• 제목/요약/키워드: Tn5 cells

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Expression of Human Thrombopoietin in Insect Cells by Polyhedrin-gp64 Dual Promoter-Based Baculovirus Vector System

  • Koh, Yeo-Wook;Park, Sang-Kyu;Kim, Kun-Soo;Kim, Seong-Ryong;Lee, Jeong-Kug;Yang, Jai-Myung
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제9권3호
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    • pp.318-322
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    • 1999
  • A new baculovirus transfer vector (pPGP404) was constructed to increase the expression level of human thrombopoietin (hTPO) in insect cells. In pPGP404, hTPO was cloned next to the AcNPV polyhedrin-gp64 dual promoter and the leader sequence of hTPO was substituted with that of gp64. A recombinant baculovirus, AcPGP404, was constructed by using pPGP404 as a transfer vector. hTPO was expressed in AcPGP404-infected TN5 cells and it was observed that the expression levels of hTPO in TN5 cells increased three-fold ($6.0 {\mu}g/ml^{-1}$) compared to the level expressed under the control of the polyhedrin single promoter. These results indicate that the polyhedrin-gp64 dual promoter system would be useful for expression in large quantities of recombinant proteins in insect cells.

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가토의 비후성 반흔에서 세포외 알칼리성 인산효소 발현의 변화 (THE CHANGE OF EXTRACELLUAR ALKALINE PHOSPHATASE EXPRESSION IN HYPERTROPHIC SCAR IN RABBITS)

  • 조용기;유선열
    • Maxillofacial Plastic and Reconstructive Surgery
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    • 제21권1호
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    • pp.23-28
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    • 1999
  • ALP (alkaline phosphatase) is a membrane-bound metalloenzyme that is expressed in osteoblasts, hepatocytes, lung, kidney, endothelial cells, leukocytes and other cells. Normal soft tissue and skin show little tissue nonspecific ALP (TN-AP), However, scar tissue contains high levels of TN-AP activity, and in fact, TN-AP is expressed intensely in regenerating connective tissue after the wounding. The purpose of this study was to evaluate the change of ALP expression in hypertrophic scar model in rabbits and the effect of triamcinonolone on ALP expression. Adult male New Zealand white rabbits, weighing about 2.5 kg, were used. After full-thickeness wounding over the ventral surface of each ear, either saline (control ear) or triamcinolone (contralateral ear) was injected on day 16. Rabbits were sacrificed on day 3, 7, 15, 17, 19, 23, and the specimens were retrieved en bloc. Histologic and immunohistochemical examinations of tissue samples were done. The results obtained were as follows: On day 3, ALP reaction was observed on fibroblasts and inflammatory cells in wound margin. On day 7, ALP reaction was more intense than day p in capillaries, inflammtory cells, and fibroblasts behind newly formed epithelium. On day 15, ALP reaction was lessened in both groups and appeared mainly in subepidermal capillary network, Since day 17, ALP reaction was lessened in both groups and weaker in triamcinolone-injected group than in saline-injected group. These results suggest that ALP reaction isn't increased in triamcinolone-injected scar and triamcinolone reduces scar not by increasing TN-AP expression but other mechanism.

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PC12 세포와 A123.7 세포에서 차별적으로 발현되는 유전자의 검색 (Screening of Differentially Expressed Genes between PC12 Cells and A123.7 Cells)

  • 백승연;양병환;채영규
    • 생물정신의학
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    • 제6권1호
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    • pp.67-73
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    • 1999
  • The cAMP-dependent protein kinase(PKA) is an intracellular enzyme with serine-threonine kinase activity that plays a key role in cell growth, differentiation, and apoptosis in eukaryotes. In order to understand the PKA signal transduction pathway regulating cell life cycle and identify its role, we focused on the characterization of up-/down-regulated genes by PKA using the differential display polymerase chain reaction. Seven differentially expressed sequence tags(DEST) have been obtained. Among these DESTs, 2 DESTs were homologous to the sequence of genes from BLAST search result. KC1-5 DEST that was up-regulated in A123.7 cells was highly corresponded to mouse apoptosis-related gene(MA-3) or mouse mRNA for topoisomerase inhibitor suppressed(TIS). MA-3 was induced in various types of apoptosis, specially in NGF-deprived apoptotic PC12 cells. TIS was down-regulated in the RVC lymphoma cells incubated with topoisomerase inhibitor that induces DNA strand breakages. PG1-1 DEST that was highly expressed in PC12 cells was corresponded to transposon Tn10 3'-end. Tnansposon Tn10 was up-regulated in differentiated myeloblastic ML-1 cells by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate. This study illuminates that MA-3/TIS was down-regulated by PKA activity, and transposon Tn10 was up-regulated by it.

