2001년 경북지역 콜레라 유행시 설사환자에서 V. cholerae O1 El Tor형 90주를 분리하였다. 분리균을 대상으로 ctxA, tcpA, hlyA gene에 대한 multiplex-PCR 시험에서는 분리균 모두에서 302, 223, 471 bps크기의 DNA 증폭산물 band를 확인하였다. ctxA 및 ctxB gene 부위의 유전자 염기서열 비교에서 분리균과 GenBank에 수록된 균간의 유형의 차이를 보였다. PFGE typing 실험에서는 분리균 모두에서 동일한 amplicon 단편을 나타내었다. 또한, 2002년 8월부터 10월까지 콜레라균 서식가능성 규명을 위해 경북 동해안 일대에서 plankton 시료채취 및 V. cholerae O1 및 V. cholerae O139의 rfb 및 CT gene 검출을 위한 multiplex-PCR 확인실험에서는 ctxA gene의 DNA band는 일부 검출되었으나, V. cholerae O1 및 V. cholerae O139는 분리되지 않았다. 험에서 ctxA gene DNA band는 검출되었으나, V. cholerae O1 및 V. cholerae O1는 분리되지 않았다.
Vibrio cholerae non-O1 49균주와 V. Vibrio cholerae non-O1, V. mimicus, V. vulnificus와 V. parahaemolyticus의 균체 지방산(fatty acid methyl ester; FAME)을 gas liquid chromatogrphy로 분석하였다. 이들 분석자료를 통계학적으로 처리하여 Vibrio 종과 V. cholerae의 혈청형별 유연성을 비교 검토하였다. 검출된 지방산은 모두 41종이었고 분포량이 많은 것은 16:0, 16:1 cis 9, 18:1 trans 9/16/cis 11과 15:0 iso 2 OH/16:1 cis 9였다. 검출된 지방산 중에서 35종은 V. cholerae를 동정하는데 주요한 인자로 작용되었다 지방산분포를 UPGMA(비가중수리분석)으로 dendrogram을 작성한 결과 V. cholerae non-O!은 V. cholerae O1보다 V. choleare non-O1 중에서 O2, O5, O8, O10, O14, O27, O37, O39, O45와 O69의 총 10종류 혈청을 대상으로 지방산 조성에 의한 유사성을 검토한 결과 유사도가 92% 이상 수준에서 7개의 아종을 형성하여 혈청형과 지방산 조성간에는 유의할 만한 상관관계가 있었다. 따라서 V. cholerae non-O1의 동정 및 역학적인 조사시 지방산 분석은 유용하게 활용될수 있음을 알 수 있다.
새로운 식중독 원인균으로 알려지고 있는 V cholerae non-O1과 V mimicus의 분포와 서식 조건을 밝히고자 금강 하구에서 1993년 3월 26일부터 1994년 2월 22일까지 수질 환경과 V cholerae non-O1 및 V mimicus의 분포를 조사한 결과는 다음과 같다. 1. V cholerae non-O1은 해수 54개 시료에서 $16.7\%$, 뻘 49개 시료에서 $6.1\%$, 전체 $11.7\%$가 검출되었으며 V mimicus는 해수 54개 시료에서 $11.1\%$, 뻘 49개 시료에서 $10.2\%$, 전체 $10.7\%$가 검출되었다. 2. V cholerae non-O1과 V. mimicus는 수온 $24^{\circ}C$이상, 염도 $10\%o$ 이하의 기수에서 주로 검출되었으나, 수온이 $3.5^{\circ}C$인 1월에 뻘에서 검출되었다. 3. V cholerae non-O1과 V. mimicus의 서식에 영향을 주는 주요 인자는 온도, 염도 및 유기물질의 오염이며, V. cholerae non-O1은 V. mimicus보다 염도 변화에 대한 적응력이 더 높았다.
