과실류는 대표적인 신선식품으로 식용되고 있으며, 소득의 증가에 따라 소비량이 크게 늘어나고 있다. 특히, 포도에 함유되어 있는 레스베라트롤과 같은 건강기능 성분의 효과가 과학적으로 밝혀지고 있어 포도는 단순한 영양 자원이나 기호 식품의 측면을 넘어서는 관심을 받고 있다. 이에 따라 본 연구에서는 포도의 대표적인 건강기능 성분인 레스베라트롤이 강화된 생식용 포도를 효과적으로 생산하는 방법을 찾고자 포도 수확 후 자외선을 처리하는 방법을 적용하였다. 본 연구를 통해 도출한 연구의 결론은 다음과 같다. 포도 세포에 외부에서 적당한 스트레스를 가할 경우, 레스베라트롤 생합성 유전자가 발현되어 레스베라트롤의 함량이 증가하는 현상을 확인하였다. 이 현상은 유전자 조작이 이루어지는 과정이 아니며, 단지 포도 세포의 대사를 조절하는 현상이므로 신선식품의 건강기능성분을 강화하는 효과적인 방법으로 사용될 수 있다. 특히, 자외선 조사는 간단한 장치와 단순한 처리로 가능한 방법이기 때문에 포도 산지에서 효과적으로 활용할 수 있는 방법으로 판단된다. 실제로, 수확이후 포도에 자외선을 조사하였을 때 품종에 무관하게 약 5배까지 레스베라트롤을 증폭할 수 있는 것으로 확인되었다. 본 연구에서 제시한 방법은 유전자 조작법이 아니라 세포대사조절에 의한 기법에 해당하므로 현장 활용이 크게 기대된다.
Plasmid pTTY2에 의한 competent cell(P90c/$\phi$ 434)의 형질전환에 의하여 lipase를 생성하는 재조합 대장균(P90c/따434/pTTY2)을 합성하였다. Li pase 활성 조사를 위한 LAT plate, Rhodamine B plate를 이용한 실험에서 P90c/$\phi$434의 경우 halo 형성이 없었고, P90c/$\phi$434/pTTY2의 경우 용해시 켜 얻은 상등액과 용해되지 않은 미생물을 물리적으 로 깨 서 얻은 상등액 모두 halo를 형성하였다. P90c/$\phi$434/pTTY2에 대한 IPTG 유도시점, 유도 시간이 $\phi$434에 의한 미생물 용해에 미치는 영향을 살펴 봄으로써 다음과 같은 결론을 얻었다. 1. 재조합 대장균의 효과적인 용해는 ODGOO 0.5 ~ 2 2.5인 초기 exponential growth phase에서 IPTG 로 유도한 후, mitomycin C 첨가나 uv조사에 의 해 이루어진다. 2. 재조합 대장균의 용해는 IPTG 유도시간이 1 시간일 때 가장 효과적이었으며, 이후 유도시간이 증가할수록 감소하여 유도시간이 4시간일 때는 세포 용해가 이루어지지 않는다. 3. 실험한 범위에서 uv조사보다 mitomycin C 첨가가 세포 용해에 더 효과적이다. 본 연구결과가 대규모의 생물공학 생산물의 정제 에 응용되기 위해서는 고농도 세포에서의 세포용해 에 대한 연구가 펼요한 것으로 판단된다.
본(本) 연구는 linoleic acid emulsion에 아미노산용액을 첨가했을 경우 이들 아미노산에 항산화효과가 존재하는지를 알아보고 만약 항산화효과가 있다면 산화기간 중 어느 단계에 영향을 미치는지 알아보고자 하였다. Linoleic acid emulsion과 $10^{-2}M$, $10^{-3}M$, $10^{-4}M$의 glutamic acid, phenylalanine, alanine용액을 부피비(比)로 동량(同量) 섞어 시료를 준비하였으며 아미노산 용액 대신 증류수를 넣은 control group과 함께 $60{\pm}1^{\circ}C$에서 incubation 시켰다. Incubation 시킨 sample은 UV visible spectrophotometer에 의해 흡광도를 측정하여 diene conjugation의 정도와 TBA 값을 정하였으며 이 값으로 induction period와 그후의 산화정도를 알아보았다. 그 결과는 다음과 같다. 1) Diene conjugation의 측정결과(測定結果) glutamic acid의 첨가는 induction period를 감소시켜 prooxidant로 작용하며 alanine과 phenylalanine은 induction period를 연장시켜 주므로 항산화효과가 있다고 할 수 있다. 2) Induction period 중 아미노산이 항산화적인 작용을 하는데에는 최적농도(濃度)가 필요하며 alanine과 phenylalanine의 최적농도(濃度)는 각각 $10^{-3}M$과 $10^{-2}M$이었다. 3) Induction period 측정 이후에 TBA값의 측정(測定)결과 glutamic acid, alanine, phenylalanine을 첨가한 group이 control group에 비해 그 값이 낮으므로 induction period 이후의 단계에서 항산화효과(抗酸化效果)가 있음을 알 수 있다. 이때 항산화적(抗酸化的)인 작용(作用)을 하는 최적 농도(濃度)가 glutamic acid의 경우 $10^{-2}M$이었으며 alanine과 phenylalanine의 경우에는 각각 $10^{-3}M$이었다.
