박테리오파지는 세균에 특이적으로 감염하는 바이러스로 용해 능력이 있는 박테리오파지는 동물질병을 치료하는 항생제 대체제로 사용할 수 있다. 본 연구는 닭에서 가금티푸스를 유발하는 Salmonella enterica serovar Gallinarum(Salmonella Gallinarum)에 대한 박테리오파지를 분리하고, 그 특성을 구명하고자 하였다. 7개의 닭 도축장 하수 처리장 물로부터 10주의 박테리오파지를 분리하였다. 이중 $SG{\Phi}-YS$ SP로 명명된 파지는 전자현미경 관찰 결과, Myoviridae family로 분류되었다. 분리한 박테리오파지의 숙주 범위를 확인하기 위하여 Salmonella Gallinarum 7주와 Salmonella Enteritidis 5주에 대한 용해 유발능력을 조사한 결과, $SG{\Phi}-YS$ SP는 Salmonella Gallinarum만 용해하는 특징을 보였다. $SG{\Phi}-YS$ SP는 Salmonella Gallinarum에 접종하였을 경우 6시간과 9시간 뒤 각각 2.21 log cfu/mL 및 2.13 log cfu/mL를 감소시키는 것으로 확인되어 닭에서 Salmonella Gallinarum 감염을 예방하거나 치료하는 파지 제제 개발에 이용될 수 있을 것으로 판단되었다.
Salmonella enterica subsp. enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum causes fowl typhoid in poultry. In this study, we isolated Salmonella from a Korean retail chicken shell egg and performed whole-genome sequencing, from which we identified one chromosome (4,659,977-bp) and two plasmids (plasmid_1: 87,506 bp and plasmid_2: 2,331 bp). The isolate serotype was confirmed to be Gallinarum, with a biovar type of Gallinarum, which was finally identified as Salmonella enterica subsp. enterica serovar Gallinarum biovar Gallinarum. Multilocus sequence typing confirmed that the isolate was that of sequence type 78. The antimicrobial resistance gene, aac(6')-laa, was identified on the chromosome, and 166 virulence genes were detected on the chromosome and plasmid_1.
To develop a live vaccine strain against fowl typhoid and paratyphoid caused by Salmonella serovar Gallinarum biovar Gallinarum (Salmonella Gallinarum) and Salmonella serovar Enteritidis (Salmonella Enteritidis), respectively, several nalidixic acid resistant mutants were selected from lipopolysaccharide (LPS) rough strains of Salmonella Gallinarum that escaped from fatal infection of a LPS-binding lytic bacteriophage. A non-virulent and immunogenic vaccine strain of Salmonella Gallinarum, SR2-N6, was established through in vivo pathogenicity and protection efficacy tests. SR2-N6 was highly protective against Salmonella Gallinarum and Salmonella Enteritidis and safer than Salmonella Gallinarum vaccine strain SG 9R in the condition of protein-energy malnutrition. Thus, SR2-N6 may be a safe and efficacious vaccine strain to prevent both fowl typhoid and paratyphoid.
Three commercial strains bred in the US (Hubbard), Holland (Lohman), and Canada (Shaver) and Balady breed of chickens were orally infected with $10^6$ cfu of Salmonella gallinarum per chick. Chicks were compared for weight gain, feed intake, feed conversion ratio, mortality rate and contamination of the liver, spleen and intestine with Salmonella gallinarum on the day of slaughter. The Balady chicks had significantly the lowest mortality rate (p<0.01) and weight gain (p<0.001) and poorest feed conversion ratio (p<0.001). Salmonella gallinarum could be shed from the liver, spleen and intestine with alternative rates in all strains. Lohman was the most resistance over the other two commercial strains, while Hubbard had the highest susceptibility. The Balady chicks were the most resistance. However, they may serve as a possible reservoir of Salmonella gallinarum and it may play a role of spreading the infection to the commercial farms in Jordan.
