• Applied Biological Chemistry
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• 제25권3호
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• pp.182-188
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• 1982

일차아민과 반응하여 형광활성화합물을 형성하는 fluorescamine을 이용하여 어떤 시료중에 포함된 극미량의 trypsin inhibitor의 함량 또는 그 활성도를 측정하는 형광방법을 기술하였다. 세 가지 두류종실 즉 대두, 녹두 및 팥의 상대적 antitryptic activity 측정을 예로들어 본방법의 분석화학 우적수성을 여러 각도에서 검토하였던바, 효소반응속도론적 접근으로 이루어진 본방법은 동일한 접근으로 이루어진 기존의 흡광광도방법과 비교하여 측정감도는 대략 100배이상이였으며 casein과 같은 천연기질을 사용하는 경우에서는 실험과정이 보다 단순하여 빠른 방법으로 판정되었다.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1977년도 추계학술발표회 및 특별 강연초록
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• pp.195.4-196
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• 1977

Trypsin에 대해서 비해물질을 생성하는 Streptomyces속 균주 AS 707을 선별하고 이 균주가 생성하는 물질의 작용성 및 제성질을 조사한 결과 본 저해물질은 열에 대해서 비교적 강하고 pH 처리에 대해서는 산성에서 중성에 걸쳐서는 안정하나 alkali성에서는 불안정했고 $\alpha-chymotrypsin과$ papain에 대해서도 저해작용을 하였으며 trypsin에 대한 저해양상은 mixed type이었다.(중략)

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제28권12호
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• pp.2079-2094
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• 2018

Sunflower trypsin inhibitor (SFTI) is a 14-amino-acid bicyclic peptide that contains a single internal disulfide bond. We initially constructed chimeras of SFTI with N-terminal secretion signals from the Escherichia coli OmpA and Pseudomonas aeruginosa ToxA, but only detected small amounts of protease inhibition resulting from these constructs. A substantially higher degree of protease inhibition was detected from a C-terminal SFTI fusion with E. coli YebF, which radiated more than a centimeter from an individual colony of E. coli using a culture-based inhibitor assay. Inhibitory activity was further improved in YebF-SFTI fusions by the addition of a trypsin cleavage signal immediately upstream of SFTI, and resulted in production of a 14-amino-acid, disulfide-bonded SFTI free in the culture supernatant. To assess the potential of the secreted SFTI to protect the ability of a cytotoxic protein to kill tumor cells, we utilized a tumor-selective form of the Pseudomonas ToxA (OTG-PE38K) alone and expressed as a polycistronic construct with YebF-SFTI in the tumor-targeted Salmonella VNP20009. When we assessed the ability of toxin-containing culture supernatants to kill MDA-MB-468 breast cancer cells, the untreated OTG-PE38K was able to eliminate all detectable tumor cells, while pretreatment with trypsin resulted in the complete loss of anticancer cytotoxicity. However, when OTG-PE38K was co-expressed with YebF-SFTI, cytotoxicity was completely retained in the presence of trypsin. These data demonstrate SFTI chimeras are secreted in a functional form and that co-expression of protease inhibitors with therapeutic proteins by tumor-targeted bacteria has the potential to enhance the activity of therapeutic proteins by suppressing their degradation within a proteolytic environment.

• IMMUNE NETWORK
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• 제5권4호
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• pp.193-198
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• 2005

Background: Protease-activated receptor 2 (PAR2) belongs to a family of G protein coupled receptors activated by proteolytic cleavage. Trypsin-like serine proteases interact with PAR2 expressed by a variety of tissues and immune cells. The aim of our study was to investigate whether PAR2 stimulation can lead to the activation of human mac rophages. Methods: PAR2-mediated proliferation of human macrophage cell line THP-1 was measured with MTT assay. We also examined the extracellular regulated kinase (ERK) phosphorylation and cytokine production induced by trypsin and PAR2-agonist using western blot and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), respectively. Results: Treatment of trypsin or PAR2-activating peptide increased cell proliferation in a dose-dependent manner, and induced the activation of ERK1/2 in THP-1 cells. In addition, trypsin-induced cell proliferation was inhibited by pretreatment of an ERK inhibitor (pD98059) or trypsin inhibitor (SBTI). Moreover, PAR2 activation by trypsin increased the secretion of TNF-${\alpha}$ in THP-1 cells. Conclusion: There results suggest that P AR2 activation by trypsin-like serine proteases can induce cell proliferation through the activation of ERK in human macrophage and that PAR2 may playa crucial role in the cell proliferation and cytokine secretion induced by trypsin-like serine proteases.

