Park, Rackhyun;Hwang, Ji Young;Lee, Kang Il;Namkoong, Sim;Choi, Seuk-Keun;Park, Songyong;Park, Hosun;Park, Junsoo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제25권2호
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pp.268-273
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2015
The fluorescent-antibody-to-membrane-antigen (FAMA) test is regarded as the "gold standard" to detect protective antibodies to varicella-zoster virus (VZV) because of its high sensitivity and specificity. Because the classic FAMA test uses an infectious virus for detection of antibodies to VZV, it is labor-intensive, and also requires special equipment for handling the virus. For this reason, we attempted to develop a simple and safe FAMA assay. Because VZV glycoprotein E (gE) is one of the major VZV glycoproteins, we used the gE protein for the FAMA test (gE FAMA). Here, we demonstrate that overexpression of gE in HEK293T cells can be used to measure antibodies in human serum, and that gE FAMA titers are closely correlated with gpEIA ELISA data. These results indicate that our gE FAMA test has the potential to measure antibodies to VZV.
Gladioli (Gladiolus hybridus) showing flower colour breaking, leaf mosaics, necrotic fleck, and dwarfing or lack of visible symptoms were collected from gladioli growing areas in Taegu and Kyungpook province, Korea. The two viruses isolated from the naturally infected gladioli were identified as ban yellow mosaic virus (BYMV) and clover yellow vein virus (CIYVV) by their host range, immunosorbent electron microscopy (ISEM), enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), direct tissue blotting immunoassay (DTBIA) and intracellural symptoms. In ultrathin sections of BYMV and CIYVV infected tissues, laminated aggregate-type inclusions, cytopalsmic bodies and nuclear inclusions as well as filamentous virus particles were observed in the cytoplasm of parenchyma cells. By DTBIA and ISEM, BYMV was detected in all tested gladiolus plants showing severe or mild mosaic symptoms, whereas CIYVV were mainly detected from those of mild mosaic symptoms. BYMV is the most prevalent in commercial gladioli and present major production problems. Detection sensitivity of BYMV and CIYVV in crude sap of infected gladiolus leaves by ISEM was about twice compared with ELISA. In a comparison of ELISA, ISEM, DTBIA, BYMV was detected in same degree by DTBIA in samples where sap extracts were positive in both ELISA and ISEM. DTBIA provides a specific, rapid, and simple tool for large-scale diagnosis of BYMV.
This study was undertaken to establish reliable diagnostic-procedures for the microbiological monitoring of laboratory animals. Murine(mice and rats) antibodies against hemagglutinating virus of Japan(HVJ), mouse hepatitis virus(MHV) and Mycoplasma pulmonis(Mp) were detected sensitively and specifically in experimentally and naturally infected animals' sera by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), using urease conjugated antimurine immunoglobulin. The sensitivity and specificity of the complement fixation test which has been apllied widely for serodiagnosis of HVJ, MHV and Mp infections were apparently lower than those of ELISA. From these results, the ELISA was found to be available for the serodiagnosis of HVJ, MHV and Mp infections in mice and rats.
A total of 170 litters (575 samples) of aborted and stillbirth fetuses submitted to the Gyeongsangbuk-Do Veterinary Service Laboratory (GVSL) between January 2006 and December 2010 from pig farms in Gyeongbuk province were studied to identify porcine abortion- and stillbirth-associated viruses such as Porcine parvovirus (PPV), Encephalomyocarditis Virus (EMCV), Japanese Encephalitis Virus (JEV), Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV), and Aujeszky's Disease Virus (ADV). Virus was not detected by PCR in 36 litters, but viral antibody was detected by HI and ELISA in 93 litters. The majority of etiological viruses were PPV (67 litters, 39.4%), EMCV (50 litters, 29.4%), PRRSV (15 litters, 8.8%), and JEV (11 litters, 6.5%); ADV was not detected by either PCR or ELISA. Single infection occurred in 52 litters (30.6%), co-infection occurred in 41 litters (24.1%), and unknown cases with no detection of any of the five viruses occurred in 77 litters (45.3%).