본 시험은 Salmonella gallinarum에 대한 Lactobacillus, medicinal plants extract, essential oil 급여 시 산란계의 생산성, 맹장 내 미생물 균총, 조직중량 및 혈구 조성에 미치는 영향을 조사하기 위하여 수행하였다. 공시동물로 65주령 산란계(Hy-line brown) 총 100수를 공시하였고, 시험처리는 항생제 무첨가구(NC)와 항생제 첨가구(PC)를 대조구로 하였으며, 유산균 0.1% 첨가구(LB), 약용식물 추출물 100 ppm 첨가구(MPE) 및 식물 추출물 100 ppm 첨가구(EO)를 처리구로 두었다. 배치 후 1주일동안 시험 사료를 급여하고, 이후 Salmonella gallinarum을 경구투여하였다. 조사항목으로는 생산성, 맹장 내 미생물 균총, 조직중량 및 혈구 조성을 조사하였다. Salmonella gallinarum를 경구투여한 처리구와 투여하지 않은 처리구의 경우, Salmonella gallinarum를 경구투여한 처리구가 산란율, 1일 산란량 및 사료섭취량이 다소 감소하는 경향을 보였고, 유산균(LB), 약용식물 추출물(MPE) 및 식물추출물(EO)을 급여하였을 때 약용식물 추출물(MPE)을 급여한 처리구가 대조구에 비해 다소 개선되었지만 처리구간의 통계적인 유의차는 없었다. 맹장 내 미생물의 경우, Salmonella gallinarum을 경구투여하였을 때, Salmonella 수가 유의하게 증가하였으나(P<0.05), coliform bacteria 및 유산균 수에는 영향을 미치지 않았으며, Salmonella gallinarum과 유산균(LB), 약용식물 추출물(MPE), 및 식물추출물(EO) 사이의 상호작용도 나타나지 않았다. 조직중량에서도 Salmonella gallinarum 경구투여와 유산균(LB), 약용식물(MPE) 및 식물추출물(MPE) 첨가에 대한 통계적인 유의차는 없었고, 혈구 조성에서도 Salmonella gallinarum 경구투여와 유산균(LB), 약용식물 추출물(MPE) 및 식물추출물(EO) 첨가에 대한 유의차는 없었지만 각각 총 백혈구 수가 증가하는 경향을 보이기도 하였다.
This study was performed to detect the Salmonella genus-specific DNA marker for comparing of polymophisms between S pullorum and S gallinarum by using PCR amplified techniques. A total of ten primers were used to detect DNA polymorphisms from S pullorum and S gallinarum. The number of DAF bands detected per each primer varied from 26 to 45, with an average of 32.7 using 10 primers. A total of 327 DAF bands were generated and among them 123 bands were polymorphic(37.6%). These DNA amplified fingerprinting(DAF) specific bands for S pullorum and S gallinarum were observed from all primers. For S pullorum, GEN 60-04, GEN 70-04 and GEN 70-03 primers showed a high level of polymorphism with 0.79, 0.70 and 0.57, respectively. But GEN 60-05 primer did not show a level of polymorphism. For S gallinarum, GEN 70-03, 60-04, 60-07, 70-05 and 70-04 primers showed a higher a low level of polymorphism from 0.16 to 0.28. Each five strains of S pullorum and S gallinarum were isolated from chickens showed typical clinical signs related with infection of pullorum disease or fowl typhoid at commercial chicken farms. DNA markers of these strains produced by GEN 70-04, GEN 70-05 and GEN 70-08 showed significant difference of band patterns between S pullorum and S gallinarum. These DNA markers could be used for comparison of DNA marker polymorphism between S pullorum and S gallinarum as well as rapid diagnosis of fowl typhoid and pullorum disease of domestic fowls.
Streptomyces (S.) fradiae is a microbe with broad-spectrum antimicrobial activity, isolated from soil. In the present study, antibacterial effects of S. fradiaea against Salmonella (S.) gallinarum was determined. S. fradiae inhibited growing of S. gallinarum in Luria-Bertani media agar. Moreover, ingestion of S. fradiae markedly inhibited mortality of chickens experimentally infected with S. gallinarum. There is no side effect by S. fradiaeon, in safety of chickens and antibiotic material residues in chicken meat. Taken together, S. fradiae have the antibacterial effects against S. gallinarum. Therefore, we concluded that S. fradiae might be a good microbial candidate for treatment or control of fowl typhoid in chickens.
