kd의 영동대(泳動帶)가, 그리고 건전엽(健全葉)에서는 198 kd의 영동대(泳動帶)가 각각(各各) 강(强)하게 나타났다. 2) 감염주내(感染珠內)의 외관상건전엽(外觀上健全葉)에서는 50 kd의 특이영동대(特異泳動帶)가 다소(多少) 약(弱)하게 나타남으로써 건전목(健全木)의 엽(葉)과 감염엽(感染葉)의 중간상태(中間狀態)의 단백질영동상(蛋白質泳動像)을 보였다. 3) 줄기의 경우 잎과는 대조적(對照的)으로, 건전(健全)줄기에 없는 특이영동대(特異泳動帶)(335 kd)가 감염(感染)줄기에서 나타났다.
마이코플라스마(MLO)에 의한 빗자루병에 감염된 대추나무에 Oxytetracycline HCl(OTC)을 수간주입했을 때 일어나는 병태해부학적 변화를 광학현미경, 형광현미경 및 전자현미경 기법을 이용하여 조사하였다. 건전엽에서와는 달리 이병엽의 주맥에서는 복, 배부의 유관동소신장부가 잘 발달되어 있는 반면 엽육세포들은 매우 작고 드물었으며 괴사되어 있었다. 또한 이병엽에서는 절부가 과도하게 형성되어 있는 반면, 본부의 분하는 억제되어 있었으며 polyphenol이 집적되어 있었다. 2,000ppm의 OTC용액 500ml를 수간주입한 대추나무는 약제주입부위의 상부에서 외관상 병징이 완전히 억제된 것으로 보였으나 유관동소신장부에 있는 세포들이 비대해져 있었으며 주맥의 2기사부에서는 사관이 괴사되어 있었다. MLO특이적 형광은 OTC 처리 감염목의 시료에서는 관찰되지 않은 반면, 무처리 MLO. 감염대추나무에서는 상당량의 MLO특이적 형광이 관찰되었다. 전자현미경 관찰에서는 감염목의 체관 및 반세포들이 붕괴되어 있었으며 유조직세포들은 커다란 전분립이 들어있는 원형질체를 갖고 있었고, OTC 처리조직들은 건전조직에 비해 비정상적인 전분축적을 나타냈다. 마이코플라스마는 감염조직의 성숙한 체관에서만 관찰되었으며 OTC 처리목의 체관에서는 전혀 관찰되지 않았다.
뽕나무 오갈병 파이토플라스마 매개곤충을 알아보기 위하여 뽕나무 재배지에서 채집된 곤충 중 흡즙성 곤충 3 종(Hishimonas sellatus, Bothrogonia japonica and Balclutha punctata)를 선발하였다. 이들 흡즙성 곤충을 뽕나무 이병주에서 흡즙시킨 다음 건전 뽕나무와 일일초로 전반시킨 결과, 마름무늬매미충(H. sellatus)과 B. punctata이 파이토플라스마를 전반하였다. 뽕나무에서는 전형적인 오갈 증상을 보였지만 일일초에서는 가지가 가늘게 늘어지며, 잎은 총생하고 작아지는 빗자루증상이 나타났다. 매개충과 매개전염시킨 뽕나무와 일일초에 대하여 R16F2n/R2 프라이머로 PCR 검정 결과 끝검은말매미충을 제외한 모든 시료에서 파이토플라스마가 검출되었다.
자낭균인 Taphrina wiesneri는 한국의 공원과 가로수에 주로 식재되는 왕벚나무에 빗자루병을 일으키는 병원균이다. 한국과 일본에서 분리한 13개의 병원균에 대해 18S rDNA 염기서열 분석을 통한 계통학적 분석과 rDNA-IGS 영역에 대한 RFLP 분석을 실시하였다. 18S rDNA 염기서열 분석을 통한 계통도 분석결과 병원균은 2그룹으로 분류되었다. Hha I 제한효소를 이용한 rDNA-IGS 영역에 대한 RFLP 분석결과 B, C, D, G 4개의 패턴으로 나타났으며, 그중 G 패턴은 새로운 패턴이었다.