Sixty eight wild rats were caught from Seoul, Kyonggi, Kangwon, Cholla, and Kyongsang provinces in Korea. All of them were confirmed in the same species, Rattus norvigicus. All of sera from wild rats were examined by indirect immunofluorescent test against Hantaan-related virus. Detection of anti-body to Hantaan-related virus were 4 out of 68 rats(5.9%), including 2 of 8(25.0%) rats in Kangwon and 2 of 20 rats(10.0%) in Kyongsang province. No difference of the sero-positive rates between sex of rats tested to Hantaan-related virus was recognized. According to age, four rats with antibodies(1:320~640) to Hantaan-related virus belonged one subadult, one young adult, one middle aged adult, and one old adult, respectively.
Kim Soo Jin;Oh Hae Keun;Song Young-Hwan;Chung Hyun-Do;Kim Young-Tae;Park Nam-Kyu;Choi Tae-Jin
Fisheries and Aquatic Sciences
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제1권2호
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pp.187-191
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1998
Chemotherapy can not be applied for the control of fish viral diseases because viruses depend on host machinery for their replication. Although new control strategies including vaccination are under development, avoidance of virus introduction by rapid and correct diagnosis is the best way of fish viral disease control. Although observation of virus particles with an electron microscope is an easy method for virus detection, it take a few days for the sample preparation. In order to shorten the sample preparation time, microwave radiation was applied in the procedure. With this method, 15 seconds was enough for fixation of virus infected fish samples or cultured cells inoculated with infectious hematopoietic necrosis virus, which takes 2-4 hours with routine methods. Also four minutes was enough for polymerization of embedding resin which takes 24-48 hours with routine methods. Samples prepared with microwave were good enough for direct electron microscopic observation and immunogold labeling assay.
Immunomagnetic separation of virus coupled with .reverse transcription-polymerase chain reaction (IMS-PCR) was performed with infectious hematopoietic necrosis virus (IHNV). A DNA fragment of expected size was synthesized in the RT-PCR with total RNA extracted from IHNV inoculated CHSE-214. In a SDS-PAGE analysis, a protein band of over 70kDa was detected from non-infected cells and cells inoculated with IHNV and infectious pancreatic necrosis virus (IPNV). This protein was detected in the Western blot analysis probably because of non-specific reaction to monoclonal antibody against IHNV nucleocapsid protein. In the immunomagnetic separation, magnetic beads coated with monoclonal antibody against the IHNV nucleocapsid protein was incubated with supernatant from IHNV inoculated CHSE-214 cells. During this process, the non-specifically reacting protein could be removed by washing the magnetic bead with PBS in the presence of an external magnetic field, and viral proteins were detected from the remaining, cleaned magnetic beads. It was necessary to extract viral RNA from the captured virus particles before RT-PCR, and no DNA product was detected when the captured virus was only heated 5 min at $95^{\circ}C$. A PCR-product of expected size was synthesized from IMS-PCR with magnetic beads double coated either by goat anti-mouse IgG antibody -monoclonal antibody or streptavidin - biotin conjugated monoclonal antibody.
