This study was performed to demonstrate the presence of large granular lymphocyte(LGL) in Sprague-Dawley(SD) rats and morphologically observe NK cell and also establish the method of isolation of natural killer cell in SD rats. By percoll discontinuous density gradients centrifugation, highly enriched LGL population were shown to fraction 2(border line between 44.2% and 50.8%). LGL were shown to bind selectively to YAC1 mouse lymphoma cell. This fraction expressed very high NK cell cytolysis. Therefore, we thought that LGL have NK activity in SD rats. The Morphology of rat LGL is very similar to that of human LGL. These cells have an eccentric kidney-shaped nucleus. Their most distinctive feature was their cytoplasmic azurophilic granules. Another distinguishing feature of rat LGL was their high cytoplasmic : nuclear ratio. It was concluded that LGL played a role part in mediating natural killer activity in this species.
SD-994 was prepared from methanol extract of Artemisia argyi by stepwise purification of solvent partioning and silica gel chromatography. In the course of this purification, fractions obtained at each step were investigated for their cytotoxicities against L1210 cells. Fractions A~G prepared from chloroform fraction showed considerable cytotoxicities raging 40~90% against L1210 cells. Subfractions I~IX obtained from fraction A exhibited various cytotoxicities and subfraction I (SD-994) was found to be the most effective compound. $IC_{50}$ values of SD-994 were measured to be $0.5{\;}{\mu\textrm{g}}/ml and less than $0.05{\;}{\mu\textrm{g}}/ml against L1210 cells and normal lymphocytes, respectively: When SD-994 was added to L1210 cell as cytotoxic agent, significantly increased amount of superoxide ($O_2^-$) and dramatically augmented activities of superoxide dismutase (SOD), specially MnSOD and glutathione peroxidase (GPx) were observed according to the concentration and incubation time. Whereas, in case of normal lymphocytes under the same condition, cytotoxicities were not apparent and the generation of superoxide ($O_2^-$) or the activity changes of SOD and GPx were insignificant. These results together indicate that the cytotoxic action of SD-994 against L1210 cell may be achieved via necrosis and/or apoptosis induced by reaction oxygen species which could not probably be completely abolished even by drastically increased antioxidant enzymes, SOD and GPx activities.
1) 건강한 성인 2823명을 대상으로 자동혈구 계산기인 Coulter Counter Model S plus II를 이용하여 본원의 참고치를 설정하였다. 산출된 참고치는 기기의 설명서에 제시되어 임상 의사들이 사용하고 있는 참고치와 차이가 있었다. 2) 국내의 보고들과 비교해 볼 때 본원의 참고치와 대체로 비등하였고 기기의 설명서에 제시된 참고치와는 차이가 있으므로 본원의 참고치률 설정하여 사용하여야 하겠다. 3) 결과는 다음과 같다. (1) 백혈구 수는 남자 $6.800{\pm}2.680(2SD)/{\mu}l$, 여자 $5.950{\pm}2.380(2SD)/{\mu}l$ 이었다. (2) 적혈구 수는 남자 $428{\pm}60(2SD){\times}10^4/{\mu}l$, 여자 $415{\pm}56(2SD){\times}10^4/{\mu}l$ 이었다. (3) 혈색소량은 남자 $15.4{\pm}1.8(2SD)g/dL$, 여자 $13.0{\pm}1.6(2SD)g/dL$ 이었다. (4) 적혈구 용적은 남자 $45.3{\pm}5.0(2SD)%$, 여자 $38.2{\pm}4.6(2SD)%$ 이었다. (5) 평균 적혈구 용적은 남자 $93.8{\pm}5.8(2SD)fL$, 여자 $92.2{\pm}7.4(2SD)fL$ 이었다. (6) 평균 적혈구 혈색소량은 남자 $31.8{\pm}2.2(2SD)pg$, 여자 $31.4;{\pm}2.8(2SD)pg$ 이었다. (7) 평균 적혈구 혈색소농도는 남자 $34.0{\pm}1.2(2SD)%$, 여자 $33.9{\pm}1.2(2SD)%$ 이었다. (8) 적혈구 분포 폭은 남자 $12.7{\pm}1.0(2SD)%$, 여자 $12.6{\pm}1.4(2SD)%$ 이었다. (9) 혈소판 수는 남자 $242.9{\pm}87.8(2SD){\times}10^4/{\mu}l$, 여자 $242.2{\pm}89.0(2SD){\times}10^4/{\mu}l$ 이었다. (10) 혈소판 용적은 남자 $0.201{\pm}0.076(2SD)%$, 여자 $0.204{\pm}0.076(2SD)%$ 이었다. (11) 평균 혈소판 용적은 남자 $8.20{\pm}1.70(2SD)fL$, 여자 $8.36{\pm}1.82(2SD)fL$ 이었다. (12) 혈소판 분포 폭은 남자 $16.1{\pm}0.8(2SD)%$, 여자 $16.0{\pm}0.8(2SD)%$ 이었다.