수입 냉동어패류에서 24주의 Vibiro 균주를 순수 분리하여 그들의 생리, 생화학적 특성에 따라 동정한 결과 V. cholerae non-O1과 V. diazotrophicus가 각 2주, V. hollisae 1주, V. natriegens 5주, V. fluvialis 8주, V. nereis 4주인 것으로 밝혀졌고 2주는 Vibirio속 균주가 아닌 것으로 나타났다. 이 균주들을 API-2OE kit로 동정한 결과는 위의 결과와 매우 달라, V. cholerae로 동정된 2주와 fluvialis로 동정된 5균주의 경우에만 결과가 일치하였고 나머지는 Vibrio속이 아닌 것으로 분석되었다. 식품류에서 V. cholerae가 검출된 점에 주목하여 이 분리균들의 동정을 보다 정확히 하기 위하여 분리균들의 165 rRNA를 증폭시켜 이들의 RFLP를 분석하였다. 그 결과, r cholerae로 동정된 두 균주는 동일한 RFLP양상을 갖고 있었으며, V. cholerae보다는 V. proteolyticus의 RFLP에 보다 가까운 것으로 나타났다. 따라서 식품류의 병원균 검색을 보다 정확하고 신속하게 할 수 있도록 효율적인 검색 방법의 개발이 시급하다고 하겠다.
Park, Shin-Young;Heo, Yun-Jeong;Kim, Kun-Soo;Cho, You-Hee
Molecules and Cells
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제20권3호
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pp.409-415
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2005
Infection of Drosophila melanogaster adults with 6 Vibrio species revealed that V. cholerae was lethal (100% mortality) within 20 h as a result of systemic infection. Avirulent infection by V. vulnificus restricted the subsequent virulent infection by V. cholerae. The immediate transcription of antimicrobial peptides (AMPs), most notably Attacin A, was delayed in V. cholerae infection compared to V. vulnificus infection. Ectopic expression of Attacin A and Metchnikowin enhanced the survival of D. melanogaster upon V. cholerae infection. These results suggest that AMPs are important in the response to infections by Vibrio species and that the signaling pathways governing their expression may be targeted by V. cholerae virulence factors to elude the innate immunity of Drosophila.
The effects of 0.5∼1.0% acetic acid, 0.5% laurice acid, or 0.5% monolaurine against Vibrio cholerae non 01 in flatfish strips stored at 15$^{\circ}C$ were assessed. Control strips were dipped in diatilled water only for 3 min. All treatments significantly (P<0.05) reduced the levels of V. cholerae at initial day. The counts of V. cholerae in flatifish treated with either lauric acid or monolurine were a significantly different (P<0.05) from those of acetic acid treatment after 2 days of storage. The counts of V. cholerae in treatments of 0.5% laurice acid after dipping in 1.0% acetic acid for 3 min were lower than those of treatments with 0.5% luarice acid for 3 min after dipping in 0.5% acetic acid for 3 min. Treatments with 0.5% monolurine for 3 min were not effective in lowering (P<0.05) the counts of V. cholerae after 3 days compared to the control.
수온 $25^{\circ}C$ 부근의 $7\~8$월에 걸쳐 해수로부터 V. cholerae non-O1을 분리하여 분리된 균주 중 용혈활성이 가장 확실한 균주를 선정하여 V. cholerae non-O1 FM-3으로 명명하고 이 균의 생육인자와 항생제에 대한 감수성을 조사하였다. 1. 분리균주 (V. cholerae non-O1 FM-3)는 Gram 음성간균으로 운동성이 있으며, Voges-Proskauer test 양성으로 galactose와 sucrose를 분해하고 arabinose, lactose, salicin을 분해하지 못하며, CAMP test 양성으로서 표준균주와 동일한 생화학적 특성을 나타내었다. 2. $4\~50^{\circ}C$의 범위에서 생육에 대한 영향을 조사한 결과, 표준균주와 분리균주 모두 $4^{\circ}C$와 $50^{\circ}C$에서는 생육이 불가능하였으나 $15\~45^{\circ}C$의 온도범위에서는 생육하였으며 두 균주의 증식 최적조건은 $37^{\circ}C$로 나타났다. 특히 생육온도 범위내에서 분리균주는 표준균주보다 높은 증식율을 나타내었다. 3. $0\~5.0\%$의 식염농도에서 생육에 대한 영향을 조사한 결과, 표준균주와 분리균주 모두 $0\~1.0\%$식염농도에서 증식율이 가장 높게 나타났으며, 표준균주보다 분리균주의 증식속도가 약간 빠른 경향을 나타내었다. $3\%$식염농도에서도 표준균주에 비해 분리균주가 증식율이 높았다. 한편, $5\%$의 식염농도에서 표준균주는 생육이 불가능하였으나 분리균주는 미약하나마 증식하는 것으로 나타났다. 4. $pH\;5.0\~10.0$의 범위에서 생육에 대한 영향을 조사한 결과, $pH7\~9$의 범위에서 표준균주와 분리균주는 모두 잘 증식하였으며, 특히 pH8.5에서 가장 높은 증식율을 나타내었다. 한편 pH6.0과 pH10.0에서는 증식율이 감소하였고, pH5.0에서는 전혀 증식하지 않았다. 5. 표준균주와 분리균주는 모두 vancomycin, oxacillin, colistin, polymyxin B, sulfadiazine 등의 항생제에 대해서는 내성을 나타내었고, 그 외 다른 항생제에 대해서는 민감한 것으로 나타났다.