본 연구는 분열형 효모 Schizosaccharomyces pombe에서 여러 가지 DNA 절제회복 및 유전자 발현에 관여하는 SNF2/SW12유전자의 기능을 연구하기 위하여 이에 관련되는 유전자를 분리하고 그 특성을 연구하였다. SNF2 motif 의 conserved sequence를 primer로 하여 중합효소 연쇄반응(PCR) 방법으로 480 bp 크기의 DNA fragment를 분리하여, 이를 probe로 하여 효모에서 hrp2+ 유전자를 분리하였다. 분리한 hrp2+ 유전자의 sequence homology를 비교한 결과 3개의 SNF2 motif를 포함하고 있었다. hrp2+유전자의 전사체 크기는 4.7 kb임을 Northern hybridization으로 확인하였다. hrp2+유전자의 전사 개시 부위를 알기 위하여 primer extension분석을 한 결과, 첫 번째 ATG에서 약47 base pair 위쪽에 위치함을 확인하였다. 또한 특성 연구를 위하여 Northern hybridization으로 hrp2+ 유전자의 UV와 MMS에 대한 유도성을 조사한 결과 자외선에 대해서만 유전자의 발현이 유도되었다. 이 결과 분리한 hrp2+는 UV-inducible 유전자임을 확인하였다.
mRNA의 differential display방법에 의해 여름느타리 자실체의 상처 또는 자외선 처리시 발현되는 약 0.4kb의 cDNA 단편을 분리하였다. 이 cDNA 단편의 염기서열 분석결과 세포분열 촉진에 관여하는 cdc2-related protein kinase gene과 상당부분 유사성을 보였으며 RT-PCR 방법을 이용한 분리 유전자의 발현 실험을 통해 이 유전자가 정상 생장 환경에서는 갓, 대, 균사 등 모든 부위에서 기본적인 발현상태를 유지하고 있으며 기계적 상처 또는 자외선 처리에 의해 그 발현이 증폭됨을 확인하였다. 이러한 결과를 통해 향후 분리된 유전자의 연구를 통한 버섯 병 방어 관련 신호 전달 체계 분석에 대한 가능성을 검토해 보았다.
There is a difference in the inhibitory effects to supplemental UVB (wavelengths 280 to 320 nm) among Japanese rice (Oryza sativa L.), the cultivar Norin I is less resistant while the cultivar Sasanishiki is resistant. UVB induces photodamage in DNA. Cyclobutane pyrimidine dimer (CPD) is a major UV-induced DNA lesion. Photorepair, which is mediated by photolyase, is the major pathway in plants for repairing CPD. We have analyzed CPD induction and repair in Sasanishiki and its close relative Norin I using alkaline agarose gel electrophoresis. Norin I is deficient in CPD photoreactivation and excision, thus UV sensitivity correlates with deficient dimer repair [I]. The photorepair deficiency in Norin I results from a functionally altered photolyase with a photoflash analysis [2]. In this paper, we examined the UVB-sensitivity of several other UV-sensitive and -resistant cultivars and found that the CPD photolyase activity was deficient in UV-sensitive ones. It was also evident that there was a variation in the deduced amino acid sequences of CPD photolyases of the UV-sensitive and -resistant cultivars, whereas each deduced amino acid sequence of the UV-sensitive cultivars and of the UV-resistant ones was the same. These results suggest that the difference in the CPD photolyases of UV-sensitive and -resistant rice might be due to the structural alteration of CPD photolyase.
