Hernandez, Eric Moore;Johnson, Anna;Notario, Vicente;Chen, Andrew;Richert, John R.
BMB Reports
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제35권3호
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pp.273-282
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2002
Sp3 is a bifunctional transcription factor that has been reported to stimulate or repress the transcription of numerous genes. Although the size of Sp3 mRNA is 4.0kb, the size of the known Sp3 cDNA sequence is 3.6kb. Thus, Sp3 functional studies have been performed with an artificially introduced start codon, and thus an amino-terminus that differs from the wild-type. Ideally, full-length cDNA expression vectors with the appropriate start codon should be utilized for these studies. Using 5'rapid amplification of cDNA ends, a full-length Sp3 cDNA clone was generated and the sequence verified in nine cell lines. No AUG initiation codon was present. However, stop codons were present in all three frames 5' to the known coding sequence. In vitro translation of this full-length cDNA clone produced the expected three isoforms-one at 100 kDa and two in the mid 60 kDa range. Electrophoretic mobility shift assays showed that the protein products had the ability to bind to the Sp1/3 consensus sequence. In vitro studies, using our Sp3 clone and site directed mutagenesis, identified the translation initiation site for the larger isoform as AUA. AUA has not been previously described as an endogenous initiation codon in eukaryotes.
Loboda, Agnieszka;Rojczyk-Golebiewska, Ewa;Bednarczyk-Cwynar, Barbara;Zaprutko, Lucjusz;Jozkowicz, Alicja;Dulak, Jozef
Biomolecules & Therapeutics
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제20권6호
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pp.499-505
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2012
Chemoprevention represents a strategy designed to protect cells or tissues against various carcinogens and carcinogenic metabolites derived from exogenous or endogenous sources. Recent studies indicate that plant-derived triterpenoids, like oleanolic acid, may exert cytoprotective functions via regulation of the activity of different transcription factors. The chemopreventive effects may be mediated through induction of the nuclear factor erythroid 2-related factor 2 (Nrf2) transcription factor. Activation of Nrf2 by triterpenoids induces the expression of phase 2 detoxifying and antioxidant enzymes such as NAD(P)H quinone oxidoreductase 1 (NQO1) and heme oxygenase-1 (HO-1) - proteins which can protect cells or tissues against various toxic metabolites. On the other hand, inhibition of other transcription factors, like NF-${\kappa}B$ leads to the decrease in the pro-inflammatory gene expression. Moreover, the modulation of microRNAs activity may constitute a new mechanism responsible for valuable effects of triterpenoids. Recently, based on the structure of naturally occurring triterpenoids and with involvement of bioinformatics and computational chemistry, many synthetic analogs with improved biological properties have been obtained. Data from in vitro and in vivo experiments strongly suggest synthetic derivatives as promising candidates in the chemopreventive and chemotherapeutic strategies.
후박추출물은 중국 원산인 당후박에서 제조되며, 항산화 및 항염증 효과로 알려져 있다. 후박의 성분으로는 폴레페놀인 honokiol 및 magnolol 등이 알려져 있다. 이 연구에서, 우리는 후박추출물이 triglyceride (TG)의 축척을 감소시킴으로써 지방세포 분화를 억제한다는 표면적인 결과를 얻었다. 또한, 후박 추출물이 hormone sensitive lipase (HSL) 단백질 수준을 증가시키고 adipocyte에 specific한 transcription factors로 peroxisome proliferator activated receptor (PPAR)-${\gamma}$의 단백질과 mRNA 수준을 억제하였다. 결과적으로, 후박추출물이 항비만제로서 adipogenic transcription factor와 그들의 특이적인 유전자의 발현을 억제함으로써 지방세포 분화를 억제한다고 사료된다.