• 한국수산과학회지
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• 제23권1호
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• pp.12-24
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• 1990

멘헤이든의 장기에서 황산암모늄염석, 친화성크 로마토그라피(Benzamidine-Sepharose 6B), 이온교환크로마토그라피 (DEAE-Sephacel), 겔여과크로마토그라피(Sephadex G-75)등의 정제과정을 거쳐 2종의 trypsin-유사효소를 정제하고 다른 혈압육어 trypsin의 성질과 비교 검토할 수 있는 효소학적 성질에 관하여 분석하였다. 이들 두 효소는 trypsin에 대한 선택성 합성기질인 $N\alpha$-benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide ( BA-p-NA)를 분해하고, 이미 알려져 있는 trypsin 저해제 tosyl Iysyl chloromethyl ketone(TLCK), soybean trypsin inhibitor(SBTI), benzamidine, leupetin, antipain 등에 의하여 현저히 저해를 받으므로서 serine계의 trypsin임이 확증되었다. 이들 두 효소의 분자량은 겔여과법과 SDS-polya-crylamide 전기영동법에 의하여 trypsin A가 약 25,000, trypsin B가 약 26,200이었으므로 이미 밝혀진 혈압육어의 trypsin 중에서는 비교적 작았다. 이들 효소는 다른 혈압육어들에 비하여 염기성아미노산에 속하는 arginine과 Iysine이 다소 적었든 반면, 중성아미노산인 glycine과 alanine, 그밖에 tryptophan이 조금 많았다. 한편, 이들 효소는 BA-p-NA 기질에 대하여 $60^{\circ}C$전후, pH $8\~11$에서 최대활성을 보였으며, 산성 pH의 조건과 $40^{\circ}C$ 이상의 온도에서는 극히 불안정하였다. 이들 두 효소의 BA-p-NA에 대한 Km 정수는 trypsin A가 $1.4\times10^{-4}M$, trypsin B가 $4.3\times10^{-5}M$였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제20권2호
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• pp.182-187
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• 1977

본 실험은 대두(大豆)의 발아(發芽)에 따른 trypsin inhibitor activity(TIA)와 protein pattern의 변화에 관하여 조사함과 아울러 그 상관관계를 살퍼보기위한 목적으로 시도되었다. 자엽의 TIA는 발아(發芽)과정중(中) 조금 감소하였고, 배축에서는 급격히 감소해서 발아(發芽) 제 7일에는 제2일의 50%이하로 줄었다. 그리고 발아(發芽) 제 2,3,4일의 defatted dry sample에서 배축은 자엽보다 더 높은 TUI를 보여줬으며 배축의 수분함량이 자엽에 비해 높으므로 fresh sample당(當) TIA는 자엽보다 더 낮았다. 그리고 protein pattern은 자엽과 배축에 있어서 분자량이 큰 15S등의 polymer (band 1), 11S (band 2) 그리고 7S (band 3)가 감소했고 Rm치(値) 자엽의 band 5를 비롯하여 $0.5{\sim}1.0$사이에 높은 mobility를 가진 물질들이 생성(生成)되었다. 자엽의 band 4와 배축의 band 6은 거의 변하지 않았다. 그리고 발아에 따라 TIA의 감소와 저 장단백질의 감소는 있었으나 그 감소량이 서로 일치하지는 않았다.

• Journal of Pharmaceutical Investigation
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• 제30권3호
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• pp.159-166
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• 2000

Kunitz-type soybean trypsin inhibitor (SBTI) and chondroitin sulfate (A, and C type) were conjugated using sodium periodate method. And the physicochemical, pharmacokinetic properties and immunogenecity of the conjugates (Chon-A-SBTI or Chon-C-SBTI) were characterized. We expected the conjugation using chondroitin sulfate to reduce the immunogenecity and to improve the pharmacological effect. As the results, the mean molecular weight of the conjugate highly increased. After I.V. injection of the radiolabeled conjugates or native SBTI into mice, it was found that native SBTI showed rapid elimination from plasma, whereas Chon-A-SBTI and Chon-C-SBTI were slowly eliminated. Organ distribution of the two agents at 30 min after I.V. injection was different : Chon-A-SBTI or Chon-C-SBTI accumulated to a large extent in the liver (13% in Chon-A-SBTI and 16% in Chon-C-SBTI), whereas native SBTI was taken up more rapidly by the kidney (107% dose/g of tissue) and excreated into the urine (26%). In addition we evaluated the therapeutic value of the conjugates by using the sublethal septic shock model caused by pseudomonal elastase and tested the immunogenecity by passive cutaneous anaphylaxis shock (PCA). The conjugates were more effective than native SBTI against pseudomonal elastase induced septic shock in guinea pig. In case of the conjugates, the pharmacological and therapeutic effect lasted over 3 hours long. In immunogenecity test, both of the conjugates showed the reduction of their immunogenecity, especially Chon-A-SBTI looked most effective.