Salmonella gallinarum로 면역화된 산란계로부터 생산된 계란 난황 중에 들어 있는 anti-S, gallinarum specific IgY를 분리하여 IgY의 효능을 살펴보았다. 또한 면역화 여부, specific IgY 농도별 및 균수별에 따른 항균력을 현미경적 관찰 및 탁도 측정, pH 변화로 검토하였다. 전체 IgY 중 anti-S. gallinarum IgY의 특이항체의 비율은 23%로 나타났다. 또한 anti-S, gallinarum IgY와 Salmonella유사 균주의 항원에 대한 IgY의 선택성을 조사한 결과 생산된 IgY는 S, gallinarum 에만 선택성을 갖는 것으로 나타났다. S, gallinarum 배양액에 anti-S. gallinarum specific IgY 0.3%를 첨가한 처리구는 상등액과 침전물에서 S, gallinarum가 응집되는 현상을 보였다. 그러나 면역을 하지 않은 닭에서 생산된 계란으로부터 추출한 IgY와 대조구에서는 응집 반응이 일어나지 않았다. Anti-S, gallinarum IgY를 첨가한 처리구가 대조구보다 S. gallinarum균들이 응집되는 정도에 있어서 확실한 효과를 나타내었다. 현미경 관찰시 균체들의 응집현상은 IgY 0.2% 이상 첨가시에 나타났으며, pH와 탁도에 있어서는 IgY 0.1% 이상 첨가구에서 S. gallinarum 성장 억제의 탁월한 효과를 볼 수 있었다. $10^5CFU/mL$에 Anti-S, gallinarum IgY 0.3%를 첨가한 처리구는 $10^3CFU/mL$와 거의 동일한 탁도를 나타내어 IgY에 의한 성장 억제를 확인할 수 있었다. 현미경적 관찰에서 IgY 첨가량이 증가할수록 더 큰 균괴를 형성하는 것을 볼 수 있었다. 위의 결과들을 통해 S. gallinarum로 면역화된 닭으로부터 생산된 계란에서 추출된 IgY를 사용하면 가금티푸스를 예방하는데 이용될 수 있을 가능성을 보여주었다.
Antigenic types of 114 Salmonella pullorum and 152 Salmonella gallinarum field isolates were evaluated. All 3 antigenic types were identified among field isolates of S pullorum by factor-serum analysis but the majority of them were standard type(90.4%). Of the 114 S pullorum isolates, only eight(7.0%) were intermediate type and 3(2.6%) were variant type. Using the ammonium sulfate precipitation(ASP) test, one-hundred and three(90.4%) S pullorum isolates were standard type, while intermediate and variant types were 8.4% and 1.4%, respectively. One-hundred and fifty-two S gallinarum isolates were identified as standard type by ASP test and serological analysis. According to the random amplified polymorphisms of DNA(RAPD) patterns, most of S pullorum isolates were differentiated with 3 types in their fragment-patterns. No correlations were found between SDS-PAGE profiles and antigenic types of S pullorum isolates.
Salmonella enterica subsp. enterica serovar gallinarum (S. gallinarum) is the agent of fowl typhoid, and the 9R vaccine is a commercial live vaccine for the prevention of fowl typhoid. The aim of this study was to assess the safety and immunogenicity of different brands of S. gallinarum 9R vaccine used in commercial laying chickens in Korea. All 9R strains originated from three different brands showed the same pattern in the biochemical and serological properties, and pulsed field gel electrophoresis (PFGE) profile. But, there was a difference in rhamnose fermentaion, agglutination with Salmonella group $D_1$ antiserum and PFGE pattern between 9R vaccine strain and field S. gallinarum isolates. In laboratory and field trials for assesment of safety and immunogenicity of 9R vaccine, all of the three 9R vaccines showed the same safety in commercial laying chickens. In addition, there was a significant difference between the vaccinated and unvaccinated control groups in mortality and the re-isolation rate of the challenge strain from the tissues (p < 0.05), and no difference by the brands of 9R vaccine. The results from this study indicated that all three different brands of S. gallinarum 9R vaccine showed highly protection against mortality and organ invasion in commercial laying chickens exposed to virulent strains of S. gallinarum.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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