Kim, Gyoo-Cheon;Lee, Dong-Wook;Shin, Eun-Joo;Um, Kyung-Il
한국환경성돌연변이발암원학회지
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제16권1호
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pp.19-23
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1996
This study was performed by the sister chromatid exchanges (SCEs) and micronuclei (MN) assays to investigate the adaptive response to ultraviolet light (UV) or ethyl methanesulfonate (EMS) in Chinese hamster ovary (CHO) and Sarcoma 180 (S180) cells. The pretreatment with 1 J/m$^2$ UV or 2 mM EMS decreased the frequency of SCEs induced by the treatment with 5 J/m$^2$ UV or 8 mM EMS in CHO cells. The pretreatment with UV (1 or 2 J/m$^2$) or EMS (1, 2 or 3 mM) did not affect the SCEs induced by the treatment with 7 J/m$^2$ UV or 10 mM EMS in S180 cells. On the other hand, the pretreatment with 1 J/m$^2$ UV or 2 mM EMS decreased the frequency of MN induced by the treatment with 5 J/m$^2$ UV or 8 mM EMS in CHO cells. The pretreatment with UV (1 or 2 J/m$^2$) or EMS (1, 2 or 3 mM) did not affect the frequency of MN induced by the treatment with 7 J/m$^2$ UV or 10 mM EMS in S180 cells. It is suggested that there are adaptive responses at the level of chromosome and micronuclei to UV and EMS in CHO cells.
본 연구는 DNA상해유도기작을 규명하기 위하여 하등 진핵생물인 분열형 효모 Schizosaccharomyces pombe로부터 subtraction hybridization방법을 이용하여 자외선 유도 유전자인 UVI-155을 분리하고 그 유전자 구조와 발현양상을 조사하였다. UVI-155 유전자의 발현양상을 Northern hybridization 방법으로 살펴본 결과 자외선(ultraviolet-light) 조사 1시간 후에 최대의 발현 증가를 나타내었다. 반면 알킬화제 인 MMS (methyl methanesulfonate) 처리에 의해서도 발현이 증가되었다. 이 결과 다른 UV-inducible 유전자와는 다르게 UVI-l55 유전자는 UV와 MMS 등의 DNA 상해에 모두 발현이 증가됨을 알 수 있었다. 또 한 유전자의 기능을 알기 위하여 null-mutant세포 주를 제조하여 그 특성을 살펴본 결과 이 유전자는 세포의 성장에 필수적인 유전자임을 알 수 있었다.
Mutator effect를 가진 plasmid pKMlO1을 MNNG처리와 tetrazolium-glactcse 배지에서 MMS에, 의한 Salmonella typhimuriun의 Gal-에서 Gal+로 전환시키는 능력에 따라 pKM101 변이체들을 선택하고 이들의 성질을 chemical과 UV를 사용하여 pKM101과 비교 하였다. pKM101변이체들은 Salmonella typhimurium내에서 모두 안정하였고 정상적으로 다른 균주로 전달되었으며 picillin에 대한 저항성은 원래의 plasmid보다 같거나 높아졌다. 이들 중 두 변이체는 chemical mutagen인 MMS와 4-NQO, 그리고 UV에 의한 Salmonella typhimurimlla의 돌연변이들을 모체 pKMIOI보다 증가시켰으며 다른 변이체들은 이에 대한 효과가 감소 되었거나 전혀 잃은 것이었다. Salmonella typhimurium uvr- 변이주에 있어서 이들 변이체들의 chemical과 UV에 의한 돌연변이율에 미치는 치사효과는 모체 pKMIOI과 비슷한 양상을 나타내었다. 이러한 결과는 plasmid pKMOI의 chemical 및 UV mutator effect가 한 유전인자에 의해 결정된다는 것을 시사한다.
Mitotic gynogenesis was induced in the far eastern catfish, Silurus asotus using UV-irradiated heterospecific sperm and cold shock treatment. Eggs were activated with the sperm of mud loach, Misgurnus mizolepis which has been irradiated with UV at dose of 9,000 ergs/$mm^2$. To determine the optimum duration required to prevent the first cleavage, a cold shock at 4$^{\circ}C$ with duration of 20, 30 or 40 min was applied to the eggs 50 min after activation. To induce diploidization of mitogenesis, the most effective protocol was to apply cold shock to 50-min old (after activation) eggs at 4$^{\Circ}C$ for 30min.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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