• 한국식품영양과학회지
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• 제24권6호
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• pp.1010-1015
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• 1995

Extent of reduction in protein digestibility by Godulbaegi(lxeris sonchifolia H.) kimchi powder appeared to be related to the kimchi weight-to-protein weight ratio, the kind of protein sources, part of plants and fementation period. In vitro digestibilities of protein were significantly(p<0.05) reduced as the freeze dried kimchi powder weight-to-protein ration increased from 0.5 : 1.0 to 1.0 : 1.0 for all Godulbaegi samples and protein sources. Overall digestibility of protein sources in the presence of kimchi powder, the reduction ranked in the following order : soybean>casein>beef>squid. Lower(p<0.005) reduction occurred for each protein source when raw plant was exchanged for kimchi products. Some greater reduction of digestibility was noted in young plants and leaf samples than ripe or root samples. Trypsin inhibitor, which expressed as soybena trypsin inhibitor, was inversely related(r=0.8437) to in vitro protein digestibility of casein in the presence of Godulbaegi kimchi powder. More than three times of total polyphenols contained in leaves than in roots. Young leaves had 30% more total polyphenols(37.64mg/g sample) than that in ripe ones. Soaking in 5% NaCl solution for 24 hrs was markedly reduced in total polyphenols as 73% for leaves and 33% for roots. Remarkable reduction in total polyphenols was not checked during fermentation followed after soaking. Trypsin inhibitor content correlated well(r=0.8873) with total polyphenols in all of Godulbaegi samples.

• 한국식품과학회지
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• 제12권1호
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• pp.24-33
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• 1980

한국산 두류 중 대두를 비롯한 팥, 녹두, 강낭콩에 대하여 trypsin 저해(沮害) 활성(活性)과 적혈구(赤血球) 응집(凝集) 활성(活性)을 측정하고 이들을 가열 처리에 의한 파괴 효과를 실험한 결과는 다음과 같다. 1. 각 두류의 건물(乾物) 중량 당 저해(沮害) 활성도(活性度) (% [TU] inhibited/mg)는 대두가 가장 높아 79.9를 나타낸 반면 팥, 강낭콩은 각각 46.4, 43.2로 대두의 반정도이었으며 녹두는 17.7로 제일 적었다. 이를 단백질 중량당으로 환산하면 팥이 제일 높아 222를 보였고 그 다음이 대두 194, 강낭콩 170의 순이었으며 녹두는 제일 낮아 75를 보였다. 2. 열에 의한 trypsin 저해(沮害) 활성도(活性度)의 파괴율은 팥, 녹두가 각각 $85{\sim}87,\;87{\sim}94\;%$로 높았고 강낭콩, 대두는 각각 $76{\sim}79,\;67{\sim}72\;%$로 낮았다 그러나 boiling과 autoclaving 간의 가열 방법에 따른 차이는 발견할 수 없었다. 3. 각 두류의 토끼 혈액에 대한 적혈구(赤血球) 응집(凝集) 활성(活性)(hemagglutinating unit/g)은 팥에서는 나타나지 않았고 강남콩이 제일 많아 건물 1g당 48,300을 보인데 비해 대두는 18,000, 녹두는 136이었다. 이를 단백질 중량당으로 환산하면 마찬가지 경향을 보여 강남콩 190,600, 대두 43,700, 녹두 581로 나타났다. 이들 두류의 적혈구(赤血球) 응집(凝集) 활성(活性)은 가열 처리에 의하여 모두 파괴되었다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• 제43권3호
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• pp.359-366
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• 1996

연구배경 : 기관지천식 등의 알레르기 질환의 병인에 호산구는 중요한 역할을 하며 화학주성의 연구는 새로운 변조성분에 대한 호산구의 반응을 평가하는데 in vivo 실험에 앞서 유용한 방법론으로 쓰이고 있다. 탈과립화된 비만세포와 활성화된 T 림프구가 기관지 천식의 병태생리에 관계하며 tryptase는 비만세포의 활성화후 분비되는 단백분해효소 중 하나로써 호산구의 화학주성과 활성화에 영향을 미칠 것으로 생각된다. 본 연구의 목적은 단백분해효소의 대표격인 trypsin과 chymotrypsin이 호산구의 화학주성과 활성화에 어떤 역할을 하는지 알고자 함에 있다. 방법 : 호산구의 분리는 혼합된 과립구로부터 호중구를 제거하는 면역자기방법으로 하였고 화학주성은 multi-well micro-Boyden chamber로 정량하였으며 ECP 유리정량은 fluoroimmunoassay를 이용하였다. 결과 : 호산구는 trypsin에 화학주성을 보였고 최대의 반응이 $1000{\mu}g/ml$에서 $56.52{\pm}14.50$/HPF로 양성대조군인 PAF에 필적하였다. 반면 chymotrypsin에 대해서는 화학주성을 보이지 않았다. Trypsin으로 처리한 호산구의 ECP 분비능은 trypsin 10, 100, $1000{\mu}g/ml$ 농도에서 음성대조군에 비하여 각각 2.7, 3.7, 6배 높았다. Soybean trypsin inhibitor로 전처치하였을 때 ECP의 분비능은 감소되었으며 $1000{\mu}g/ml$ 농도에서 음성대조군과 유의차이가 없었다. 결론 : trypsin은 호산구에 화학주성을 일으킬 수 있으며 호산구를 활성화하여 호산구 과립단백의 하나인 ECP를 분비하게 한다고 사료된다. 반면 chymotrypsin은 호산구에 대한 직접적인 작용은 없는 것으로 보인다.