We have got several clones from Serratia marcescens which stimulated the cells to use maltose as a carbon source in Escherichia. coli TP2139 ( lac, crp). One of the cloned genes, pCKB17, was further analyzed. In order to find whether the increased expression of the gent was under the direction of maltose metabolism, we constructed several recombinant subclones. We have found that the clone, pCKB17AV, codes maltose metabolism stimulation(mms) gene. E. coli transformed with the cloned gene showed increase in the activity of maltose utilzation, The recombinant proteins expressed by multicopy and induction with IPTG, one polypeptide of 29-kDa, was confirmed by SDS-PAGE. The overexpression of maltose-binding proter protein in the presence of mms gene was confirmed by Western blot analysis. Southern hybridization analysis confirmed that the cloned DNA fragment was originated from S. marcescens chromosomal DNA.
Three chitinase genes (chiA, chiB, and chiC) were cloned into E. coli by PCR amplification from Serratia marcescens KFRI314. The sizes of cloned chitinase genes were 1692 bp, 1500 bp, and 1443 bp which correspond to 563, 499, and 480 amino acids, respectively. Recombinant chitinases were overexpressed using pHCEIA expression vector and purified to homogenity. The molecular weights of chitinases were about 60kDa, 50 kDa, 52 kDa, respectively. Optimum pHs were around pH 5~6 and optimum temperatures were $45{\sim}50^{\circ}C$ while 90% of enzyme activities were stable up to $50^{\circ}C$. The specific activities of ChiA, ChiB, and ChiC were 233.1, 278.8, $111.3{\mu}mol\;(min)^{-1}\;mg^{-1}$ against colloidal chitin. From experiments using TLC and fluorescent substrate analogues, it was demonstrated that ChiA was endo-chitinase while ChiB and ChiC were chitobiosidase.
The chitinase-producing bacterial strain C-1 is one of the key chitinase-producing biocontrol agents used for effective bioformulations for biological control. These bioformulations are mixed cultures of various chitinolytic bacteria. However, the precise identification, biocontrol activity, and the underlying mechanisms of the strain C-1 have not been investigated so far. Therefore, we evaluated in planta biocontrol efficacies of C-1 and determined the draft genome sequence of the strain in this study. The bacterial C-1 strain was identified as a novel Serratia sp. by a phylogenic analysis of its 16S rRNA sequence. The Serratia sp. C-1 bacterial cultures showed strong in planta biocontrol efficacies against some major phytopathogenic fungal diseases. The draft genome sequence of Serratia sp. C-1 indicated that the C-1 strain is a novel strain harboring a subset of genes that may be involved in its biocontrol activities.
Optimal media and cultural conditions for the production of prodigiosin-like pigment were established using Serratia sp. KH-95. Glucose and phosphate(K2PO4) stimulated the cell growth, but inhibited the production of pigment at concentration levels of above 10 g/L and 2.0 g/L, respectively. Addition of soy been oil or rice oil to the production medium accelerated cell growth up to more than 2-3 times, but the production of prodigiosin increased about 15-20% in spite of the good cell growth. The effect of pH on the production of pigment was investigated in a 5 liter-bioreactor. When the pH of culture broth was maintained below 8.0, most of pigment was attached to the surface of cells. When the pH of culture broth was above 8.5, however, about 70% of total pigment was suspended in the supernatant of the broth. The cell growth and production of pigment were inhibited at dissolved oxygen concentration of below 10% of air-saturation.
Serratia marcescens가 생성하는 단백질 분해효소를 연구하기 위하여 효소의 활성도를 규명한 결과는 다음과 같다. (1)단백질 분해효소의 활성은 PH6.0과 PH7.5의 두 범주에서 최대로 나타났다. (2)45$^{\circ}C$에서 효소의 활성도가 가장 높았다. 이러한 결과로 미루어 볼때 Serratia marcescens의 단밸질 분해효소는 중성 PH 범위에서 안정된 효소활성을 갖는 것으로 생각할 수 있으며 다른 효소에 비해 비교적 높은 온도에서 활성도가 더욱 좋음을 알 수 있었다.
This study aimed to identify and characterize the antimicrobial activity of prodigiosin produced by Serratia sp. $PDGS^{120915}$ isolated from stream water in Busan, Korea; the identification was performed using phonological, biochemical, and molecular techniques, including 16S rRNA sequence analysis. Prodigiosin from the bacterial culture was purified by high-performance liquid chromatography (HPLC), and its antimicrobial activity and minimum inhibitory concentrations (MICs) were evaluated against 10 intestinal pathogenic gram-positive and negative bacteria. The results revealed that the isolated prodigiosin exhibited high antimicrobial activity against Listeria monocytogenes, Bacillus cereus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium, Staphylococcus aureus, and Vibrio parahaemolyticus; further, the isolated prodigiosin showed minimum inhibitory concentrations (MICs) between $3{\mu}g/ml$ and 30 mg/ml, but they were not active against Bacillus subtilis, Enterococcus faecalis, Klebsiella pneumonia, and Escherichia coli. In conclusion, prodigiosin isolated from Serratia sp. $PDGS^{120915}$ showed high antimicrobial activity against intestinal pathogenic bacteria and has potential applications in the development of new antimicrobial agents.
