겨우살이가 가지고 있는 lectin의 약리작용의 가능성에 대한 연구의 일환으로, lectin을 분리 . 정제하였으며, 분자량, subunit수, 탄수화물의 조성, 단백질의 아미노산 조성, 적혈구 응집력, 탄수화물 특이성, pH 및 열 안정성등의 생화학적 특성을 연구하였다. Lectin의 분리는 0.15 M NaCl에 의한 추출, $(NH_4)_2SO_4$ 침전, sepharose 4B affinity chromatography 및 sephadex G-150 gel filtration에 의해 11.64배 정제에 0.14%의 수율을 획득하였으며, HPLC와 전기영동을 이용하여 순도를 검정하였다. Gel filtration에 의해 분석된 lectin의 분자량은 124,000 Da이였고, SDS-PAGE에 의해 분자량이 30,000과 32,000 Da인 2개의 band로 나타나서 각각 2개의 subunit를 갖는 tetramer로 확인되었다. 겨우살이 lectin의 탄수화물은 glucose, fructose, arabinose 및 xylose를 함유하고 있다. 또한 phenlylalanine, lysine, tyrosine, aspartic acid가 비교적 풍부하였고 methionine, alanine, arginine은 비교적 적었다. Lectin은 적혈구에 종 특이성을 나타내는데 겨우살이의 혈구응집반응에서는 사람혈액형간의 차이는 없었으며, 쥐에서 가장 높았고 소에서 가장 낮았으므로 동물 종간에 대한 특이성은 뚜렸하였다. Lectin은 당 특이성을 가지는데, D-galactose, D-mannose, D-lactose 및 D-raffinose에 대해 특이성을 나타내었다. 겨우살이 lectin은 pH4~7에서 안정하였으며, 5$0^{\circ}C$까지는 10~30분 열처리해도 활성이 유지되는 열 안정성 단백질이었다.
These studies were conducted to investigate the alcohol degradation effects of the extract of herbal composition (DTS20) containing Viscum album L., Lycium chinense L., Inonotus obliquus and Acanthopanax senticosus H., on the alcohol administered mice. To investigate anti-hangover effect, alcohol and alcohol dehydrogensae (ADH) concentration of blood were measured after oral administration of ethanol. The administration of DTS20 (200-500 mg/kg) had beneficial actions toward alcohol degradation in acute alcohol treated mice model. The oral administration of DTS20 showed decreased gastric mucous membrane damage produced in ethanol treated mice. In addition, intraperitoneal administration of DTS20 showed anti-inflammatory effects in inhibition tests of vascular permeability produced by acetic acid. DTS20 also reduced the concentration of nitric oxide (NO), tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ in macrophages that were activated by LPS. These results demonstrate that DTS20 possesses potential to stimulate the alcohol degradation and inhibit the inflammatory effects in mice.
We have reported that water-extracted Korean mistletoe (KM-110) had various biological activities such as antitumor and immunomodulatory activity, and the pectin fraction (KML-C) of the extract was one of major factors related to its biological functions. In this paper, we produced murine monoclonal antibody (mAb) against KML-C. The cAbs obtained were largely classified into two groups according to specificity to KML-C and ML-I, a pectin from European mistletoe. One group mAbs (9H7-D10 and 3C2-lH4) strongly reacted with KML-C, but not ML-I. In contrast, another group cAbs (8Bll-2C5, BE12-3E9 and 5E10-Fl) reacted with both KML-C and ML-1. The subisotypes of these mobs were shown to be IgGl (9H7-lD10, 3C2-lH4 and 8Bll-2C5) or IgM (8E12-3E9 and 5E10-Fl). To develop an assay system for determination of the amount of KML-C, we established the sandwich ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) method using these mAbs and horse radish peroxidase (HRP)-labelled cAbs. In various combinations of the cAbs for coated antibody and detection antibody, the sandwich ELISA quantitatively detected KML-C, showing the detection limit ranging from 7-5,000 ng/ml. Especially reproducibility (C.V) of the sandwich ELISA, in which 8E12-3E9 was used for coating antibody and 8Bll-2C5-HRP for detection antibody, was 4.59-5.83 in intra assay, and 3.9-9.4 in inter assay.
추출용매 및 방법을 달리하여 추출한 겨우살이의 생리활성을 측정하였다. 겨우살이는 microwave 방법으로 물, 50% 에탄올, 100% 에탄올의 용매를 이용하여 추출한 뒤 이의 생리활성을 측정하였다. 총 폴리페놀 함량 측정 시 원재료(slice) 추출물에 비해 분말상태(powder) 추출물의 polyphenol 함량이 높았다. 특히 50% 에탄올 추출구에서 물과 100% 에탄올 추출구보다 높은 함량을 보였다. 전자공여 작용 역시 분말(powder) 상태의 겨우살이 추출물에서 그 활성이 높게 나타났으며, 그 활성은 90% 이상으로 기준물질인 L-ascorbic acid보다 높은 결과를 보였다. 아질산염은 전자공여능과 총 폴리페놀함량과 마찬가지로 원재료(slice)보다분말(powder) 추출구에서 더 높은 소거능을 보였으며, pH의 증가에 따라 점점 감소하는 경향을 보였다. 반면 SOD는 40% 이하의 낮은 활성을 보였으며, tyrosinase 역시 20% 이하로 낮은 결과를 보였다. 결론적으로 겨우살이 추출물은 SOD 유사활성 및 tyrosinase 저해효과는 높지 않지만 우수한 전자공여능과 아질산염 소거능이 있는 것으로 판단되므로 추출 시 시료의 양이나 추출물의 농도를 조금씩 높여준다면 천연 항산화제로서 이용 가능성을 높일 수 있을 것으로 판단되었다.
