Fusogenic liposomes that incorporate Sendai virus envelope proteins, so-called Sendai virosomes, have been developed for in vitro and in vivo genetic modification of animal cells. In this study, several different virosomes of varying lipid compositions were formulated and their in vitro gene-transfer efficiencies compared. The virosomes were prepared by quantitative reconstitution of the Sendai envelope, fusion (F) and hemagglutinin-neuraminidase (HN) proteins into liposomal vesicles. Virosomes that contained luciferase reporter genes were tested in 293 transformed human kidney cells. F/HN-virosomes that were prepared with an artificial Sendai viral envelope (ASVE-virosomes) or phosphatidylserine (PS-virosomes) exhibited an 8- or 6-fold higher gene-transfer efficiency than cationic liposomes that were made with 1,2-dioleoyl-3-trimethylammonium-propane (DOTAP). F/HN-virosomes that were prepared with phosphatidic acid (PA-virosomes) instead of PS were less efficient in gene transfer than either ASVE- or PS-virosomes. In addition, the genetransfer capability of ASVE- and PS-virosomes was maximal at a $Ca^{2+}$ concentration of 510 mM. These results suggest that the incorporated lipid components significantly affect the in vitro gene transfer that is mediated by Sendai F/HN-virosomes.
Sendai virus strain Tianjin is a novel genotype. Here, we investigate the antitumor and proapoptotic effects of ultraviolet-inactivated Sendai virus strain Tianjin (UV-Tianjin) on human breast cancer MDA-MB-231 cells in vitro, as well as the involvement of the apoptotic pathway in the mechanism of UV-Tianjin-induced antitumor effects. MTT assays showed that treatment with UV-Tianjin dose-dependently inhibited the proliferation of MDA-MB-231 cells but not normal MCF 10A breast epithelium cells. Hoechst staining and flow cytometric analysis revealed that UV-Tianjin induced apoptosis of MDA-MB-231 cells in a dose-dependent manner. Moreover, UV-Tianjin treatment resulted in reduction in the mitochondria membrane potential (MMP) and release of cytochrome complex (cyt c) via regulation of Bax and Bcl-2, as well as activation of caspase-9, caspase-3, Fas, FasL and caspase-8 in MDA-MB-231 cells. In summary, our study suggests that UV-Tianjin exhibits anticancer activity in human breast cancer MDA-MB-231 cells through inducing apoptosis, which may involve both the endogenous mitochondrial and exogenous death receptor pathways.
This study was undertaken to establish reliable diagnostic-procedures for the microbiological monitoring of laboratory animals. Murine(mice and rats) antibodies against hemagglutinating virus of Japan(HVJ), mouse hepatitis virus(MHV) and Mycoplasma pulmonis(Mp) were detected sensitively and specifically in experimentally and naturally infected animals' sera by an indirect enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), using urease conjugated antimurine immunoglobulin. The sensitivity and specificity of the complement fixation test which has been apllied widely for serodiagnosis of HVJ, MHV and Mp infections were apparently lower than those of ELISA. From these results, the ELISA was found to be available for the serodiagnosis of HVJ, MHV and Mp infections in mice and rats.
Upon viral infection, the host cell recognizes the invasion through a number of pattern recognition receptors. Melanoma differentiation associated gene 5 (MDA5) and retinoic acid-inducible gene-I (RIG-I) recognize RNA molecules derived from invading viruses, activating down-stream signaling cascades, culminating in the induction of the type I interferon. On the other hand, viruses have evolved to evade type I interferon-mediated inhibition. Hepatitis E virus has been shown to encode a few antagonists of type I interferon and it is not surprising that viruses encode multiple mechanisms of viral evasion. In the present study, we demonstrated that HEV PCP strongly down-regulates MDA5-mediated activation of interferon ${\beta}$ induction in a dose-dependent manner. Interestingly, MDA5 protein expression was almost completely abolished. In addition, polyinosinic polycytidylic acid (poly(I:C))- and Sendai virus-mediated activation of type I interferon responses were similarly abrogated in the presence of HEV PCP. Furthermore, HEV PCP down-regulates several molecules that play critical roles in the induction of type I IFN expression. Taken together, these data collectively suggest that HEV-encoded PCP is a strong antagonist of type I interferon.
Jun, Moo Hyung;Chung, Un Ik;Park, Bong Kyun;Kim, Kyo Joon;Lee, Hun Jun
Korean Journal of Agricultural Science
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v.12
no.1
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pp.153-161
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1985
As a preliminary step for production of large quantities of porcine leucocyte interferon(Por IFN-${\alha}$), various factors such as the sources of leucocytes, inducers and culture conditions were investigated. In addition, an assay system for the potency of porcine interferon was developed in a micro-system by using porcine kidney cell line, PK-15, and vesicular stomatitis virus. By the experiments, it was found that the porcine leucocyte interferon was synthesized more effectively in the leucocyte suspension with the higher viability and the lesser erythrocyte contamination. Regarding cell sources, the peripheral leucocytes produced a consistently higher unit of interferon than the spleen cells. When the efficiency of inducers was compared, the Sendai virus at the concentration of 125 HA unit/ml was found to be more effective for porcine leucocyte interferon production than the Newcastle disease virus. Average potency of 9 batches of the crude interferon measured by the established assay system was 1,200 unit/ml.
