Many people living in Asia countries, particularly Korea, Japan and China, have consumed very widely fresh seafood products, such as shrimps, oysters, mussels and other marine invertebrates and fishes, without any heating or cooking. A variety of Vibrio spp., including V. parahaemolyticus, V. cholera. V. vulnificus, and V. fluvialis, lives in these seafoods and cause great problems associated with human disease. A strong antimicrobial agent to effectively inhibit the growth of these pathogenic bacteria in in vivo or in vitro is urgently need for preventing fish and human diseases. (omitted)
비브리오균은 해양 및 하구 환경에서 상재하는 균으로 그람 음성 간균, 호염성, 비포자형성의 특징을 가지고 있다. 질병과 관련된 균주로는 Vibrio parahaemolyticus, Vibrio vulnificus, Vibrio cholera 등이 있다. 매년 어패류의 섭취 등을 통해 식중독 사고가 빈번하게 발생하고 있으며, 이에 본 연구에서는 서해안 6곳에서 패류를 채취하여 비브리오균의 분포도를 모니터링하고, 이들의 항생제 내성을 분석하였다. 총 120건의 패류를 TCBS 평판배지와 API 20E kit 기법으로 동정하였을 때 23.3%의 시료에서 비브리오균이 검출되었다. 이들 분리균주들의 항생제 내성을 16종의 항생제에 대해 분석한 결과 82.1%가 각각 vancomycin과 ampicillin에 대해 내성을 보였고, rifampin (71.4%)과 cephalothin (53.6%)에 대한 내성비율도 다른 항생제들에 비해 상대적으로 높은 것으로 나타났다. 분리균주들의 항생제 감수성은 chloramphenicol (92.9%), sulfamethoxazole/trimethoprim (92.9%)과 tetracycline (96.4%)에 대해 가장 높았다. 분리균주들의 약 71.4%가 vancomycin과 ampicillin을 포함하여 3개 이상의 항생제에 대해 다중내성을 보였다.
The members of the genus Vibrio include harmless aquatic strain as well as strains capable of causing infections in human and fish. Pathogenic mechanisms are only understood for Vibrio cholerae O1 and O139 and not for the majority of Vibrio species. Twelve clinical and nonclinical strains were examined by in vitro and in vivo experiments for the importance of extracellular enzymes as a virulence determinant of Vibrio species. In vivo cytotoxicity assay was performed by injecting approximately $10^{8}$ cells/mL into mice (BALB/c). V. harvyi and V. vulnificus showed 100% lethality within 3hr after bacterial injection. V. fluvialis and four strains of V. parahaemolyticus showed 50% lethality within 4hr. V. mimicus, V. alginolyticus and V. furnissii revealed 30% lethality within 9hr. Nonclinical strains, V. campbellii and V. ordalii, did not show any lethality. In vitro protease and hemolytic activities were also good indicators for clinical and nonclinical strains of Vibrio species. The clinical strains showed much higher activities than nonclinical strains. The activity of some clinical strains of re-isolates was evidently increased. Most clinical strains had $\beta$ hemolytic activity. The results demonstrate that the prevalent distribution of extracellular proteases in pathogenic Vibrio sp. implies their importance as a virulence determinant.
The histone-like nucleoid structuring protein (H-NS) is an abundant global regulator of environmentally controlled gene expression. Herein, we demonstrate that H-NS represses the expression of LeuO, the master regulator of the cyclic(Phe-Pro)-dependent signaling pathway, by directly binding to the upstream region of the gene. H-NS binds to a long stretched region (more than 160-bp long), which overlaps with binding sites for ToxR and LeuO. A high quantity of H-NS outcompetes ToxR for binding to the cis-acting element of leuO. However, our footprinting analyses suggests that the binding of H-NS is relatively weaker than LeuO or ToxR at the same molarity. Considering that the DNA nucleotide sequences of the upstream regions of leuO genes are highly conserved among various Vibrio, such patterns as those found in V. vulnificus would be a common feature in the regulation of leuO gene expression in Vibrionaceae. Taken together, these results suggest that, in species belonging to Vibrionaceae, H-NS regulates the expression of leuO as a basal stopper when cFP-ToxR mediated signaling is absent.
Vibrio species are generally recognized as pathogens predominant in seafood along coastal areas. The food industry has sought to develop efficient microbial detection methods. Owing to the limits of conventional methods, this study aimed to establish a rapid identification method for Vibrio isolated from Korea, based on matrix-assisted laser-desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS). Four different preparation procedures were compared to determine the appropriate means to pretreat Vibrio species, using 17 isolates and five reference strains. Extended direct transfer and full formic acid extraction methods using bacterial colonies on agar plates revealed very low identification rates. Formic acid and trifluoroacetic acid (TFA) extractions using bacterial broth cultures were also performed. All Vibrio isolates and reference strains prepared by TFA extraction were successfully identified to the species level (17/22, 77.3%) and to the genus level (5/22, 22.7%). Thus, TFA extraction was considered the most appropriate method to pretreat Vibrio species for MALDI-TOF MS. The remaining 33 isolates and two reference strains were prepared by TFA extraction and analyzed by MALDI-TOF MS. Overall, 50 isolates were identified to the species level (40/50, 80%) and to the genus level (10/50, 20%). All isolates were identified as 43 V. alginolyticus, six V. parahaemolyticus, and one V. vulnificus species. V. alginolyticus and V. parahaemolyticus were isolated from fish offal (87.5% and 12.5%, respectively), seawater (91.3%, 8.7%), and shellfish (62.5%, 37.5%), whereas V. alginolyticus and V. vulnificus were isolated from sediment (90.9% and 9.1%, respectively). This study established a reliable system of MALDI-TOF MS preparation and analysis for Vibrio identification.
