Lee, Hyun Jae;Lee, Kang Ro;Hong, Jang-Hee;Lee, Choong Jae
Natural Product Sciences
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제22권4호
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pp.275-281
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2016
Perilla frutescens was empirically used for controlling airway inflammatory diseases in folk medicine. We investigated whether caffeic acid, myristicin and rosemarinic acid derived from Perilla frutescens significantly affect the gene expression and production of mucin from airway epithelial cells. Confluent NCI-H292 cells were pretreated with caffeic acid, myristicin or rosemarinic acid for 30 min and then stimulated with phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) for 24 h. The MUC5AC mucin gene expression and production were measured by reverse transcription - polymerase chain reaction (RT-PCR) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), respectively. Additionally, we examined whether caffeic acid, myristicin or rosemarinic acid affects MUC5AC mucin production indued by epidermal growth factor (EGF) and tumor necrosis $factor-{\alpha}$ ($TNF-{\alpha}$), the other two stimulators of production of airway mucin. The results were as follows: (1) Caffeic acid, myristicin and rosemarinic acid inhibited the gene expression and production of MUC5AC mucin induced by PMA from NCI-H292 cells, respectively; (2) Among the three compounds derived from Perilla frutescens, only rosemarinic acid inhibited the production of MUC5AC mucin induced by EGF or $TNF-{\alpha}$, the other two stimulators of production of airway mucin. These results suggest that rosemarinic acid derived from Perilla frutescens can regulate the production and gene expression of mucin, by directly acting on airway epithelial cells and, at least in part, explains the traditional use of Perilla frutescens as remedies for diverse inflammatory pulmonary diseases.
뽕잎에서 분리한 유효성분의 혼합물에 대한 안전성을 확인하기 위하여 경구 투여하여 시험한 결과, 투여량 4000 mg/kg에서 암수 mouse 모두가 생존하여 급성독성은 없을 것으로 판단하였으며, 13주 반복 독성 시험에서도 투여량 2000 mg/kg에서 암수 mouse 모두가 생존하여 약물의 독성에 의한 문제는 없을 것으로 판단되었다. 육안으로는 대조군과 비교 시 이상이 확인되지 않았으며 부검 후 H. pylori 의 감염에 영향을 받을 수 있는 위의 무게 역시 대조군과의 차이를 확인할 수 없었다. 면역세포에 대한 영향은 약물 투여 시 매체대조군에 비해 대식세포의 독성 물질인 NO의 생성이 감소하는 것을 확인하였다. 또한 암컷군에서 48시간에서만이 LPS와 Con A에 의해 비장세포가 약간 증식되었을 뿐 다른 실험군에서는 대조구와 비슷한 수치를 나타내었으며, 자연살해세포의 세포독성은 감소되었다. 뽕잎에서 분리한 유용 성분인 caffeic acid, rosemarinic acid와 chlorogenic acid가 H. pylori의 감염환자의 치료용 또는 예방의 목적으로 임상적으로 사용할 경우 아무런 독성이 없을 것으로 판단되어 뽕잎을 건강기능성 식품으로 개발하는데 있어서 안전성 문제는 없는 것으로 판단되었다.
청목노상 잎 시료로부터 spot 배양 후 bioreactor에서 배양된 청목노상 뽕잎callus 추출물을 이용하여 H. pylori 균에 대한 항균활성을 측정한 결과, 높은 항균활성을 나타내는 것을 알 수 있었다. 배양된 청목노상 뽕잎 callus 추출물의 H. pylori 균에 대한 항균활성 물질을 정제하여 $^1H$-NMR, $^{13}C$-NMR, IR 및 FAB-MS spectrum 등을 활용하여 구조분석 한 결과 protocatechuic acid, chlorogenic acid, caffeic acid 및 rosemarinic acid로 동정하였으며, 단일물질 보다 혼합물질에 의한 synergy 효과에 의해 H. pylori 균에 대한 항균활성이 나타나는 것으로 판단되었다.
뽕잎으로부터 분리한 H. pylori 억제물질이 건강기능식품으로 산업화되기 위하여 이들 유용성분이 생체 내에서 약리성을 가지는지 여부를 검토하였다. 청목노상으로부터 분리한 혼합물은 $200{\mu}g/100{\mu}L$의 농도에서 H. pylori에 대한 저해 clear zone을 형성하여 항균활성을 나타내었고, C57BL/6종 mouse에 H. pylori의 감염을 유도 한 결과 6주 이상이 되어야 H. pylori의 감염이 되는 것을 확인하였으며, 이 때 감염균수는 평균 $8{\times}10^5$ CFU/mL이었다. 경구투여를 통해 청목노상뽕잎에서 추출한 유효성분의 혼합물이 H. pylori 감염에 있어 예방 및 치료 효과를 갖는지 시험한 결과, 절개된 위속의 H. pylori colony 수가 약물투여 군에서 대조군에 비해 감소한 것을 확인하였다. 마우스의 혈청을 분리하여 immunoglobulin isotype을 측정한 결과, 대조군 보다 IgG1, IgA 등이 높게 생성되는 것이 확인되었고, 시료 혼합물에 의해 항체생성이 증가되어 H. pylori 감염을 억제하는 것으로 판단되었다. 이러한 결과로 뽕잎에서 추출한 유용성분인 caffeic acid, rosemarinic acid와 chlorogenic acid가 H. pylori의 감염에 있어서 예방 또는 치료효과가 있는 것으로 확인되었다. 따라서 H. pylori에 의해 유발되고 감염률이 증가되고 있는 위염, 위궤양, 위암의 예방과 치료가 가능할 것으로 판단되었다.
