In general, a SYPRO Ruby dye is well known as a sensitive fluorescence-based method for detecting proteins by one-or two-dimensional SDS-PAGE (1-DE or 2-DE). Based on the SYPRO Ruby dye system, the combined two-dimensional fibrin zymography (2-D FZ) with SYPRO Ruby staining was newly developed to identify the Bacillus sp. proteases. Namely, complex protein mixtures from Bacillus sp. DJ-4, which were screened from Doen-Jang (Korean traditional fermented food), showed activity on the zymogram gel. The gel spots on the SYPRO Ruby gel, which corresponded to the active spots showing on the 2-D FZ gel, were analyzed by a matrix-assisted laser desorption ionization time of flight (MALDI-TOF) mass spectrometric analysis. Five intracellular fibrinolytic enzymes of Bacillus sp. DJ-4 were detected through 2-D FZ. The gel spots on the SYPRO Ruby dye stained 2-D gel corresponding to 2-D FZ were then analyzed by MALID TOF MS. Three of the five gel spots proved to be quite similar to the ATP-dependent protease, extracellular neutral metalloprotease, and protease of Bacillus subtilis. Also, the extracellular proteases of Bacillus sp. DJ-4 employing this combined system were identified on three gels (e.g., casein, fibrin, and gelatin) and the proteolytic maps were established. This combined system of 2-D zymography and SYPRO Ruby dye should be useful for searching the specific protease from complex protein mixtures of many other sources (e.g., yeast and cancer cell lines).
Park Sun-Young;Park Byoung-Chul;Lee Ah-Young;Kho Chang-Won;Cho Say-Eon;Lee Do-Hee;Lee Baek-Rak;Myung Pyung-Keun;Park Sung-Goo
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제16권5호
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pp.804-807
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2006
Bacterial serine proteases, especially those from Bacillus, have been extensively studied. Intracellular serine protease 1 (Isp1) is responsible for most of the proteolytic activity in B. subtilis. To identify Isp1 substrates and study its physiological functions, a mutant of Isp1, which has lost the enzymatic activity, was constructed. Through a GST affinity chromatographic method, several Bacillus proteins that specifically interacted with S246A mutant Isp1 protein were isolated and then identified by MALDI-TOF analysis. ClpC and elongation factor Tu (EF-Tu) were among those proteins specifically bound to mutant Isp1. In addition, several proteins involved in stationary phase adaptive response (such as RNA polymerase sigma factor, spoIIIE) were also identified. These findings led us to suggest that the major function of this serine protease, whose expression is greatly increased during the stationary phase, is to mediate transition of the cell into the stationary phase in a proper and timely manner.
This study investigated the characteristics of wood tar, produced as a byproduct during the production of charcoal using oak wood by the modified traditional kiln and mechanical steel kiln. The wood tar was analyzed with a number of techniques, including Py-GC/MS, NMR, MALDI-TOF, FT-IR, TG and DSC. The Py-GC/MS analysis indicated that modified traditional kiln generated a higher hydrocarbon ratio in the wood tar than that of mechanical steel kiln. On the other hand, mechanical steel kiln resulted in a higher proportion of phenolic and aromatic hydrocarbon components than that of modified traditional kiln. Those results were also confirmed by NMR analysis. The MALDI-TOF analysis suggested that the wood tar produced in the mechanical steel kiln had a slightly higher molecular weight than the wood tar produced in the modified traditional kiln. In addition, the FT-IR analysis showed characteristic peak of symmetrical stretching vibration of $CH_3$ from the modified traditional kiln while characteristic peaks of the C-C and C-O stretching vibration were observed from the mechanical steel kiln. Moreover, TG and DSC analysis suggested that the mechanical steel kiln is more thermally stable than that of modified traditional kiln. Those findings clearly showed that the method of making charcoal greatly affects the properties of wood tar.