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대청호에서 수환경 요인과 식물플랑크톤의 변동 (Dynamics of Water Environmental Factors and Phytoplankton in Taechong Reservoir)

  • 신재기;조경제;오인혜
    • 환경생물
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    • 제17권4호
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    • pp.529-541
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    • 1999
  • 대청호의 중.하류 주요지점에서 수질특성을 파악하기 위하여 환경요인과 식물플랑크톤의 변동을 98년 6월부터 99년 6월까지 매월 조사하였다. 환경요인 중 수온, DO및 pH는 각각 5.3~27.7$^{\circ}C$, 6.2~13.8 mgO$_2$/1 및 6.4~9.5 범위로서 계절적 영향이 컸다. 무기영양염 중 NH$_4$, NO$_3$, SRP 및 SRSi 농도는 각각 18~104 $\mu$g N/1, 79~1,111 $\mu$g N/1, 0~16 $\mu$g P/1 및 0~3.0 mg Si/l 범위였다. 무기질소 중 NH$_4$ 는 NO$_3$의 5.5~7.2%수준이었다. NO$_3$는 하계에만 다소 낮았고 다른 시기에는 거의 일정하였다. SRP와 SRSi농도는 남조류가 우점하는 하계에 증가하였고 수온이 감소된 10월 이후에 규조류의 증가와 함께 SRP와 SRSi농도가 감소하였다. 따라서 SRSi는 SRP와 더불어 조류 생장에 밀접한 관련성이 있는 영양염으로 평가되었다. Chl-$\alpha$ 평균농도는 8~12 $\mu$g/1 범위로서 하류(댐)에서 가장 낮았다. 또한 하절기에 TN/TP비가 감소할수록 chi-$\alpha$ 농도는 증가하였고 TN/TP비의 평균값은 110으로서 조류의 생장에 대해 P 제한성이 강하였다. 식물플랑크톤의 변동은 계절에 따라 소수종이 우점하는 특성이 관찰되었다. 하계에는 남조류 Anabaena, Microcystis 및 Oscillatoria속 조류가 주로 초여름부터 늦가을까지 발생하여 번무하였다. 이 중에서 A. spiroides v. crassa는 0.3~2.0$\times$$10^4$cells/ml, M. aeruginosa는 6.4$\times$$10^2$~1.0$\times$$10^4$cells/m1 및 O. limosu는 4.6$\times$$10^3$~1.6$\times$$10^4$ cells/ml 범위로서 변화 폭이 가장 컸다. 반면 동계에는 규조류 Stephanodiscus속 조류가 11월~4월에 평균 4.9$\times$$10^2$cells/m1수준이었고 1월에 평균 세포수가 1.3$\times$$10^3$ cells/ml로 많아 중요종으로 볼 수 있었다.

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SOM을 이용한 전남 호소의 식물플랑크톤 군집과 수질 관계 분석 (Relationship between Phytoplankton Community and Water Quality in Lakes in Jeonnam using SOM)