Vibrio cholerae 는 사람에게 설사를 일으키는 병원성 세규닝며 본 연구에 이용된 V.cholerae KNIH002 는 국내의 설사질환 환자로부터 분리하였다. 콜레라 독소 검출용 프라이머를 이용하여 PCR 로 증폭한 산물을 탐침자로 이용하여 Southern hybridization을 실시한 결과 PstI 및 BglII로 이중절단된 4.5-kb 절편내에서 ctx 유전자가 존재함을 확인하였다. 따라서 염색체 DNA를 PstI 및 BglII로 절단 후 V. cholerae KNIH002 의 유전자 mini-libraries를 제조하였다. 그리고 동일 탐침자를 이용하여 colony hybridization을 실시한 결과 제조된 유전자 mini-libraries 로부터 신호를 나타내는 한 개의 클론을 선발하였다. 선발된 클로닝 지니는 플라스미드를 pCTX75 라 명명하였으며, 이 클론은 CHO 세포에 대한 세포 독력이 나타남을 확인하였다. 염기서열을 결정한 결과 클로닝된 플라스미드에는 ace 와 zot 유전자들은 각각 ATG 개시코돈과 TGA 종결코돈을 포함하여 291 bp와 1,200 bp 로 구성되어져 있었다. ace 유전자의 염기서열은 V.cholerae E7946 EI Tor Ogawa strain 이 것과 100% 일치하였다. 그러나 zot 유전자의 염기서열 및 아미노산 서열은 V. cholerae 395 Classical Ogawa strain 의 것과 각각 99% 및 98.8% 의 상동성을 보였다. 특히, V.cholerae 395 Classicale Ogawa strain 의 Zot 폴리펩타이드에서 100번, 272번, 281번째 alanine 은 V.cholerae KNIH002에서 모두 valine 으로 치환되어져 있었다.
우리나라 연안해역의 해수나 어패류에서 V. cholerae non-O1의 분포를 밝힘과 동시에 1996년 4월부터 동년 11월까지 분리된 환경분리주와 1984년부터 1996년까지 서울 및 부산소재 각 대학병원에서 환자로부터 분리된 총 55균주를 대상으로 생화학적 특성과 혈청형을 분석하였다. V. cholerae non-O1은 한국의 연안에서 206거체중 21검체(10%)에서 분리되었으나 V. cholerae O1 및 O139는 검출되지 않았다. 지역별로는 군산에서 16%로 검출률이 제일 높았다. 환경이나 환자에서 분리된 V. cholerae non-O1 55 균주에 대한 혈청형 분석결과 15종류의 혈청형이 검출되었는데 환경분리주 12종류, 환자분리주에서는 6종류이였다. 그런데 환경분리주에서는 O14가 68.3%(28/41)이였고, 환자분리주에서는 O8이 약 36%(5/14)로 많았고 그다음으로 O2와 O10등의 순이었다. 그리고 O2, O10와 O39는 환경 및 환자분리주에서 동시에 검출되었다.
비브리오균은 현재까지 약 30여종이 알려져 있는 그람음성의 종속영양세균으로, 이 중 12종이 사람에게 질병을 일으킨다고 보고되고 있으며, 우리 나라에서 문제가 종종 발생하는 비브리오균은 패혈증 비브리오, 장염 비브리오 그리고 V.cholerae non-O1을 들 수가 있다. V. cholerae O1과 형태학적, 생화학적, 생물학적 성상은 일치하지만, 콜레라균의 항혈청에는 응집하지 않는 일군의 세균을 V. cholerae non-O1이라고 부른다. (중략)
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[게시일 2004년 10월 1일]
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