Periwinkle seedlings (Cantharanthus roseus) were inoculated with jujube witches'- broom (JWB) phytoplasma via grafting to analyze the migration of JWB phytoplasmas within the host plant. The phytoplasmas were detected using nested polymerase chain reaction (PCR) and fluorescence microscopy. Fluorescence microscopy was a simple and easy method of detecting phytoplasmas; however, it was not sufficiently sensitive to detect very low phytoplasma concentrations. Therefore, the migration of JWB phytoplasma was investigated through PCR. The first migration of JWB phytoplasma from an infected tissue to healthy tissues occurred late. After grafting, the phytoplasmas moved from the inoculated twig (or scion) to the main stem, which took 28 days. Afterward, the phytoplasma migrated faster and took less than 4 days to spread into the roots from the main stem. All twigs were then successively colonized by the JWB phytoplasmas from the bottom to the top. JWB phytoplasma was detected via nested PCR in all parts of the periwinkle seedling 82 days after inoculation. Based on these results, the inoculated JWB phytoplasma appeared to migrate downward to the roots along the main stem during the early stages, and then continued to move upward, colonizing twigs along the way until they reached the apex.
대추나무빗자루병(病)의 전염경로(傳染經路)를 구명(究明)할 목적(目的)으로 실험(実驗)을 실시(實施)하여 다음과 같은 결과(結果)를 얻었다. 1. 대추나무에서 38종(種)의 가해충(加害虫)이 채집동정(採集同定)되었으며 이 중(中)에서 Mycoplasma의 매개가능성(媒介可能性)이 있는 흡수성(吸收性) 매비충류(類)는 8종(種)이었다. 이들 매미충류중(類中)에서 6~10월(月)까지 어느 지역(地域)에서나 발생밀도(發生密度)가 가장 높았던 종류(種類)는 마름무늬매미충이었고, 마름무늬매미충은 건전(健全)한 대추나무에서 보다 빗자루병(病)에 이병(罹病)된 대추나무에서 그 발생밀도(發生密度)가 훨씬 높았다. 2. 빗자루병(病)에 이병(罹病)된 대추나무분근묘(分根苗)에 14~21일간(日間) 흡즙(吸汁)시킨 마름무늬매미충을 대추나무실생유묘(實生幼苗)에 접종(接種)한 결과(結果), 접종(接種)을 개시(開始)한지 40~60일후(日后)에 상엽(上葉)이 소형화(小形化)하고, 황화(黃化)하는 이상증상(異常症狀)이 나타났다. 이들 상이증상(異常症狀)이 나타난 잎의 주맥(主脈)과 엽병조직(葉炳組織)을 전자현미경(電子顯微鏡)으로 관찰(觀察)한 결과(結果), 사관(篩管)에서 Mycoplasma가 다수(多数) 검출(検出)되었다. 그러나 건전엽(健全葉)의 조직(組織)에서는 Mycoplasma 가 관찰(觀察)되지 않았다. 따라서 대추나무빗자루병(病)은 마름무늬매미충에 의(依)해 매개(媒介)된다는 사실(事実)이 구명(究明)되었다. 3. 대추나무빗자루병(病)의 검정식물(檢定植物)을 찾을 목적(目的)으로 마름무늬매미충의 식이식물(食餌植物)을 조사(調査)한 결과(結果), 대추나무, 일일초(日日草), 당근, 셀러리, 가지, 메꽃, 호프, 자운영, 한삼넝쿨 등에서 30일이상(日以上)의 장기간(長期間) 생존(生存)을 보였고, 또 이들 식물체(植物体) 상(上)에서 산란부화(産卵孵化)를 확인(確認)할 수 있었다. 4. 일일초(日日草)에 대추나무빗자루병(病) 보독(保毒) 마름무늬매미충을 접종(接種)한 결과(結果), 접종개시후(接種開始后) 25~28일(日)에 엽맥(葉脈)이 투화(透化)되고 잎이 황화(黃化)하는 이상증상(異常症狀) 나타났다. 이들 이상증상(異常症狀)이 나타난 잎을 전자현미경(電子顯微鏡)으로 관찰(觀察)한 결과(結果), 사관(篩管)에서 Mycoplasma가 검출(検出)되었으나 건전엽(健全葉)에서는 Mycoplasma가 관찰(觀察)되지 않았다. 따라서 일일초(日日草)에 나타난 증상(症狀)은 마름무늬매미충에 의(依)해 매개(媒介)된 대추나무빗자루병(病) Mycoplasma의 감염(感染)에 의(依)한 것임이 확인(確認)되었다. 5. 대추나무빗자루병(病)에 걸린 나무에서 종자(種子)를 채취(採取)하여 본병(本病)의 종자전염여부(種子傳染与否)를 조사(調査)하였으나 종자전염(種子傳染)은 확인(確認)할 수 없었다.