Objective: To construct short hairpin RNA (shRNA) eukaryotic expression vectors targeting Livin and Survivin genes, and to explore the impact of co-transfection of Livin and Survivin shRNA expression vectors on the biological behavior of HepG2 cells. Methods: shRNA eukaryotic expression vectors pSD11-Livin and pSD11-Survivin were designed and constructed then transfected into HepG2 cells separately or in combination. mRNA and protein expression in transfected cells was assessed by quantitative fluorescence PCR and Western blotting, respectively. Cell proliferation was measured by MTT assay and cell apoptosis by TUNEL assay. Results: The Livin and Survivin shRNA eukaryotic expression vectors were successfully constructed and transfected into HepG2 cells. The relative mRNA expression levels of Livin and Survivin in HepG2 cells co-transfected with pSD11-Livin and pSD11-Survivin were $0.12{\pm}0.02$ and $0.33{\pm}0.13$, respectively, which was significantly lower than levels in cells transfected with either pSD11-Livin or pSD11-Survivin (P<0.05). The relative protein expression levels of Livin and Survivin in the co-transfected cells were also significantly decreased compared to single-transfection (P<0.05). The inhibition rate of cell growth in the co-transfection group was higher than that in the single-transfection groups at 48 h, 60 h, or 72 h after transfection (P<0.01). The apoptotic rate increased to the greatest extent in the co-transfection group relative to any other group (P<0.05). Conclusions: Co-transfection with pSD11-Livin and pSD11-Survivin was more efficient than transfection with either vector alone in reducing the mRNA and protein expression of Livin and Survivin genes in HepG2 cells. Co-transfection also inhibited the proliferation of transfected cells more than the other groups, and induced cellular apoptosis more effectively.
In order to reproduce chronic cerebral hypoperfusion as it occurs in human aging and Alzheimer's disease, we introduced permanent, bilateral occlusion of the common carotid arteries (BCCAO) in rats (Farkas et al, 2007). Here, we induced BCCAO in two different rat strains in order to determine whether there was a strain difference in the pathogenic response to BCCAO. Male Wistar and Sprague-Dawley (SD) rats (250-270 g) were subjected to BCCAO for three weeks. Kluver-Barrera and cresyl violet staining were used to evaluate white matter and gray matter damage, respectively. Wistar rats had a considerably higher mortality rate (four of 14 rats) as compared to SD rats (one of 15 rats) following BCCAO. Complete loss of pupillary light reflex occurred in all Wistar rats that survived, but loss of pupillary light reflex did not occur at all in SD rats. Moreover, BCCAO induced marked vacuolation in the optic tract of Wistar rats as compared to SD rats. In contrast, SD rats showed fewer CA1 hippocampal neurons than Wistar rats following BCCAO. These results suggest that the neuropathological process induced by BCCAO takes place in a region-specific pattern that varies according to the strain of rat involved.
Objective: The objective of our present study was to assess the role of serum amyloid A (SAA) in stages and prognosis of renal cell carcinoma. Material and Methods: It was a hospital based retrospective study carried out in the Department of Medicine and Biochemistry of Manipal Teaching Hospital, Pokhara, Nepal between $1^{st}$ January 2008 and $31^{st}$ December 2011. The variables collected were SAA, CRP. Approval for the study was obtained from the institutional research ethical committee. Quantitative analysis of human SAA and C-reactive protein (CRP) was performed by radial immune diffusion (RID) assay for all cases. Results: Of the 422 total cases of renal cell carcinoma, 218 patients had normal and 204 abnormal SAA. SAA levels were grossly elevated in T3 stage ($122.3{\pm}SD35.7$) when compared to the mean for the T2 stage ($84.2{\pm}SD24.4$) (p value: 0.0001). Similarly, SAA levels were grossly elevated in M1 stage ($190.0{\pm}SD12.7$) when compared to the M0 stage ($160.9{\pm}SD24.8$) (p: 0.0001). There was no significant association with elevated CRP levels ($209.1{\pm}SD22.7$, normal $199.0{\pm}SD19.5$). Conclusion: The validity of SAA in serum as being of independent prognostic significance in RCC was demonstrated with higher levels in advanced stage disease.
