Experiments were performed to study the effects of diluents, cryoprotectant, equilibration time, thawing temperature and addition of BSA and egg yolk. Among the various diluents, Alsever's solution was the best for sperm cryopreservation. A combination of Alsever's solution and 15% ethylene glycol showed the better results than others did. Sperm activity indection and survival rate gradually decreased with the equilibration time. The appropriate thawing temperature was 30 ${\pm}1^{\circ}$C. These results indicate that sperm cryopreservation methods can be developed in tiger puffer.
Various biometric and geometric measures were used to discriminate between the morphologically similar river puffer, Takifugu obscurus, tiger puffer, T. rubripes, their hybrids, and their triploid hybrids. The hybrids and triploid hybrids had greater anal fin width, nostril width, and snout length than the parental species (p<0.05). However, they had less caudal peduncle depth, inter-orbital width, head length, and head width(p<0.05). The morphometric and meristic characteristics of the hybrids and triploid hybrids were either intermediate between the parental species or more similar to those of one parental species. However, the external morphology of the hybrids and triploid hybrids was predominantly maternal. The triploid hybrids had asymmetry in the fin rays and gill raker numbers. This study identified phenotypic characteristics by distinguishing the morphological variables of river puffer, tiger puffer, their hybrids, and their triploid hybrids.
Experiments were performed to find out the physico-chemical properties of milt, and morphological changes of cryopreserved spermatozoa in tiger puffer, Takifugu rubripes. The average number of sperm and spermatocrit in milt stripped were $9.81{\pm}0.34{\times}10^{10}/m{\ell}$ and $97.8{\pm}0.8$, respectively. While total lipid concentration from seminal fluid was higher than that from sperm, total protein concentration from sperm was higher than that from seminal fluid, Na and K concentrations in sperm and those in seminal fluid were similar each other, However, glucose from sperm and seminal fluid were not detectable. Spermatozoon of tiger puffer was consisted of head, middle Piece and tail. Size of head showing horseshoe shape was $0.65{\pm}0.10{\mu}m$ in diameter and $1.35{\pm}0.30{\mu}m$ in length. The head fully containing chromatin did not have acrosome. Mitochondrion in middle piece was $0.2{\mu}m$ in average diameter and flagellum showed 9+2 structure. A few of cryopreserved spermatozoa showed morphologically loose or swollen plasma membranes.
Several of our recent studies have focused on mass production of the marine Cladoceran Diaphanosoma celebensis, which can serve as a feed substitute for Artemia nauplii in the culture of larval marine fish. We compared the growth and survival rates of tiger puffer Takifugu rubripes fed D. celebensis with those fed Artemia. The group fed D. celebensis showed an increase in growth from 0.10 g to 1.78 g, while the group fed enriched Artemia had a growth from 0.10 g to 0.92 g. The survival rate of fish fed D. celebensis was 86.7% while that of fish fed enriched Artemia was 51.1%, indicating that the former group was superior to the latter both in growth and survival rate. Fatty acid analysis revealed that D. celebensis fed Nannochloropsis oculata and Schizochytrium sp. had an eicosapentaenoic acid (EPA) content of 16.42% and a docosahexaenoic acid (DHA) content of 3.93%. Meanwhile, juvenile tiger puffer fed D. celebensis had an EPA content of 9.12% and a DHA content of 10.69%. Juvenile tiger puffer fed D. celebensis had a similar n-3 highly unsaturated fatty acid content to that of tiger puffer fed enriched Artemia which had an EPA content of 5.82% and a DHA content of 15.90%, indicating that no additional enrichment was required.
Condition for fresh storage of tiger puffer in the liquid state were investigated in several experiments. When marine fish ringer solution and 1% NaCl were used as the diluent for the short-term preservation method, spermatozoa activity index (SAI) and survival rate showed the best result among the various diluents tested. The dilution rate for the shortterm preservation of spermatozoa was suitable between 3 and 5 times with the 1% NaCi diluent. The appropriate range of temperature for the short-term preservation showed between 0 and $5^{\circ}C$. In order to keep high SAI and survival rate of spermatozoa, antibiotic addition (800 ppm neomycin) could be suggested. These results indicated that the short-term preservation method could be employed in tiger puffer spermatozoa.
We investigated the physiological responses of the river puffer, Takifugu obscurus, the tiger puffer, T. rubripes, a hybrids of the two (river puffer${\times}$tiger puffer) and a hybrid triploids to acute changes of salinity from 30 psu to 0 psu and from 0 psu to 30 psu. The blood and plasma factors of each species were elevated for 48, 72, or 96 hrs, and thereafter decreased due to hyper-osmoregulation and hypo-osmoregulation. In hyper-osmoregulation and hypo-osmoregulation, the cortisol concentration of river puffer, hybrids, hybrid triploids and tiger puffer increased for 12 or 48 hrs, and decreased thereafter. Chloride cells in the gill filaments of each species increased with increasing salinity, and melano-macrophages in the kidney tissue of each species increased with decreasing salinity. In conclusion, the hematological and stress responses of the hybrids were between those of the river puffer and tiger puffer, and the hematological responses of the hybrid triploids were higher than those of the other groups. The stress response of the hybrids was more sensitive than that of the hybrid triploids. In all groups, the histological responses of kidney in hyper-osmoregulation were more sensitive than those in hypo-osmoregulation.