Cancers are still difficult targets despite recent advances in cancer therapy. Due to the heterogeneity of cancer, a single-treatment modality is insufficient for the complete elimination of cancer cells. Therapeutic strategies from various aspects are needed. Gene therapy has been expected to bring a breakthrough to cancer therapy, but it has not yet been successful. Gene therapy also should be combined with other treatments to enhance multiple therapeutic pathways. In this view, gene delivery vector itself should be equipped with intrinsic anti-cancer activities. HVJ (hemagglutinating virus of Japan; Sendai virus) envelope vector (HVJ-E) was developed to deliver therapeutic molecules. HVJ-E itself possessed anti-tumor activities such as the generation of anti-tumor immunities and the induction of cancer-selective apoptosis. In addition to the intrinsic anti-tumor activities, therapeutic molecules incorporated into HVJ-E enabled to achieve multi-modal therapeutic strategies in cancer treatment. Tumor-targeting HVJ-E was also developed. Thus, HVJ-E will be a novel promising tool for cancer treatment.
By nuclear transplantation technology twenty eight mice have been produced after transfer of heterozygous biparental eggs. Also heterozygous gynogenetic eggs with two female pronuclei and heterozygous androgenetic eggs with two male pronuclei have been obtained by injecting a male or female pronucleus with Sendai virus into the perivitelline space of enucleated haploid zygotes at pronuclear stage. The success rate of enucleation, karyoplast injection and fusion of both the pronuclei was 80.3, 83.4 and 81.8%, respectively. The overall pronuclei fusion rates by this technique were 56, 50 and 56% in biparental, gynogenetic and androgenetic eggs, respectively. The evidence was ascertained that the gynogenetic and androgenetic eggs were also able to develop in vitro up to blastocyst stage, even though their developmental potential was greatly diminished beyond 2-cell stage. The gynogenetic eggs were able to develop in vivo up to day 10 of pregnancy, while the androgenetic eggs failed to develop in vivo during the same period.
For the improvement of quality control of laboratory mouse, we investigated the environmental condition, histopathological findings and serological test using ELISA to mouse hepatitis virus(MHV), Mycoplasma pulmonis(MP), Clostridium piliforme(TZ) and Sendai virus (HVJ) of ICR, C57BL/6, CBA and C3H/He mice that were supplied from conventional laboratory animal facility. 1. The ammonia concentration of facility was below the recommended concentration, 15ppm, by the KNIH, and the room temperature($21{\sim}23^{\circ}C$) and relative humidity(40~60%) was optimum range recommend by the Ministry of Health and Welfare, respectively. 2. The incidence rate of inapparent disease was 86.6% and the major findings in the liver were vacuolar degeneration with nucleic pleomorphism. The lung was shown the thickening of alveolar wall and interstitial pneumonia with congestion. The kidney and spleen were observed the mild congestion and extramedullary hematopoiesis, respectively. 3. The positive reaction rates against MHV and MP in serological test was 97.9% and 37.5%, respectively but HVJ and TZ were negative. These results suggest that laboratory mice could be infected with MHV and MP under conventional environments. Therefore we recommend to select thoroughly inapparent infected mice and to convert conventional system into SPF facility as soon as possible.
Park, Choong-saeng;Choe, Sang-yong;Lee, Hyo-jong;Park, Hee-sung
Korean Journal of Veterinary Research
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v.30
no.4
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pp.355-360
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1990
Single nuclei from two-, four- and eight-cell mouse embryos were transplanted into enucleated two-cell embryos by micromanipulation and Sendai virus mediated fusion. The developmental potential of these reconstituted embryos in vitro and in vivo was examined. It was found that the single nuclei which were transplanted to enucleated two-cell embryos were not only able to develop to the blastocyst stage in vitro(two-cell nuclei, 76.5%; four-cell nuclei, 68.4%; eight-cell nuclei, 48.3%), but also able to develop to full term in vivo after transfer to recipient mice(two-cell nuclei, 37.1%; four-cell nuclei, 29.6%; eight-cell nuclei, 16.3%). Although the proportion of live young produced after transfer of nucler of nuclear transplant embryos which received eight-cell nuclei was significantly (p<0.05) reduced, it would be suggested that the overall efficiency in producing identical offspring is greater when eight-cell embryos were selected for nuclear donor than two- or four-cell embryos were selected.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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