This study was investigated spawning behavior, structure of egg masses and egg development in Aplysia kurodai inhabiting the coastal waters of Jeju Island, Korea. The mating and courtship behavior of A. kurodai occurred in the form of unilateral copulating with chain formation. In chain copulation, only the first animal acted as a female; the second and succeeding animals acted as males (sperm donors) to the animals in front and as females to the animals behind. The fertilized eggs were packaged in capsules that are embedded in jelly to form a cylindrical string called an egg masses. The number of capsule per cm of the egg masses was 55 to 60 capsules and each capsule within the egg masses held 15 to 25 eggs. After spawning, the egg masses were bright yellow or orange in color. This egg masses color not changed until embryos developed into trochophore stage. Thereafter, as embryo developed from trochophore stage to veliger stage the egg masses color became brownish. The fertilized eggs were spherical, with a diameter of approximately $80{\pm}1{\mu}m$ at spawning. At 5 to 6 days after spawning, the embryo developed into trochophore stage and began to rotate within the egg capsule. In the trochophore stage, the precursor of the velum, called the prototroch or prevelum, developed. At 10 days after spawning, the prevelum is transformed into the velum, and the trochophore developed into veliger stage. Between 10 to 15 days after spawning, the veligers broke out of the egg capsule, and hatched as free-swimming larvae.
Karyotype analysis is a major work in the process of triploid abalone production for the purpose of productivity and quality improvement. However, the metaphase spreads for karyotype analysis have been prepared just from the larvae at trochophore stage, which has restricted the spectrum of sample correction inhibiting more efficient analysis. Here, we investigated the feasibility of preparing metaphase spreads from the larvae at veliger stage that is the next developmental stage of trochophore. For this, diploid and triploid larvae at trochophore and veliger stages from Pacific abalone (Haliotis discus hannai) were subjected to metaphase spread preparation and its efficiencies were measured and compared each other. As the results, although the efficiencies of metaphase spread preparation were significantly lower in the larvae at veliger stage compared to the ones at trochophore stage regardless of ploidy status, we found that the preparation of metaphase spreads, which showed the clear chromosomal images containing the normal number of chromosomes, was possible from the veliger stage larvae. On the other hands, all larvae used in this study regardless of developmental stage and ploidy did not show colchicine sensitivity. Moreover, no significant difference was observed in cell cycle distribution of the cells comprising larvae between two developmental stages regardless of ploidy status. These suggested that the details of protocol to prepare metaphase spreads from abalone larvae should be optimized depending on its developmental stages. Taken together, we demonstrated the feasibility of preparing metaphase spreads from H. discus hannai veliger stage larvae for karyotype analysis.
제주 연안에서 주로 어획되는 연안 정착성 고급 어종인 흰점독가시치, S. canaliculatus 양식 기술개발을 목적으로 부화 자어의 먹이 섭취, rotifer와 Artemia nauplii에 대한 섭식 생태 등 종묘생산을 위한 기초적인 연구와 자어 사육 시스템의 개선과 새로운 먹이생물을 적용하여 대량 종묘생산을 실시하였다. 흰점독가시치 자어의 먹이 계열별 생존율 실험은 부화후 1일째부터 참굴의 trochophore 유생과 B. rotundiformis를 공급한 실험구에서 부화 후 10일째까지 평균 3.3%가 생존하였으나, rotifer와 ciliata를 공급한 실험구 및 rotifer와 N. oculata를 공급한 실험구에서는 정상적으로 섭식하지 못하고 부화 후 5일과 6일째 모두 사망하였다. 자어의 성장에 따른 rotifer의 1회 섭식량은 부화 후 5일째에는 평균 11개체, 부화 후 9일째에는 43개체, 부화 후 15일째에는 167개체로 급격히 증가하여 19일째에는 239개체를 섭식하였다. Artemia nauplii의 일간 섭식량은 부화 후 12일째 평균 43.5개체, 부화 후 15일째부터는 섭식량이 급격히 증가하여 438개체를 섭식하였으며, 부화 후 24일째에는 자어 1마리가 하루에 평균 3,000개체를 섭식하였다. 대량 종묘생산은 야외수조(23$M^3$)에서 규조류를 번식시키고 나서 N. oculata를 첨가하면서 1주일간 물 만들기를 실시하였다. 그 이후부터는 B. rotundiformis (136${\mu}$m)와 copepoda 류를 배양한 상태에서 수정란을 수용하여 부화된 자어를 50일간 사육하였다. 또한 바윗굴의 trochophore 유생(58~62${\mu}$m)을 자어의 대량 폐사가 발생하는 위험기(부화 2~7일)에 공급하여, rotifer로의 먹이전환이 원활하게 이루어졌다. 부화 후 5일까지의 생존율은 14.9%, 부화 후 10일까지의 생존율은 11.1%였으며, 최종 사육 기간동안 생존율은 10.7%, 치어의 평균 전장은 65.5${\pm}$0.4mm 이었다.
Post-thawed larval rearing in Pacific oyster Crassostrea gigas was performed to investigate the survival rate with time course in three kinds of larvae cryopreserved. The highest survival rate and larval activity index (LAI) of post-thawed larvae were obtained from the permeation in 0.2 M sucrose and 2.0 M ethylene glycol (EG) at $-1^{\circ}C/min$ in freezing speed showing the survival rates just after thawing of 63.8% in trochophore, 84.1% in D-shaped veliger and 56.3% in early umbo veliger. In post-thawed larval rearing with food supply, the larvae lasted their lives until 24 hours in trochophore, 75 hours in D-shaped veliger and 57 hours in early umbo veliger. The results suggested that each larval stage post-thawed revealed no more further development to subsequent respective stage.