Park, In-Seok;Lim, Sung Young;Lee, Tae Ho;Gil, Hyun Woo;Yoo, Gwang Yeol
Development and Reproduction
/
v.21
no.2
/
pp.181-191
/
2017
A comparison of the growth, hematological values, fatty acids, and gonadal and growth hormonal changes of river puffer, Takifugu obscurus, tiger puffer, T. rubripes, their hybrids (river puffer ${\times}$ tiger puffer) and hybrid triploids was performed during 3 months of their early growth period. Several features were observed during these 3 months: hybrids showed the highest levels of specific growth rate, 1.48%; hybrid triploids showed the smallest change in viscera fat (P<0.05), but GSI was not significantly different among groups (P>0.05). Considering hematological parameters, hybrid triploids had increased mean corpuscular volume and mean corpuscular hemoglobin (P<0.05), but other parameters were not significantly different between groups (P>0.05). With respect to fatty acids, puffer fish, hybrids and hybrid triploids contained fatty acids such as SFAs, MUFAs, n-3 PUFAs and n-6 PUFAs. There were significantly different amounts of total fatty acids between groups (P<0.05), however, rates of changes in fatty acids did not differ significantly between groups (P>0.05). Gonadal hormone (estradiol and testosterone) changes in the river puffer and tiger puffer were significantly higher than that observed in hybrids and hybrid triploids. The hybrids and tiger puffers had higher amounts of growth hormone (thyroid stimulating hormone and thyroxine) than the hybrid triploids and river puffers (P<0.05).
Diseased tiger puffer (Takijugu rubripes) showed anorexia and severe anemia in the gills. In wet mount preparations Heterobothrium sp. with 4 sets of clamps on the opisthohaptor attached to the gill filaments of the diseased fish. From the drum-shaped filter for filtration of the culturing water and the sediment of aquarium held the diseased fish in the laboratory, their eggs forming long strings through connection of the bipolar filaments could be easily collected. The parasites with 4 pairs of clamps on the opisthohaptor were 2.38mm in length and 0.71 mm in width, but had no isthmus which was separated the opisthohapor from the body proper. The parasites could be easily distinguished from Heterobothrium tetrodonis and H. okamotoi in the absence of distinct isthmus, and resembled H. yamagutii described from the gills of Takifugu xanthopterus in Japan. Their eggs were yellowish spindle in shape and 180-200 x 5-6 Iffil in size, which were pointed at both ends. The eggs were linked to adjacent egg shells like a string of beads by the filaments. Onchomiracidia, ciliated larvae spawned from the eggs were 133 Iffil (120-146 Iffil) x 751ffil (68-80 Iffil) in size. The length of the ciliates was 12 Iffil in the anterior part of the larvae and 14 Iffil in the posterior part. Round or leaf-shaped young parasites attached on the secondary gill lamellae. There was a tendency that most of round smaller parasites without an opisthohaptor were found in the middle part of the gill lamellae while leaf-shaped larger ones with a opisthohaptor attached on the distal part of the gill filaments. Each clamp of mature parasites grasped one secondary gill filament which resulted in bending of the filaments and hyperplasia of the epithelium and mucous cells. In the branchial cavity around the pseudobranch, mature parasites grasped the adjacent ones by means of the clamps, and the epithelia of the branchial cavity around the parasites showed severe irregular hyperplasia and erosion with strongly PAS-positive mucous cells.
A case of disease was occurred in tiger puffer, Takifugu rubripes, reared in circulated system (water temperature was about $20^{\circ}C$) on land in Korea. Diseased fish showed a unique external sign, the cloudy skin ulcer in various sizes. We investigated the cause of disease, and isolated one pure cultured bacterium, TP01. This had 99.7% homology with Vibrio atlanticus by sequence analysis of the 16S rRNA and rpoA genes. TP01 showed some differences with other reported V. atlanticus strains in the biochemical characteristics as like Voges-Proskauer test and gelatin hydrolysis.
This study investigated the distribution of scuticociliates in the intestine, spleen, kidney, testis, brain, pericondrial bone and muscle layer of the tiger puffer, Takifugu rubripes, infected with scuticociliates. Scuticociliates were infiltrated in the connective tissues of the outer layer of the intestine, spleen, kidney, testis, brain, pericondrial bone and muscle layer. In brain, membranous tissue and optic lobe cortex separation were accompanied by the infection of scuticociliates. Other internal tissues and organs did not show any lesions expect for heavy deposition of hemosiderin in spleen.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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