Basil을 물과 에탄올로 추출하여 생리 기능성을 알아 보았다. 추출물의 총 페놀 함량은 열수 추출물이 $286.0\;{\mu}g/ml$, 알코올 추출물이 $250.0\;{\mu}g/ml$로 나타났다. 추출물의 항산화 효과는 DPPH가 열수 추출물과 알코올 추출물이 각각 87.0%, 93.9%로 나타났고, antioxidant protection factor는 각각 0.7, 1.2으로 낮게 나타났다. ABTS는 열수 추출물이 96.8%, 알코올 추출물이 94.7%로 높게 나타났으며 TBARS는 $0.2{\times}10^{-3}\;{\mu}M,\;0.6{\times}10^{-3}\;{\mu}M$로 대조구 $2.9{\times}10^{-3}\;{\mu}M$에 비해 malonaldehyde와 thiobarbituric acid가 반응하여 생성되는 복합체 TBARS값이 낮아 추출물이 지방 산화에 영향을 주는 것을 알 수 있었다. ACE 저해 효과와 XOase 저해 효과는 알코올 추출물에서 각각 96.6%, 100.0%로 열수 추출물 각각 39.9%, 54.7%보다 높게 나타났다. HPLC로 분석한 결과 알콜 추출물에서 rosemarinic acid가 가장 많은 것으로 나타 났다. 이 결과로 Basil은 인공 합성 항산화제가 가지는 단점을 보완할 수 있는 천연 항산화제 및 통풍 저해와 항 고혈압 기능을 겸비한 기능성 소재로의 개발이 가능할 것으로 생각된다.
백부자(Aconiti koreani Rhizoma)를 이용한 항암효과와 노화억제를 위한 기능성 식품 소재로 개발하기 위하여 항균 및 항산화효과를 조사하였다. 백부자 추출물의 phenol성 물질의 추출수율은 열수추출물이 $8.45{\pm}0.27\;mg/g$이었으며, 에탄올추출물은 20, 40, 60, 80, 100% 농도별로 각각 $6.40{\pm}0.10\;mg/g$, $6.53{\pm}0.26\;mg/g$, $6.96{\pm}0.25\;mg/g$, $2.44{\pm}0.04\;mg/g$, 0.31{\pm}0.17\;mg/g$으로 열수추출물의 phenol 함량이 다소 높게 나타났다. 항산화 효과가 높다고 알려진 phenol 성분의 함량을 HPLC 분석결과 항산화 효과가 높은 protocatecuic acid, chlorogenic acid, rosemarinic acid의 함량이 높게 나타났다. H. pylori에 대한 항균효과는 에탄올추출물에서만 관찰되었다. ABTS radical decolorization과 antioxidant protection factor(PF)를 살펴 본 결과 ABTS는 60% 에탄올추출물에서 $94.25{\pm}0.68%$로 가장 높은 저해율을 나타내었고, PF 역시 60% 에탄올추출물에서 $1.14{\pm}0.05$로 비교적 높은 protection factor을 나타내었다. DPPH에 대한 전자공여능은 20% 에탄올추출물에서 $93.69{\pm}0.19%$의 가장 높은 활성을 나타내었으나, 40%, 60%, 80%간의 유의적인 차이는 없었고, 열수추출물에서는 $60.10{\pm}1.63%$의 낮은 활성을 나타내었다. 활성산소 중 지방산화를 일으키는데 중요한 역할을 하는 hydroxyl radical에 대한 각 추출물들의 영향은 80% 에탄올추출물이 다른 농도의 추출물들에 비하여 낮은 TBARS 값을 나타내었다. 이상의 결과로 볼 때 백부자로부터 추출한 페놀성 물질은 60%의 ethanol로 추출한 추출물이 천연항산화 물질로 활용이 가능한 기능성 식품의 소재로의 개발이 가능할 것으로 사료된다.