We investigated the processes of egg and larval developments for aquaculture technique development of seedling production fo the flat oyster, Ostrea denselamellosa. Teo flat oyster of larviparous type was different from the pacific oyser (ovivarous type) because their larvae (trochophore and prodissoconch larvae) in the gill released into the seawater. The process of egg development was observed by artificial fertilization at $25^{\circ}C$, using a dissecting method. The sizes of Unfertilized eggs ranged from 80 to 90 $\mu\textrm{m}$ and fertilized eggs with globule-shape was 90-100 $\mu\textrm{m}$. The Polar body appeared after fertilization and egg cleavage began within 1 hour, reaching the blastula stage after 10 hours. The trochophore in the gill appeared 2-3 days after fertilization and grew to the prodissoconch larvae (130 140 $\mu\textrm{m}$) having a complete shell after 1-2 days. The shell of prodissoconch larvae grew to 205 220 $\mu\textrm{m}$ after 10 hours, and then they became umbo stage larvae showing oval in shape. The velum of umbo stage larvae was degenerated about 17-20 days after fertilization and grew into a pediveliger with a developed foot, at this time, the shell length size was 320 360 $\mu\textrm{m}$.
피조개의 핵형을 구명할 목적으로, 1991년 여름 경상남도 남해산을 온도자극법에 의해 인위적으로 방난방정을 유발하였다. 1. 발생중인 Trochophore 유생을 사용하여 공기건조법에 의해 다수의 명료한 중기분열상을 관찰할 수 있었다. 2. 피조개의 염색체는 2n=38로서, 핵형은 3쌍의 중부동원체형, 2쌍의 중부-차중부동원체형, 10쌍의 차중부동원체형과 4잡의 차단부동원체형으로 구성되었음이 확인되었다.
管棲 갯지렁이(Schizobranchia insignis)의 卵子形成 및 初期發生 期間에 일어나는 단일유전자 발현의 변이에 대하여 DNA-RNA 分子結合法을 이용하여 연구하였다. 卵子形成 初期에 活性化되었던 유전자의 일부는, 卵子形成 과정이 진행됨에 EK라 점차 억제되는 경향을 보였으며, 初期에 생성된 전사물질의 일부는 생성된 후, 卵子形成 과정에서 점차 소모되어, 末期에 잔존한 전사물질의 양은 사실상 初期에서 보다 적었다. 즉, 初期의 卵子는 末期에서는 존재하지 않는 단일유전자의 전사물질을 함유하고 있음이 확실하였다. 수정 후 발생단계를 통하여, 卵子形成 期間 중 발현된 유전자와는 다른 새로운 유전자의 발현이, Trochophore stage까지 계속 증가됨을 보여 주었다.
코끼리조개의 인공종묘생산 기술개발의 일환으로 성숙된 모패를 절개법에 의하여 인공수정시켜 난 발생 및 유생의 발달과정을 관찰한 결과를 요약하면 다음과 같다. 코끼리조개의 난은 분리침성란으로 나타났으며, 방란직후 알의 모양은 타원형이나 수정이 되면 직경 $70\mu$m의 구형으로 된다. 수정난의 발생은$ 11^{citc}C$에서 4시간 후 4세포기로 되고, 2일이 지나면 담륜자 유생(trochophore larvae), 수정 후 3일째에는 D상 유생, 23일째에는 각정기, 36일째에는 성숙유생으로 되었다. 수온(w)에 따른 각 단계별 소요시간(t)의 관계를 보면, 8세포 : 1/t=0.0209 w-0.1167 (r=0.9967) 포배기 : 1/t=0.0055 w-0.0192 (r=0.9825) 담륜자기 : 1/t=0.0034 w-0.0155 (r=0.9907) D상 유생기 : 1/t=0.0014 w-0.0023 (r=0.9843) 상기 식에서 산출된 코끼리조개의 생물학적 기초수온은 3.82$^{\circ}C$였다.
결빙억제제(CPA)의 종류, 농도 및 침지시간이 참전복 Haliotis discus hannai 발생배의 생존활성에 미치는 영향을 조사하였다. 4세포, 담륜자 및 피면자를 dimethyl sulfoxide, ethylene glycol, propylene glycol 농도별로 10분, 20분 및 30분간 침지하였다. CPA 침지 후 각 발생배의 발생진행률은 각 CPA 농도가 낮을수록, CPA 침지시간이 짧을수록 높았다. 또한, 피면자에서 비틀림전까지의 발생진행률은 4세포에서 담륜자까지의 것보다 높았다. CPA 침지 후 발생진행률 및 유생활성지수는 ethylene glycol에서 가장 높았다. 참전복 발생배의 냉동보존 효과를 높일 수 있는 CPA 및 농도는 ethylene glycol 2.0 M, 평형시간은 30분인 것으로 추정된다.
우리나라에서 진주양식의 대상패류인 진주조개 (Pinctada fucata martensii) 담륜자를 냉동보존하기 위하여 4가지 동해방지제를 사용하여 냉동실험을 실시하고, 적합한 동해방지제를 찾고자 하였다. 동해방지제인 dimethyl sulfoxide (DMSO), ethylene glycol, glycerol과 1, 2-propanediol을 희석액인 0.2 M sucrose에 각각 0.01, 0.1, 1.0과 2.0 M이 되도록 혼합한 다음, 10분간 평형상태를 유지한 후 냉동하였다. 냉동후 해동시킨 담륜자는 모든 동해방지제에서 농도가 증가할수록 생존율이 높아졌으나, 일부 세포내 함유물이 세포외로 유출되어 손상을 입은 개체도 보였다. 진주조개의 담륜자 냉동보존에 적합한 동해방지제는 1.0∼2.0 M의 DMSO와 ethylene gly-col로서 해동후 생존율이 82.8∼97.4%로 가장 높았다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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