Objective: To investigate discriminating protein patterns and potential biomarkers in serum samples between pre/postoperative pancreatic cancer patients and healthy controls. Methods: 23 serum samples from PC patients (12 preoperative and 11 postoperative) and 76 from healthy controls were analyzed using matrix-assisted laser desorption and ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF MS) technique combined with magnetic beads-based weak cation-exchange chromatography (MB-WCX). ClinProTools software selected several markers that made a distinction between pancreatic cancer patients and healthy controls. Results: 49 m/z distinctive peaks were found among the three groups, of which 33 significant peaks with a P < 0.001 were detected. Two proteins could distinguish the preoperative pancreatic cancer patients from the healthy controls. About 15 proteins may be potential biomarkers in assessment of pancreatic cancer resection. Conclusion: MB-MALDI-TOF-MS method could generate serum peptidome profiles of pancreatic cancer and provide a new approach to identify potential biomarkers for diagnosis and prognosis of this malignancy.
본 논문에서는 HMM을 이용한 제스처 인식을 입력 인터페이스로 사용한 한자 학습 콘텐츠에 대해 제안한다. 제안한 시스템의 입력정보는 TOF 카메라 영상으로부터 3차원 정보를 받으며, 제스처 인식 방법은 사용자의 포즈를 예측하는 부분과 연속된 포즈들로부터 제스처를 인식하는 부분으로 구성되어 있다. 사용자와 컴퓨터사이의 의사소통에서, 별도의 추가 장비를 사용하지 않고 사용자의 행동에 의한 조작을 통해 사용자가 쉽게 조작할 수 있도록 편리함을 제공하였다. 또한 대형 디스플레이와 다양한 멀티미디어 요소를 이용하여 몰입과 흥미를 유발시킬 수 있기 때문에 정보 전달을 극대화할 수 있다. 본 논문에서 제안한 에듀테인먼트 한자 학습 콘텐츠는 교육적 내용를 제공하고 사용자가 흥미를 느끼도록 하여 자연스레 한자를 습득할 수 있고, 제스처 인식을 기반으로 하므로 사용자에게 콘텐츠 체험을 통한 시너지 효과를 기대할 수 있다.
본 논문에서는 가상시점 깊이영상 생성 기법을 이용한 다양한 시점의 CGH(computer generated hologram) 생성 시스템을 제안한다. 제안한 시스템에서는 먼저 TOF(time of flight) 깊이 카메라를 이용하여 신뢰도 높은 기준시점 깊이영상을 획득하고 카메라 보정 과정을 통해 기준시점 카메라들의 카메라 파라미터를 추출한다. 가상시점 카메라의 위치가 정의되면 기준시점 카메라와의 거리와 위치를 고려하여 최적의 기준시점 카메라들을 선택한다. 가상시점 카메라와 가장 가까운 기준시점 카메라를 주 기준시점으로 결정하고 가상시점 깊이영상을 생성한다. 주 기준시점 카메라와 위치가 반대인 기준시점 카메라를 보조 기준시점으로 선택하여 가상시점 깊이영상을 생성한다. 주 기준시점을 통해 생성된 가상시점 깊이영상에 나타나는 가려짐 영역을 보조 기준시점으로 생성된 가상시점 깊이영상으로부터 찾아 보상한다. 보상이 되지 않고 남은 홀영역은 주변값 중 가장 작은 값으로 채워 최종 가상시점 깊이영상을 생성한다. 최종 가상시점 깊이 영상을 이용하여 CGH를 생성한다. 실험을 통해 기존의 기법보다 제안하는 가상시점 깊이영상 합성 시스템의 성능이 우수함을 확인하였다.
가벼운 다공성 구조재로서 널리 사용되는 캘빈 폼(foam) 재료의 탄성특성을 초음파를 이용하여 조사하였다. 캘빈 폼의 구조는 tetrakaidecahedron의 단위 셀(unit cell)이 규칙적으로 3차원 배열된 구조를 갖고 있는데 본 연구에서는 SoildWorks 프로그램에서 캘빈 단위 셀을 설계하고 ABS 플라스틱 재료를 이용하여 3차원 프린터로 제작한 후 초음파시험을 수행하였다. 캘빈 구조체는 기공이 많은 재료이기 때문에 초음파가 투과할 수 없어서 빈 공간을 모두 파라핀 왁스로 충진하여 초음파가 투과할 수 있도록 하였다. 파라핀을 충진한 캘빈 구조체는 초음파의 비행시간(TOF)을 이용하여 초음파 속도를 계산한 후, 이 복합 구조체에 대한 탄성 구조 모델을 기반으로 캘빈 구조체만의 탄성계수를 계산하였다. 측정된 캘빈 구조체의 탄성계수 값은 모재(ABS 플라스틱) 탄성계수의 약 3.4%가 되는 것으로 나타났는데 이 평가 결과는 선행된 연구 결과들에서 나타난 실험값이나 이론 해석 결과와 잘 일치하는 것을 확인할 수 있었다.