Rue잎을 물과 에탄올로 추출하여 항균활성과 생리활성 효과를 탐색하였다. 그 결과 각 추출물의 총페놀 함량은 물 추출물에서 16.39 mg/g 알콜 추출물에서 17.07 mg/g로 나타났다. Helicobacter pylori에 대한 disc 방법에서 $200\;{\mu}g/mL$의 폴리페놀 첨가 시 물과 알콜 추출물은 각각 12 mm, 13 mm의 직경을 나타내어 항균활성이 있음을 알 수 있었으며, 2-fold dilution 방법으로 항균활성 검증 결과 물 추출물보다 알콜 추출물에서 더 높은 항균활성을 나타내었다. 물과 알콜 각 추출물의 ABTS radical decolorlization과 antioxidant protection factor(PF)를 살펴 본 결과 ABTS는 물 추출물이 약 $96\%$로 높은 저해율을 나타내었으며 PF는 알콜 추출물에서 1.2로 물 추출물 0.8보다 높게 나타났다. DPPH에 대한 전자공여능은 물 추출물이 89.38로 알콜 추출물 $86.90\%$보다 높게 나타났으며 활성 산소중 지방산화를 일으키는데 주요한 역할을 하는 hydroxyl radical에 대한 각 추출물의 영향은 알콜 추출물이 binding능력이 탁월하여 물 추출물에 비해 낮은 TBARS 값을 나타내었다. Angiotensin converting enzyme과 xanthine oxidase 저 해 활성은 알콜 추출물이 물 추출물보다 더 높게 나타났고, HPLC에 의한 페놀 분석 결과 rosemarinic acid의 함량이 알콜 추출물에서 가장 많았으며 다음으로 qurcetin 함량이 높게 나타났다.
Background: The leaves of Perilla frutescens, commonly called perilla and used for food in Korea, contain components with a variety of biological effects and potential therapeutic applications. The purpose of this study was to identify the components of 70% ethanol extracted Perilla frutescens (EEPF) and determine its inhibitory effects on oral microbial activity and production of nitric oxide (NO) and prostaglandin E2 (PGE2) in lipopolysaccharides (LPS)-stimulated Raw264.7 macrophages, consequently, to confirm the possibility of using EEPF as a functional component for improving the oral environment and preventing inflammation. Methods: One kg of P. frutescens leaves was extracted with 70% ethanol and dried at -70℃. EEPF was analyzed using high-performance liquid chromatography analysis, and antimicrobial activity against oral microorganisms was revealed using the disk diffusion test. Cell viability was elucidated using a methylthiazolydiphenyl-tetrazolium bromide assay, and the effect of EEPF on LPS-induced morphological variation was confirmed through microscopic observation. The effect of EEPF on LPS-induced production of pro-inflammatory mediators, NO and PGE2 was confirmed by the NO assay and PGE2 enzyme-linked immunosorbent assay. Results: The main component of EEPF was rosemarinic acid, and EEPF showed weak anti-bacterial and anti-fungal effects against microorganisms living in the oral cavity. EEPF did not show toxicity to Raw264.7 macrophages and had inhibitory effects on the morphological variations and production of pro-inflammatory mediators, NO and PGE2 in LPS-stimulated Raw264.7 macrophages. Conclusion: EEPF can be used as a functional material for improving the oral environment through the control of oral microorganisms and for modulating inflammation by inhibiting the production of inflammatory mediators.
Thyme(Thymus vulgaris L.)을 성인병 예방을 위한 기능성 식품 소재로 이용하기 위하여 각 추출물의 생리활성효과를 조사하였다. 추출물의 phenol 함량은 열수추출물이 $26.8{\pm}0.35\;mg/g$였으며, 60% 알코올추출물은 $25.6{\pm}0.20\;mg/g$으로 열수 추출물의 phenol 함량이 다소 높게 나타났다. Thyme의 HPLC 분석결과 생리활성 효과가 높은 rosemarinic acid, quercetin, chlorogenic acid의 함량이 많은 것으로 보아 생리활성 효과가 있을 것으로 사료된다. 각 추출물의 항산화 효과는 DPPH와 ABTS가 열수 추출물과 60% 알코올 추출물이 각각 90.1%, 77.7%와 94.1%, 88.7%로 열수 추출물이 높게 나타났다. Antioxidant protection factor는 알코올 추출물이 PF 1.19로 지용성 물질에 대한 항산화력이 높은 것으로 확인되었고 TBARS값은 대조구에 비해 낮은 값을 나타내어 hydroxyl radical을 binding하는 능력이 뛰어난 것으로 나타났다. H. pylori에 대한 추출물의 항균활성은 열수 추출물의 경우 저해활성이 나타나지 않았으며, 알코올 추출물의 경우 50, 100, 150, $200\;{\mu}g/ml$의 농도로 첨가 했을 때 각각 9, 10, 13, 16 mm의 저해환이 관찰되었다. ACE 저해효과는 열수 추출물에서 39.9%의 저해율을 나타내었으나 알코올 추출물에서는 저해활성을 나타내지 않았다. XOase에 대한 억제효과는 열수 추출물이 73.5%, 알코올 추출물이 100%로 저해를 나타내어 XOase에 대한 높은 저해를 관찰할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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