아시아에서 한방약초로 널리 알려진 당귀 추출물의 미백활성을 알아보기 위하여 tyrosinase 저해활성을 측정한 결과 1,000 ${\mu}g/ml$의 농도에서 70% 이상의 활성을 나타내었다. 또한 당귀 추출물에 대한 멜라노마 세포(B16F10)의 세포생존율을 확인한 결과 500 ${\mu}g/ml$의 농도에서 99% 이상의 세포생존율을 확인할 수 있었다. 미백 관련 인자인 MITF, TRP-1, TRP-2 및 tyrosinase의 mRNA 발현량을 측정한 결과 50 ${\mu}g/ml$의 농도에서 각각 85.7%, 123.9%, 68.8%, 208%로 당귀 추출물을 처리하지 않은 군보다 감소하였음을 확인할 수 있었다. 이러한 연구 결과에 따라 당귀 추출물이 melanin 합성과 관련이 있는 유전자 발현의 억제효과가 있음을 확인할 수 있었으며, 미백 화장품 소재로서의 가능성을 확인하였다.
Kim, Jin-Ik;Kaufman, Randal J.;Back, Sung Hoon;Moon, Ja-Young
Molecules and Cells
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제42권11호
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pp.783-793
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2019
When endoplasmic reticulum (ER) functions are perturbed, the ER induces several signaling pathways called unfolded protein response to reestablish ER homeostasis through three ER transmembrane proteins: inositol-requiring enzyme 1 (IRE1), PKR-like ER kinase (PERK), and activating transcription factor 6 (ATF6). Although it is important to measure the activity of ATF6 that can indicate the status of the ER, no specific cell-based reporter assay is currently available. Here, we report a new cell-based method for monitoring ER stress based on the cleavage of $ATF6{\alpha}$ by sequential actions of proteases at the Golgi apparatus during ER stress. A new expressing vector was constructed by using fusion gene of GAL4 DNA binding domain (GAL4DBD) and activation domain derived from herpes simplex virus VP16 protein (VP16AD) followed by a human $ATF6{\alpha}$ N-terminal deletion variant. During ER stress, the GAL4DBD-VP16AD(GV)-$hATF6{\alpha}$ deletion variant was cleaved to liberate active transcription activator encompassing GV-$hATF6{\alpha}$ fragment which could translocate into the nucleus. The translocated GV-$hATF6{\alpha}$ fragment strongly induced the expression of firefly luciferase in HeLa Luciferase Reporter cell line containing a stably integrated 5X GAL4 site-luciferase gene. The established double stable reporter cell line HLR-GV-$hATF6{\alpha}$(333) represents an innovative tool to investigate regulated intramembrane proteolysis of $ATF6{\alpha}$. It can substitute active pATF6(N) binding motif-based reporter cell lines.
The transcription factor SHE1 was identified as an interacting partner with the cucumber mosaic virus (CMV) 1a protein in the yeast two-hybrid system, by a pull-down assay, and via bimolecular fluorescent complementation. Using fluorescent-tagged proteins and confocal microscopy, the CMV 1a protein itself was found distributed predominantly between the nucleus and the tonoplast membrane, although it was also found in speckles in the cytoplasm. The SHE1 protein was localized in the nucleus, but in the presence of the CMV 1a protein was partitioned between the nucleus and the tonoplast membrane. SHE1 expression was induced by infection of tobacco with four tested viruses: CMV, tobacco mosaic virus, potato virus X and potato virus Y. Transgenic tobacco expressing the CMV 1a protein showed constitutive expression of SHE1, indicating that the CMV 1a protein may be responsible for its induction. However, previously, such plants also were shown to have less resistance to local and systemic movement of tobacco mosaic virus (TMV) expressing the green fluorescent protein, suggesting that the CMV 1a protein may act to prevent the function of the SHE1 protein. SHE1 is a member of the AP2/ERF class of transcription factors and is conserved in sequence in several Nicotiana species, although two clades of SHE1 could be discerned, including both different Nicotiana species and cultivars of tobacco, varying by the presence of particular insertions or deletions.