1. Objectives: The purpose of this study is to investigate the effect of Suhwagije-tang(SGT) distillate on the immune activity of spleen cells of aged SD rats. 2. Methods: We used 10, 50, 72 weeks old SD rats in this study. Spleen cells from SD rats were stimulated with ConA and treated with 1% Vitamin C(Vit.C) or Suhwagijetang distillate(SGT). After 24 hours, the concentrations of IL-2, IL-4, IL-10, IFN-${\gamma}$ in the cell culture supernatant were measured by ELISA. 3. Results and Conclusions 1) At all concentration of SGT distillate, survival rates of liver cells were higher than the control group. In addition, 50% SGT distillate group's cell survival rates were significantly higher than other groups. 2) In 10 weeks SD rats(SGT group), the concentration of IL-2 significantly decreased in comparison with ConA group, Vit.C group. In 52 weeks SD rats(SGT group), the concentration of IL-2 significantly decreased in comparison with ConA group. 3) In 10, 52 weeks SD rats(SGT group), the concentration of IL-4 significantly decreased in comparison with ConA group. 4) In 10 weeks SD rats(SGT group), the concentration of IL-10 significantly decreased in comparison with ConA group. And in 72 weeks SD rats(SGT group), the concentration of IL-10 significantly increased in comparison with Vit.C group. 5) In 52, 72 weeks SD rats(SGT group), the concentration of IFN-${\gamma}$ significantly decreased in comparison with 10 weeks SD rats(SGT group). These results suggest that Suhwagije-tang(SGT) distillate has the effect of increasing the immune activity of spleen cells of aged SD rats.
Currently, lasers are one of the most popular light sources in use for medical treatment. Many studies on low power lasers are being done in cell culture or through animal tests and most report different findings, making it difficult to verify their true effects. There are shifts in trends of studies from laser and LED that are expensive and generate heat problem to LED that are economically effective and safe. Its near infrared rays can penetrate deep into skin or muscle, up to 23 cm, without causing thermal damage or impairing neighboring tissues. This study verified the performance and effectiveness of an LED irradiator that was designed to emit similar wavelengths to that of a laser and thus could be used instead of a low level laser therapy in experiments on animals. And then, each experiment was performed to irradiation group and non-irradiation group for NTacSam:SD tissue cells. MIT assay method was chosen to verify the cell increase of two groups and the effect of irradiation on cell proliferation was examined by measuring 590nm transmittance of ELISA reader. As a result, the cell increase of NTacSam:SD tissue cells was verified in irradiation group as compared to non-irradiation group. The fact that specific wavelength irradiation has an effect on cell vitality and proliferation is known through this study.
Cyto-toxic effect of silver sulfadiazine (Ag-SD) on keratinocytes and its implication on wound healing process were investigated in $2^{nd}$ degree bum hairless mouse model. As a dermal model, HaCat (immortalized keratinocytes) monolayer culture in DMEM with 10% FBS was used. Cyto-toxicity of Ag-SD was estimated by measuring the cell viability using neutral red assay after adding the drug. The $2^{nd}$ degree bum was prepared on hairless mouse back skin (1 cm diameter) and dressings with Ag-SD were applied for 96 hr. The process of re-epithelialization and the presence of inflammatory cells were investigated and histology with Hematoxylin-Eosin staining was performed. Ag-SD displayed highly cyto-toxic effect on cultured HaCat cells in a concentration dependent manner $(1-100\;{\mu}g/mL)$. Topical application of Ag-SD (2%) could control the infection: no inflammatory cells were observed in histology. However the cyto-toxic effect of Ag-SD on skin cells induced the impairment in epidermal regeneration.
The purpose of present study was to investigate the effects of physiologically active compound (SD62-122) from Phlomidis Radix on the cell cycle progression and its molecular mechanism in human gingival fibroblasts(HGFs). For this purpose, fibroblasts were isolated and cultured from excisioned gingiva during crown lengthening procedure in healthy adult. The following parameter were evaluated that there are cell number counting, MIT assay, cell cycle progression, western blot analysis. The cell number and MIT assay of primary cultured fibroblast was not increased at 2 days but significant increased compare to negative control at 3days(p<0.05). S phase was increased and G1 phase decreased in both $10^{-8}M$ and $10^{-9}M$ of SD62-122 in cell cycle analysis. The cell cycle regulation protein levels of Cyclin $D_1$, Cyclin E, cdk 2, cdk 4 and cdk 6 were increased compare to control in both $10^{-8}M$ and $10^{-9}M$ of SD62-122. The protein levels of p21 and p53 were decreased compare to control, but the level of pRb was not changed compare to control in $10^{-9}M$ of SD2-122. These results suggested that physiologically active compound (SD62-122) isolated from Phlomidis Radix increases the cell proliferation and cell cycle progression in HGFs, which is linked to increased cell cycle regulation protein levels of Cyclin $D_1$, Cyclin E, cdk 2, cdk 4 and cdk 6, and decreased the levels of p21, p53.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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