2008~2009년에 강원, 충남, 제주 지역의 백합 재배 농가에서 바이러스 감염 증상을 보이는 백합의 잎과 구근을 채취하였으며 RT-PCR 방법으로 Lily mottle virus (LMoV), Lily symptomless virus (LSV), Cucumber mosaic virus (CMV) 등 3 종류의 바이러스를 검출 하였다. LSV 12주, LMoV 20주, CMV 1주가 검출 되었으며 LSV에 감염된 12개의 식물체 중 7개에서는 LMoV도 검출되어 복합 감염된 것을 확인하였다. LMoV와 LSV에 의한 복합 감염은 엽맥투명화, 잎말림, 반점, 모자이크, 황화 줄무늬 등 단독 감염보다 심각한 병징을 나타내었으며 좋지 않은 환경에서 저장된 구근에서도 복합 감염이 관찰되었다. 채집된 식물체는 LMoV 감염이 가장 많았으며 Lily virus X(LVX)에 의한 감염은 검출되지 않았다. 7개 분리주의(LMoV 4주, LSV 2주, CMV 1주) 외피 단백질 유전자를 증폭한 후 염기서열을 분석하여 국내에서 발표된 백합 바이러스 염기서열(LSV:AJ516059, CMV: AJ296154)과 비교 하였으며 LMoV는 국내에서 처음으로 염기서열을 결정하여 기존에 보고된 염기서열(AJ564636)과 비교하였다. 분리주는 기존에 보고된 바이러스와 95~99%의 뉴클레오티드 염기서열 유사성을 보였으며, 이들 분리주의 분자 생물학적 특성을 밝히고 신속하고 정확한 바이러스 진단을 위해서는 전체 염기 서열 분석이 필요한 것으로 판단되었다.
카네이션은 세계 3대 절화용 화훼작물의 하나로, 농가 생산액 210억 원에 이르는 주요작물이다. 이들은 절화, 종자, 묘 및 삽수의 4 품목으로 수출입 되고 있다. 카네이션과 같은 영양번식성 작물의 경우, 증식하는 과정 중에 바이러스의 확산과 전파가 용이한데, 우리나라에서는 카네이션괴저바이러스(CNFV)와 카네이션둥근반점바이러스(CRSV)를 식물검역 바이러스로 지정하여 수입검사를 수행하고 있다. 본 연구에서는 CNFV와 CRSV를 신속, 정밀하고 쉽게 진단할 수 있는 특이적인 프라이머를 고안하였으며, 높은 검출 감도를 가지는 nested 프라이머 조합을 개발하였다. CNFV를 검사하기 위해 최종 선발된 특이적인 프라이머는 2 세트로 288과 447 bp를, CRSV를 검사하기 위해 최종 선발된 특이적인 프라이머는 2 세트로 503과 549 bp를 증폭하였다. CNFV의 nested는 2 세트 모두 147 bp로 동일하며, CRSV는 각각 395와 347 bp의 밴드를 증폭하였다. 또한, 실험의 신뢰도를 높이기 위하여, 증폭산물에 염기서열 6개를 삽입한 플라스미드를 제작하여 양성대조구로 활용하였다. 본 연구에서 개발한 방법은, 향후 CNFV와 CRSV에 대한 신속, 정밀한 국경검역을 지원할 수 있을 것이라고 기대된다.
최근 컴퓨터의 사용이 보편화되면서 악의적 사용자에 의해 발생하는 컴퓨터 바이러스와 해킹에 의한 피해가 급속히 증가하고 있다. 남의 컴퓨터에 침입하는 해킹이나 데이터를 파괴하는 컴퓨터 바이러스에 의한 피해를 막기 위해 최근에 생명체의 면역시스템의 특징을 이용해 인공면역계를 구성해 시스템 침입탐지와 바이러스 탐지 및 치료에 대한 연구가 활발히 진행 중에 있다. 생체 면역계는 외부에서 침입해 세포나 장기에 피해를 주는 물질인 항원을 스스로 자기세포와 구분해 인식.제거하는 기능이 있다. 이러한 면역계의 특징인 항원을 인식하는 기능은 자기세포의 확실한 인식을 가지고 있는 상태에서 다른 물질을 구분하는 자기.비자기 인식방법으로 똘 수 있다. 본 논문에서는 생체 면역계에서 세포독성 T세포의 생성과정의 하나인 Negative 및 Positive Selection을 모델링하여 침입에 의한 데이터 변경과 바이러스에 의한 데이터 감염 등을 탐지할 때 가장 중요한 요소인 자기 인식 알고리즘을 구현한다. 제안한 알고리즘은 큰 파일에서의 Detection을 구성하기 용이한 점을 가지며 국소(cell)변경과 블록(string)변경에 대한 자기인식률을 통해 알고리즘의 유효성을 검증한다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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