This study was undertaken to assess the susceptibility of pigmented and nonpigmented strains of Serratia marcescens to antibiotics and human sera, and the effect of culture filtrates from pigmented and nonpigmented of Serratia marcescens on humoral and cellular immune responses in mice to thymus-dependent and indepependent antigens. Humoral immune response was measured by hemagglutinin (HA) and hemolysin (HE) to sheep red blood cell (SRBC), and Arthus or antibody response to polyvinylpyrrolidone (PVP). The cellular immune response was measured by delayed-type hypersensitivity (DTH) determined by footpad swelling reactin to SRBC. The resistance of pigmented strains of Serratia marcescens to the bactericidal action of heat inactivated human serum was insignificantly greater than that of nonpigmented strains. However, the pigmented strains were significantly more resistant to the bactericidal action of heat-untreated human serum than that of nonpigmented strains. The clinical isolates of Serratia marcestens was also tested for their resistance to several antibiotics. There was no difference between the pigmented and non-pigmented strains in the resistance to carbenicillin. However, nonpigmented strains were more resistant to gentamicin, kanamycin and tobramycin than the pigmented strains. The intraperitoneal administration of culture filtrates from the pigmented or nonpigmented strains into mice caused enhancemented of antibody response to SRBC or PVP, and of DTH to SRBC. Besides, their enhancement of immune responses was more prominent when culture filtrate from the pigmented strains was administered.
Serratia marcescens (S. marcescens)는 Gram-음성 박테리아로 soytone과 에탄올이 함유된 Cang's soytone (CS) 배지에서 $28^{\circ}C$, pH 7.5의 조건으로 배양할 때 가장 많은 붉은 색소를 생성하였다. S. marcescens 균주로부터 붉은 색소를 분리, 정제하기 위하여 여러 가지 유기용매를 사용하였다. 분리 정제한 붉은 색소는 가시광선 영역의 537 nm에서 ${\lambda}_{max}$를 가지고 있었고, HPLC-Mass로 분석한 결과 분자량 537과 565 g을 가지는 두 가지 물질로 구성되어 있음을 확인하였다. 또한 상온과 pH 6 이하의 산성조건에서는 태양광에도 안정함을 확인하였다.
토양으로부터 다량의 적색 색소를 생산하는 KH-95 균주를 분리하였다. 형태학적 특성 및 생리학적 특성을 조사한 결과 KH-95는 Serratia sp.로 동정되었다. 본 균주가 생산하는 적색색소를 용매 추출 및 실리카겔 칼럼 크로마토그라피를 이용하여 분리, 정제 후 기기분석을 수행한 결과 prodigiosin의 일종으로 밝혀졌다. Serratia sp. KH-95 균주가 prodigiosin계 적색색소를 생산하기 위한 최적 조건은 배양온도 28$^{\circ}C$, 초기 pH는 7.0였으며 배지 조성을 검토 결과 카제인이 색소의 생산에 가장 적합하였다. 대두유, 미강유와 같은 oil을 제외한 대부분의 탄소원과 이용하기 쉬운 질소원인 효모즙, 육즙, 펩톤 등은 균체의 생장은 촉진 하였으나 색소 생산을 현저하게 저해하였다. 최적화된 배지 및 배양조건에서 대두유를 탄소원으로 첨가할 경우 3,380 mg/l의 많은 적색색소가 생산되었다.
Kim, Yong-Gyun;Kim, Keun-Seob;Seo, Ji-Ae;Shrestha, Sony;Kim, Hosanna-H.;Nalini, Madanagopal;Yi, Young-Keun
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제19권3호
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pp.314-322
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2009
Four different bacterial colonies were isolated from an old stock of an entomopathogenic nematode, Steinernema monticolum. They all showed entomopathogenicity to final instar larvae of beet armyworm, Spodoptera exigua, by hemocoelic injection. However, they varied in colony form, susceptibility to antibiotics, and postmortem change of the infected host insects. Biolog microbial identification and 16S rDNA sequence analyses indicate that these are four different species classified into different bacterial genera. Owing to high entomopathogenicity and a cadaver color of infected insect host, Serratia sp. was selected as a main symbiotic bacterial species and analyzed for its pathogenicity. Although no virulence of Serratia sp. was detected at oral administration, the bacteria gave significant synergistic pathogenicity to fifth instar S. exigua when it was treated along with a spore-forming entomopathogenic bacterium, Bacillus thuringiensis. The synergistic effect was explained by an immunosuppressive effect of Serratia sp. by its high cytotoxic effect on hemocytes of S. exigua, because Serratia sp. caused septicemia of S. exigua when the bacterial cells were injected into S. exigua hemocoel. The cytotoxic factor(s) was present in the culture medium because the sterilized culture broth possessed high potency in the cytotoxicity, which was specific to granular cells and plasmatocytes, two main immune-associated hemocytes in insects.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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