동경공업대학교의 3MV 펠레트론가속기를 사용하여 10에서 90keV 영역에 대하여 $^{197}Au$의 중성자포획 스펙트럼을 측정하였다. 중성자 펄스빔은 $^7Li(p,n)^7Be$반응을 통하여 발생되었다. 사용되어진 양성자 빔의 폭은 1.5-ns였다. 금 시료에 입사된 중성자의 에너지 스펙트럼은 $^6Li$-glass 섬광검출기의 중성자 비행시간법을 사용하여 측정하였다. 금 시료의 중성자포획에 의해서 발생된 감마선은 anti-Compton NaI(TI) 검출장비를 사용하여 측정되었다. 본 연구에서는 5개의 중성자 에너지 역영을 선택했고, 각각의 에너지영역에서 얻어진 감마선파고스펙트럼을 표시하였다. 본 연구에서 얻어진 스펙트럼은 처음으로 얻어진 결과이며, 중성자 결합에너지부근에 몇 개의 천이 피크가 보인다.
3개 혹은 그 이상의 고정노드로 구성된 다변측량법은 실내의 실시간 위치 인식 시스템 분야에서 현재 널리 사용되고 있다. 하지만 이 고정노드 중 일부가 장애물 및 고정노드의 불안정에 따라 통신도달성이 결여된 상황에서는 효율적 위치 정보를 획득하기가 어렵다. 이러한 환경에서 위치측정 결여 및 변동을 개선하기위하여 본 논문에서는 TOF(Time of Flight)기반으로 이동노드의 변위 추정을 위한 벡터예측알고리즘과 효율적인 거리평균을 위한 칼만필터를 이용하여 기존의 다변측량법에서 발생하는 내재적 위치측정오차를 줄일 수 있는 새로운 알고리즘을 제안한다. 보행자가 이동노드와 함께 이동하고 임의의 고정노드로부터 거리측정이 실패하더라도, 현재 및 이전 거리측정 값을 이용하는 제안한 알고리즘은 이동노드와 거리측정에 실패한 고정노드 사이의 거리를 예측할 수 있다. 실험결과 기존의 방법 대비 위치추정 성능과 효율이 향상됨을 확인하였다.
This study was to evaluate the protein profile of seminal plasma using 2-DE in Hanwoo. Seminal plasma was harvested from five mature Hanwoo, and seminal plasma protein was extracted by M-PER Mammalian Protein Extraction Reagent. Proteins were refined by clean-up kit and quantified by Bradford method until total protein was $300\;{\mu}l$. Immobilized pH gradient (IPG) strip was used 18 cm and 3~11 NL. SDS-PAGE was used 12% acrylamide gel. Each gels were visualized by comassie brilliant blue and silver staining. These spots were analyzed by MALDI-TOF MS and searched on NCBInr. The result, 20 proteins of 36 protein spots were searched through peptide sequencing on the NCBInr. 8 proteins profiled by 2-DE were proved through previous bovine studies and the name of each protein was albumin, nucleobindin, clusterin, TIMP-2, spermadhesin Z13, spermadhesin-1 and BSP proteins (BSP 30 kDa and BSP A1/A2). 12 new proteins were ATP synthase, protein MAK16 homolog, Transmembrane protein 214, E3 ubiquitin-protein ligase BRE1A, dual serine/threonine and tyrosine protein kinase, tissue factor pathway inhibitor 2, alpha-actinin-4, RUN domain-containing protein 3B, catenin alpha-1, protein-glutamine gamma-glutamyltransferase 2, plakophilin-1 and inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H1 has not been previously described in the bovine seminal plasma study. These proteins may be contribute to define the type of proteins affecting fertility of male and improve the fertilizing ability of semen in Hanwoo.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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