  • 조현진;나정은;정명화;이학영
    • 생태와환경
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    • 제50권1호
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    • pp.148-156
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    • 2017
  • 전라남도에 위치한 12개의 호소에서 식물플랑크톤 군집변화 양상 및 환경요인과 시공간적 특징의 상관관계를 알아보기 위하여 2014년 3월부터 11월까지 총 4차례에 걸쳐 조사를 시행하였다. 전체 조사기간 동안 출현한 식물플랑크톤은 총 297종으로, 규조류 98종, 녹조류 148종, 남조류 23종, 그 외 와편모조류를 포함한 기타조류 28종으로 확인되었고, 조사시기별 출현종은 3월 116종, 6월 163종, 8월 162종, 11월 169종으로 1차 조사를 제외한 대부분의 시기에 다소 높은 출현종수를 보였다. 조사기간 동안 확인된 식물플랑크톤의 개체수는 $124{\sim}59,148cells\;mL^{-1}$의 범위를 나타냈고, 조사시기별 평균 출현개체수는 3월 $3,443cells\;mL^{-1}$, 6월 $4,055cells\;mL^{-1}$, 8월 $11,763cells\;mL^{-1}$, 11월 $4,614cells\;mL^{-1}$로 봄철에서 여름철로 계절이 진행되면서 증가한 후 가을철로 접어들면서 다시 감소하는 경향을 보였는데 이는 남조류의 개체수 변화에 따른 결과로 확인되었다. 식물플랑크톤 군집과 이화학적 요인을 이용한 SOM 분석 결과 $9{\times}6$ 격자에서 최적화되었고, 5개의 그룹으로 분류되었다. SOM 분석을 통한 식물플랑크톤의 군집과 연관이 있는 이화학적 요인은 수온, SS, DO, BOD, TP, Chl-a로 확인되었고 pH, TN, $NH_3-N$, $NO_3-N$, $PO_4-P$, 전기전도도 등은 관련성이 낮은 것으로 나타났다. 식물플랑크톤 군집과 이화학적 요인 간의 Pearson's correlation coefficient를 산출한 결과 식물플랑크톤의 군집은 대체로 수온, DO, SS, TP, 전기전도도, Chl-a와 통계적 유의성을 보였고, pH, TN, $NH_3-N$, $NO_3-N$, $PO_4-P$ 등과는 유의성이 낮은 것으로 확인되었다. 결론적으로 전라남도 내 주요 호소에서의 식물플랑크톤 군집의 분포는 주로 수온, SS, DO, BOD, Chl-a와 관계가 있는 것으로 확인되었고 pH, TN, $NH_3-N$, $NO_3-N$, $PO_4-P$와의 관련성은 낮은 것으로 확인되었다.

미세조류를 이용한 오·폐수 영양염류 제거효율 평가 (Evaluation of Nutrients Removal Efficiency in Effluents of Sewage and Wastewater using Microalgae)

  • 김숙찬;김한순
    • 생태와환경
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    • 제50권2호
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    • pp.187-194
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    • 2017
  • 본 연구는 경상북도에 위치한 하천과 호소에서 채집한 미세조류의 배양실험을 통해 영양염류 제거에 유용한 미세조류를 탐색하고, 실제 배출되는 폐수, 개인하수 및 가축분뇨 방류수에 미세조류를 접종하여 질소와 인 제거효율을 평가하고자 하였다. 조류를 채집하여 예비 배양조에서 배양한 미세조류 군집의 우점종은 Monoraphidium contortum, Scenedesmus acutus, Coelastrum microporum, Chlorella sp.로 나타났으며, 4000 Lux와 8000 Lux 조도에서 인공폐수를 배양액으로 배양한 미세조류 군집의 우점종은 Chlorella sp., Scenedesmus obliquus로 나타났다. 8000 Lux 조도에서 $NO_3-N$ 제거율은 63.0%~83.6%로 나타났고, 4000 Lux 조도에서 $NO_3-N$ 제거율은 27.2%~88.1%로 나타났다. 4000 Lux와 8000 Lux 조도에서 $PO_4-P$의 제거율은 95.3% 이상으로 $NO_3-N$의 제거율보다 높게 나타났다. $NO_3-N$$PO_4-P$의 제거 효율은 $1.0{\times}10^6cells\;mL^{-1}$ 농도로 접종하였을 때 $1.0{\times}10^5cells\;mL^{-1}$$1.0{\times}10^7cells\;mL^{-1}$ 농도로 접종하였을 때 보다 높게 나타났다. 미세조류를 이용한 인공폐수에서의 TN과 TP 제거율은 각각 94.9%과 90.0%로 나타났으며, TN과 TP 제거속도는 $1.961mg\;L^{-1}\;day^{-1}$, $0.200mg\;L^{-1}\;day^{-1}$로 나타났다. 실험에 사용된 모든 폐수에서 미세조류를 이용하여 영양염류가 제거되었고, 그중 개인하수 방류수가 영양염류 제거율이 가장 높게 나타났다.