The enterobacterial repetitive intergenic consensus (ERIC)-PCR is a recently described DNA fingerprinting technique based on amplification of repetitive element distributed in bacteria. We applied of ERIC-PCR to clinical isolates of Vibrio parahaemolyticus and other bacteria associated diarrhea. Twenty isolates of V. parahaemolyticus were used for intragenic genotyping, which were isolated from 2001 to 2002 in Chungbuk National University hospital. For interspecies genotyping, V. vulnificus, V. alginolyticus, V. parahaemolyticus, Escherichia coli, Salmonella and Shigella spp. were used. The genotyping were analyzed by ERIC-PCR. The genotyping of V. parahaemolyticus were grouped two major pattern (A, B) and were subdivided into 10 subtypes (A1, A2, B1-B8) by ERIC-PCR. These method distinctly differentiated bacterial species associated diarrhea. Those results show that ERIC-PCR can be reliable and efficient method for genotyping of V. parahaemolyticus and bacteria associated diarrhea.
우수한 생균제를 개발하기 위하여 안전성이 알려진 유산균을 대상으로 인체의 분변으로부터 300여 균주를 분리하고 내산성, 내담즙성, 내열성, 항균력, 항암 및 항바이러스 효과를 가지는 균주들을 선발하여 생균제 특성을 나타내는지를 알아보기 위해 본 실험을 수행하였다. 인체에서 분리한 여러 균주 중 Miny-148 균주는 낮은 pH 및 높은 담즙산에 대한 내성, 열처리에 대한 열안정성을 지녀 기초적인 probiotic 특성을 가진 균주로 선발되어, Lactobacillus pentosus (99.9% 상동성)로 동정되었다. 항균력 실험에서 Escherichia coli O157:H7을 비롯한 Shigella flexneri, Bacillus anthracis, Staphylococcus aureus, E. coli, Vibrio cholerae, V. vulnificus, Salmonella typhimurium, 그리고 및 methicillin-resistant S. aureus (MRSA) 균주 8종 등 총 16종의 병원성세균을 억제하였다. 또한 Miny-148은 결장암 세포인 HT-29 cell을 억제하였을 뿐 아니라, transmissible gastroenteritis virus의 생육을 저해하여 세포변성 억제효과를 가진 우수한 probiotic 특성을 지닌 균주로 분석되었다.
The Serranidae is high-quality fish species with good meat quality and is traded at high price, and is attracting attention in South Korea as a cultured species that creates high added value. However, the high-density fish farming for mass production increases the risk of mass mortality due to infectious diseases, leading to enormous economic losses. Therefore, in order to safely prevent and protect farmed fish from serious infectious diseases, it is necessary to conduct disease monitoring on a regular basis. In this study, Hyporthodus septemfasciatus, Epinephelus moara, and the hybrid longtooth grouper (E. moara ♀×E. lanceolatus ♂) were collected once a month from fish farm of Garorim and Aquabiotech Co., Ltd for a total of six months, from July to December 2023. We investigated infections of five species of bacterial diseases, including Flavobacterium columnare, six species of viral diseases, including LCDV (lymphocystis disease virus), and parasitic pathogens in grouper farms. As the result, Vibrio vulnificus and V. harveyi were detected in H. septemfasciatus in August, in the case of viral diseases, NNV was detected in H. septemfasciatus from July to August using RT-PCR or PCR. Finally, In the case of parasitic diseases, Tricodina sp. was detected in E. moara and the hybrid longtooth grouper from August to December.
In an attempt to develop a method for rapid and accurate identification of six Vibrio species that are clinically important and most frequently detected in Korea, 16S rDNA restriction fragment length polymorphism (RFLP) of Vibrio type strains, as well as environmental isolates obtained from the Korean coastal area, was analyzed using ten restriction endonucleases. Digestion of the 16S rDNA fragments amplified by polymerase chain reaction (PCR) with the enzymes gave rise to 2~6 restriction patterns for each digestion for 47 Vibrio strains and isolates. An additional 2~3 restriction patterns were observed for five reference species, including Escherichia coli, Aeromonas hydrophila, A. salmonicida, Photobacterium phosphoreum, and Plesiomonas shigelloides. A genetic distance tree based on RFLP of the bacterial species correlated well with that based on 16S rDNA sequences. The very small 16S rDNA sequence difference (0.1%) between V. alginolyticus and V. parahaemolyticus was resolved clearly by RFLP with a genetic distance of more than 2%. RFLP variation within a species was also detected in the cases of V. parahaemolyticus, V. proteolyticus, and V. vulnificus. According to the RFLP analysis, six Vibrio and five reference species were assigned to 12 genotypes. Using three restriction endonucleases to analyze RFLP proved sufficient to identify the six pathogenic Vibrio species.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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