대추나무 빗자루병은 1950년대에 남한지역에 대발생하여 대추 재배지를 황폐화시킨 고위험 식물병이다. 최근 전국적으로 대추 재배면적이 크게 증가하고 있어 빗자루병 대발생 위험성을 사전에 파악하기 위한 기초자료를 얻고자 2017년과 2019년에 걸쳐 보은 지역의 대추 과원에서 병조사를 하였다. 또한, 빗자루병 조기 진단에 활용할 수 있는 다양한 병징을 찾아내고, 성보싸이클린수화제(OTC, 옥시테트라사이클린칼슘알킬트리메틸암모늄 수화제, 유효성분 17%)의 수간주사 방제효과 증진을 위한 연구를 수행하였다. 그 결과 현재까지 충북 보은 지역의 대추나무 빗자루병 발병률(이병주율)은 매우 낮았으나, 발생 지역과 발생 농가를 중심으로 점차 의미 있게 증가하고 있었다. OTC 방제시험 결과 처리 시기는 대추나무 생육 초기가 가장 효과적이었다. 그러나 발병이 심한 나무에서는 수간주사 후 당해 연도에도 같은 나무의 다른 건전한 가지에서 병징이 발현되었다. 6월에 1차 수간주사를 한 처리에서 2차 수간주사는 5개월 후보다 한 달 후에 하였을 때 방제효과가 더 좋았다. 이러한 결과는 조기 병징을 활용한 진단과 이를 근거로 한 조기 방제가 빗자루병 피해를 사전에 차단하고 병 방제효과를 높이는 데 매우 효과적일 수 있음을 시사한다.
Using phytoplasma universal primer pair Pl and P7, a fragment of about 1.8 kb nucleotide sequences of 16S rRNA gene and 16S-23S rRNA intergenic spacer region, and a portion of 23S rRNA gene of jujube witches'broom (JWB) and mulberry dwarf(MD) phytoplasmas were determined. The nucleotide sequences of JWB and MD were 1,850 bp and 1,831 bp long, respectively. The JWB phytoplasma sequence was aligned with the homologous sequence of MD phytoplasma. Twenty-eight base insertions and nine base deletions were found in the JWB phytoplasma sequence compared with that of MD phytoplasma. The similarity of the aligned sequences of JWB and MD was 84.8%. The near-complete 16S rRNA gene DNA sequences of JWB and MD were 1,529 bp and 1,530 bp in length, respectively, and revealed 89.0% homology. The 16S-23S rRNA intergenic spacer region DNA sequences were 263 bp and 243 bp in lengths respectively, while homology was only 70% and the conserved tRNA-lle gene of JWB and MD was located into the intergenic space region between 16S-23S rRNA gene. The nucleotide sequences were 77 bp long in both JWB and MD, and showed 97.4% sequence homology. Based on the phylogenetic analysis of the two phytoplasmas, the JWB phytoplasma belongs to the Elm yellow phytoplasma group (16S rV), whereas, the MD phytoplasma belongs to the Aster yellow group (16S rI).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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