E. coli에서 근류균 섬유소 분해효소 유전자의 발현 및 생화학적 특성조사 (Expression and Biochemical Characterization of CMCase Gene of Rhizobium fredii Usda193 in Escherichia coli)

  • 윤호종;박용우;임선택;강규영;윤한대
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제23권3호
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    • pp.275-281
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    • 1995
  • From the plasmid pYA300 carring a CMCase of Rhizobium fredii USDA193 plasmid was subcloned into pBluescript II KS(+)/pBluescript II SK(+) vectors and designated pYA500 and pYA600, respectively. Escherchia coli cells transformed with pYA500 porduced the CMCase more than with pYA600. The orientation of the cloned fragment in pBluescript vector had the effect on gene expression in E. coli background. When the 1.7 kb CMCase gene fragment of R. fredii USDA193 was hybridized to EcoRI-digested total DNA from R. meliloti and R. fredii USDA 191 the unique bands hybridized respectively, indicating that some genetic diversity exists in the EcoRI restriction enzyme site for CMCase gene in Rhizobium strains. The optimum pH of enzyme activity was 7 and the optimum temperature of that was nearly 37$\circ$C. The cellulase-minus derivatives of pYA500 were constructed by Tn5 insertional mutation. Among 6000 transconjugants, two mutant plasmids (designated pYA500::Tn5a and pYA500::Tn5b) were detected from the cellulase- negative transconjugants. The product of CMCase gene was analyzed by one dimensional SDS- PAGE of the cell extracts. About 45 kDa protein was considered to be a product of CMCase gene.

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Baculovirus-곤충세포 상호반응에 대한 생화학적 연구 -I. AcNPV의 곤충세포 감염시 배지 첨가물을 이용한 재조합 ${\beta}-galactosidase$ 생산 향상- (Biochemical Analysis of Baculovirus-insect Cell Interaction: I. Improved Recombinant ${\beta}-Galactosidase$ Production Using Medium Additives at AcNPV Infection of Insect Cells)

  • 이기웅;김태용;정인식
    • Applied Biological Chemistry
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    • 제38권6호
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    • pp.485-489
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    • 1995
  • T-flask와 air-lift 생물반응기를 이용하여 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV)의 Tn5B1-4 세포에의 감염시 fatty acid 및 lipid, mannose, folic acid, $CaCl_2$등의 배지 첨가물이 재조합 ${\beta}-galactosidase\;({\beta}-gal)$ 생산에 미치는 영향을 조사하였다. Cholesterol, tocopherol, tricaprylin 또는 mannose를 첨가하거나 folic acid를 보강첨가 했을 때 AcNPV의 재조합 ${\beta}-gal$ 생산은 향상되었으나 $CaCl_2$의 보강 첨가는 ${\beta}-gal$ 생산을 높이는데 효과적이지 못했다. Air-lift 생물반응기에서 0.34 mM cholesterol, 2.2 mM mannose 및 0.045 M folic acid를 보강 첨가한 배지를 이용하였을 때 재조합 ${\beta}-gal$ 생산은 basal medium에 비해 약 2배 정도의 증진 효과가 있었다.

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효모세포에서 KEM1::lacZ 융합 단백질의 위치결정 (Localization of a KEM1::lacZ Fusion Protein in Yeast Cells)

  • 김진미
    • 미생물학회지
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    • 제32권1호
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    • pp.12-19
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    • 1994
  • Saccharomyces cerevisiae의 KEMI 유전자는 세포의 영양 상태에 따라 spindle pole body나 microtubules의 기능을 조절하는 것으로 알려져 있다. 이 유전자 산물의 세포내 분포 및 기능을 규명하기 위하여, KEM1::lacZ 융합 유전자를 제조하였다. 즉, 클론된 KEM1 유전자에 대장균의 ${\beta}$-galactosidase 구조유전자를 갖는 mini-Tn10-LUK element를 무작위 삽입한 pool을 제조하고, 이를 분석하여 KEM1의 기능 부위가 약 3.5kb에 해당함을 확인하였고, KEM1의 기능이 살아있는 KEM1::lacZ 융합 유전자의 클론을 선별하였다. 이 클론을 ${\beta}$-galactosidase 항체를 이용한 indirect immunofluorescence 방법으로 분석하여 KEM1::lacZ 융합 단백질이 핵주변에 위치함을 확인하였다.

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