George, V. Cijo;Kumar, D.R. Naveen;Suresh, P.K.;Kumar, R. Ashok
Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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제13권5호
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pp.2015-2020
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2012
Oleanolic acid (OA) is a naturally occurring triterpenoid in food materials and is a component of the leaves and roots of Olea europaea, Viscum album L., Aralia chinensis L. and more than 120 other plant species. There are several reports validating its antitumor activity against different cancer cells apart from its hepatoprotective activity. However, antitumor activity against skin cancer has not beed studied well thus far. Hence the present study of effects of OA against HaCaT (immortalized keratinocyte) cells - a cell-based epithelial model system for toxicity/ethnopharmacology-based studies - was conducted. Radical scavenging activity ($DPPH{\cdot}$) and FRAP were determined spectrophotometrically. Proliferation was assessed by XTT assay at 24, 48 and 72 hrs with exposure to various concentrations (12.5-200 ${\mu}M$) of OA. Apoptotic induction potential of OA was demonstrated using a cellular DNA fragmentation ELISA method. Morphological studies were also carried out to elucidate its antitumor potential. The results revealed that OA induces apoptosis by altering cellular morphology as well as DNA integrity in HaCaT cells in a dose-dependent manner, with comparatively low cytotoxicity. The moderate toxicity observed in HaCaT cells, with induction of apoptosis, possibly suggests greater involvement of programmed-cell death-mediated mechanisms. We conclude that OA has relatively low toxicity and has the potential to induce apoptosis in HaCaT cells and hence provides a substantial and sound scientific basis for further validation studies.
Inhibitory effect of the lectins (KML-C) isolated from Korean mistletoe (KM; Viscum album coloratum) on tumor metastases produced by murine tumor cells (B16-BL6 melanoma, colon 26M3.1 carcinoma and L5178Y-ML25 lymphoma cells) was investigated in syngeneic mice. An intravenous (i.v.) administration of KML-C (20-50 ng/mouse) 2 days before tumor inoculation significantly inhibited lung metastases of both B16-BL6 and colon 26-M3.1 cells. The prophylactic effect of 50 ng/mouse of KML-C on lung metastasis was almost the same with that of 100 $\mu$ g/mouse of KM. Treatment with KML-C 1 day after tumor inoculation induced a significant inhibition of not only the experimental lung metastasis induced by B16-BL6 and colon 26M3.1 cells but also the liver and spleen metastasis of L5178Y-ML25 cells. Furthermore, multiple administration of KML-C given at 3 day-intervals after tumor inoculation led to a significant reduction of lung metastasis and suppression of the growth of B16-BL6 melanoma cells in a spontaneous metastasis model. In an assay for natural killer (NK) cell activity. i.v. administration of KML-C (50 ng/mouse) significantly augmented NK cytotoxicity against Yac-1 tumor cells 2 days after KML-C treatment. In addition, treatment with KML-C (50 ng/mouse) induced tumoricidal activity of peritoneal macrophages against B16-BL6 and 3LL cells. These results suggest that KML-C has an immunomodulating activity to enhance the host defense system against tumors, and that its prophylactic and therapeutic effect on tumor metastasis is associated with the activation of NK cells and macrophages.
겨우살이의 농도를 25 mL/g, 50 mL/g, 100 mL/g로 추출비율을 달리하고, 추출용매로 증류수, 50% EtOH, 100% EtOH를 이용하여 추출한 후 항산화 효과 및 생리활성을 측정하였다. 전자공여 작용 측정 결과 50 mL/g의 비율로 추출한 추출물에서 전자공여능이 모두 높게 나타났고, 특히 50% EtOH 추출물이 93.27%로 비교물질인 L-ascrobic acid보다 높은 항산화 활성을 보였다(p<0.05). SOD 유사활성에서도 50 mL/g의 비율로 추출한 추출물의 활성이 가장 높게 측정되었지만, 모든 추출물이 40%미만의 활성을 보였다(p<0.05). 총 폴리페놀 함량의 경우 25 mL/g, 50 mL/g, 100 mL/g의 비율로 추출한 모든 추출물에서 증류수를 추출용매로 사용하였을 때 가장 많이 함유하고 있었고, 50 mL/g의 비율로 추출한 추출물은 모든 추출용매의 조건에서도 가장 높은 폴리페놀 함량을 나타냈다(p<0.05). 아질산염 소거능을 측정한 결과에서 50% EtOH를 이용한 모든 추출물이 80% 이상의 높은 소거능력을 보였고, 특히 산성조건인 pH 1.2에서 모든 추출물이 가장 높은 소거능을 나타냈다(p<0.05). Tyrosinase 활성 저해능의 경우는 모든 농도의 겨우살이가 10%미만의 매우 낮은 저해 효과를 보였다. 이와 같은 결과를 비추어 볼 때, 겨우살이가 적정의 농도에서 높은 항산화 효과 및 생리활성을 갖고 있으며, 이를 극대화할 수 있는 추출조건을 찾아 천연 항산화제로서의 개발 및 이용이 가능할 것으로 사료되어진다.