The differentiation and development of preadipocyte into mature adipocyte are regulated by transcription factors, such as CCAAT enhancer binding protein (Cebp) gene family and sterol regulatory element binding transcription factor 1 (Srebp1). Steroid hormones give influences on the development and function of adipocyte. The present research examined expression patterns of CCAAT enhancer binding protein alpha (Cebpa), CCAAT enhancer binding protein beta (Cebpb), CCAAT enhancer binding protein gamma (Cebpg), sterol regulatory element binding transcription factor 1 (Srebp1), androgen receptor (Ar), and estrogen receptors (Esr) among different epididymal fat parts during postnatal period by quantitative real-time polymerase chain reaction. In the distal epididymal fat, expression of Cebpa, Cebpb, Cebpg, Srebp1, Ar, and Esr2 was increased until 12 months of age, while expression of Esr1 was decreased at 5 months of age and was not detectable after 8 months of age. In the proximal epididymal fat, transcript levels of Cebps and Srebp1 were increased at 8 months of age, followed by decreases of Cebpb and Cebpg transcript levels at 12 months of age. An additional increase of Srebp1 expression was observed at 12 months of age. Expression of Ar and Esr2 were increased until 8 months of age, followed by a drop of Ar expression level at 12 months of age. Expression pattern of Esr1 was similar to that in the distal epididymal fat. In the tail epididymal fat, expression of Cebpa, Cebpg, Srebp1, Ar, and Esr2 was increased with age. Esr1 was not detectable at all. The highest level of Cebpb was observed at 8 months of age. These data suggest the possibility of developmental and functional differentiation among the epididymal fat parts.
Lee, Eung-Ji;Kim, Jandi;Jeong, Min Kyeong;Lee, Young Min;Chung, Yong Ji;Kim, Eun Mi
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제25권1호
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pp.15-26
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2021
Peptides are short chain of amino acids linked by peptide bonds. They are widely used as effective and biocompatible active ingredients in cosmetic industry. In this study, we developed novel peptide mixture and identified its anti-pigmentation effect on melanocytes and keratinocytes. Our results revealed that peptide mixture inhibited melanosome biogenesis through the regulation of microphthalmia-associated transcription factor, a key factor of melanogenesis in melanocytes. And we observed that peptide mixture inhibited melanosome uptake through the reduction of protease-activated receptor 2, a phagocytosis-related receptor in keratinocytes. Furthermore, peptide mixture activated autophagy system resulting in degradation of transferred melanosomes in keratinocytes. The anti-pigmentation effect of multi-targeting peptide mixture was assessed in a human skin equivalent model (MelanoDerm). Melanin contents in epidermal layer were significantly decreased by topical treatment of peptide mixture, suggesting that it can be applied as a novel cosmetics material having a whitening function.
We have used cDNA microarray hybridization to identify gene regulated in response to gamma-irradiation in U-937 cell. The cDNA-chip was composed entirely of 1,000 human cancer related gene including apoptosis and angiogenesis etc. In gamma-irradiated U-937 cell, highly charged protein, ribosomal protein L32, four and a half LIM domains 3, lipocalin 2 (oncogene 24p3) and interleukin 15, ataxia telangiectasia mutated (includes complementation groups A, C and D) genes showed increased level of its transcription, and cell division cycle 25A, dihydrofolate reductase, topoisomerase (DNA) II beta(180kD), kinase suppressor of ras and strarigin genes showed reduced level of its transcription compared to untreated U-937 cell. The significant change of level of transcription was not found in well-known ionizing radiation(IR)-responsive gene, such as transcription factor TP53 and p53 related gene, except ataxia telangiectasia mutated gene.
Kim, Kwoneel;Bang, Hyoeun;Lee, Kibaick;Choi, Jung Kyoon
Genomics & Informatics
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제13권2호
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pp.40-44
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2015
DNA microarray and next-generation sequencing provide data that can be used for the genetic analysis of multiple quantitative traits such as gene expression levels, transcription factor binding profiles, and epigenetic signatures. In particular, chromatin opening is tightly coupled with gene transcription. To understand how these two processes are genetically regulated and associated with each other, we examined the changes of chromatin accessibility and gene expression in response to genetic variation by means of quantitative trait loci mapping. Regulatory patterns commonly observed in yeast and human across different technical platforms and experimental designs suggest a higher genetic complexity of transcription regulation in contrast to a more robust genetic architecture of chromatin regulation.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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