This study was designed to develop microencapsulated Korean mistletoe extract, to determine the stability in vitro and to examine its application in milk. Coating materials used were polyglycerol monostearate (PGMS) and medium-chain triacylglyderol (MCT). The highest efficiency of microencapsulation was 78.3% with 15:1:40 (w/w/v) as PGMS : mistletoe extract : distilled water and 66.1% with 15:1 (w/w) as MCT : mistletoe extract. The size of microcapsule was about 30.0 and $19.5{\mu}m$ with PGMS and MCT, respectively. When microcapsules of mistletoe extract were incubated in simulated gastric fluid at pH 2 for 60 min, 14.8 and 17.2% of lectin was released from capsules which were coated with PGMS and MCT, respectively. Comparatively, 83.2 and 87.3% of lectin was released in simulated intestinal fluid (pH 8) after 60 min incubation of capsules coated with PGMS and MCT, respectively. The subsequent study determined the changes of physicochemical and sensory characteristics of milk with fortification of the mistletoe extract microcapsules during 12 day storage. TBA value was significantly lower in microcapsule-added groups than in the uncapsulated mistletoe extract-added group during the storage. When 100 ppm microencapsulated mistletoe extract was added, the L-, a- and b- values and viscosity were not significantly different from those of the control. In addition, the release of lectin from mistletoe extract over 12 days was 8.3 and 9.5 mg/100 ml in milk containing microcapsules made by PGMS and MCT, respectively. All sensory attributes showed a significant difference in uncapsulated mistletoe extract-added milk compared with other groups. The present study indicated that microcapsules of Korean mistletoe extract could be applied to milk and microcapsules coated with PGMS were effectively released in a simulated intestinal environment.
This study was designed to observe the effects of Korean mistletoe(Viscum album L. var. coloratum Ohwi) hot-water extract administration on the improvement on the lipid components, apolipoprotein and blood pressure level in spontaneously hypertensive rats (SHR, Wistar strain, male) fed the experimental diets for 33 days. Concentrations of total cholesterol, triglyceride (TG), LDL-cholesterol, free cholesterol and atheroscieotic index in serum were significantly lower in the Korean mistletoe extract administration group [group KM(Korean mistletoe 10.0 g% hot-water extract)] than those in the control group. In the ratio of HDL-cholesterol concentration Korean mistletoe 10.0% hot-water extract administration group were higher percentage than in the control group. However, concentrations of total cholesterol and TG in liver and brain were significantly lower in the group KM than those in the control group. But the components of apolipoprotein (Apo) A-I and Apo A-II in serum were significantly higher in the KM group than in the control group. However, components of Apo C-II, Apo C-III, Apo E and ratio of Apo B to Apo A-I in serum were fairly reduced in the group KM than in the control group. The levels of systolic and diastolic blood pressure were significantly lower in KM cup than control group. From these results, Korean mistletoe hot-water extract administration were effective on the improvement of the lipid components, coronary heart disease and hypertension in spontaneously hypertensive rats. And particularly, Korean mistletoe extract administration were more effective as a therapeutic regimen for the control of blood pressure in hypertension.
Antitumor activity of Korean mistletoe extract (KM-110) and European commercial mistletoe preparation (Helixor) was investigated. KM-110 showed the cytotoxic effect that it is high for various tumor cell lines and normal splenocytes in comparison with Helixor. Administration of two mistletoe extracts ($100{\mu}g$) to mice did not show any significant changes on the level of glutamic-oxaloacetic transaminase (GOT), glutamic-pyruvate transaminase (GTP), blood creatinine (CRE) and blood urea nitrogen (BUN) in sera. The culture supernatant of macrophages stimulated with KM-110 inhibited effectively tumor growth whereas Helixor had little effect. Administration of KM-110 or Helixor resulted in a effective inhibition of lung metastasis after the i.v. inoculation of colon 26-M3.1 lung carcinoma, B16-BL6 melanoma and L5178Y-ML25 lymphomas. In all cases, the mice treated with KM-110 showed more effective anti-tumor metastatic activity than the mice of Helixor. These results suggest that Korean mistletoe extracts, KM-110 might be used as an alternative methods having antitumor activity like European mistletoe preparation, Helixor.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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