• 식물조직배양학회지
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• 제22권6호
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• pp.329-334
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• 1995

효과적인 형질전환 시스템을 이용하여 왜화유전자인 rolC 유전자를 구기자나무로의 형질전환 시스템을 확립하였다. 침으로 자극된 엽절편을 2.0 mg/L zeatin이 함유된 3/2 MS배지에 배양하였을 때 엽표면으로부터 줄기재분화가 되었다. 그러나 여러 농도의 kanamycin sulfate와 2.0 mg/L Aeatin이 함유된 배지에 엽절편을 배양하였을 때는 kanamycin sulfate의 농도가 증가할수록 줄기 유발수가 감소하는 것을 볼 수 있었으며, 적정선발농도는 10 mg/L이었다. 엽절편은 공동배양 시간에 따라서 생존율과 줄기재분화에 매우 큰 영향을 미쳤다. 엽절편의 생존율은 dipping할 경우가 가장 좋았으며, 배양시간이 길수록 엽절편의 백색화가 관찰되었고, 생존율이 급격히 감소하는 것을 볼 수 있었다. 줄기재분확에 가장 적합한 공동배양 시간은 24시간으로 나타났다. 공시균주와 24시간 동안 공동배양한 엽절편을 10mg/L의 kanamycin sulfate와 2.0 mg/L zeatin이 함유된 줄기 유도배지에 배양한 결과, 105개의 엽절편 중 80개의 엽절편이 생존하였으며, 그 중에서 15개의 재분화된 줄기를 얻었다. 재분화된 줄기들은 형질전환여부를 판명하기 위해 1차적으로 10 mg/L kanamycin sulfate가 함유된 배지에 옮겨 4 주간 배양한 결과, 항생제에 대해서 저항성을 가진 5개의 식물체를 선발할 수 있었다. 2차적으로 rolC유전자와 NPTII 유전자 도입의 유무를 검증하기 위하여 Southern 분석을 행한 결과, 구기자의 형질전환 식물체에서 rolC 유전자 probe의 coding sequence와 동일한 것으로 생각되는 1kb위치와 NPTII probe의 coding sequence와 동일한 것으로 생각되는 2.6kb 위치에서 각각의 밴드를 확인할 수 있었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제26권1호
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• pp.21-26
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• 1999

쌍떡잎식물체 형질전환에 널리 쓰이는 Agrobacterium의 binary vector를 이용하여 왜화성을 나타내는 pGA643-rolC gene을 엽절편 transformation방법으로 petunia에 도입하였다. Petunia hybrida의 재분화에 있어 엽조직으로부터 식물체 재분화에 미치는 생장조절물질의 효과는 0.1mg/L NAA와 1.0mg/L BA의 조합에서 높았고 재분화된 식물체도 양호하였다. 식물체 형질전환 선발배지에 에틸렌 억제제인 AgNO$_3$와 KMnO$_4$의 첨가시 형질전환체 재분화율이 높게 나타났으며, AgNO$_3$에 비해 KMnO$_4$처리구에서 보다 많은 식물체 재분화율을 나타내었으나 AgNO$_3$와 KMnO$_4$의 고농도 첨가시 다소의 유리화 현상이 발생하였으므로 3mg/L KMnO$_4$ 첨가가 식물체 재분화에 적합한 것으로 생각된다. 항생제 200mg/L kanamycin, 500mg/L carbenicylin 과 1.0 mg/L BA, 0.1mg/L NAA가 첨가된 형질전환 선발배지에서 엽절편으로 부터 형질전환 된 것으로 추정되는 식물체들을 일차 선발하였고 기외로 이식한 후 genomic DNA를 분리하여 Southern blot analysis법으로 분석한 결과 외래 유전자가 식물체의 genomic DNA내로 삽입된 것을 확인할 수 있었다.

• 한국육종학회지
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• 제41권4호
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• pp.482-487
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• 2009

사과 대목 M.26은 준왜성대목으로 뿌리의 토양 지지력이 약해 지주 재배를 해야 하는 단점이 있다. 발근력이 향상된 M.26 왜성 대목 형질전환체를 육성하기 위하여 rolC 유전자 전환을 실시하였다. 항생제가 첨가된 재분화 선발 배지에서 재분화된 M.26 신초 1개체의 genomic DNA를 추출하여 PCR과 Southern 분석을 실시한 결과 유전자의 도입을 확인할 수 있었다. 유전자 도입이 확인된 형질전환체의 기내 발근 상태에서의 식물체 특성을 조사한 결과 대조구에 비해 신초 길이가 감소되었고 발근력이 증가된 것을 확인할 수 있었다. 격리 온실에서 생육시켰을 때 rolC 유전자 고유 특성 중 하나인 분지가 발생되었고, 실생 대목에 접목한 후 묻어떼기를 통한 발근력을 조사한 결과 발근이 현저히 향상되었음을 확인할 수 있었다. 이상에서 확인된 rolC 유전자의 도입에 의한 M.26 사과 대목의 발근력 향상과 동시에 왜화 효과를 검정하기 위해서는 실제 품종과의 접목을 통해서 기존 대목과의 왜화도 차이를 비교할 필요가 있다고 판단되었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제24권5호
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• pp.269-272
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• 1997

유채의 자엽조직을 rolC 유전자를 가진 Agrobacterium 운반체와 공동배양하여 형질전환체를 얻고, 후대에 대한 유전분석을 실시하였다. Arobacterium 운반체와 공동배양된 유채의 자엽조직을 0.5mg/L NAA, 2.0mg/L BA, 30mg/L kanamycin, 100mg/L cefotaxime, 30mg/L sucrose, 3mg/L $\textrm{AgNO}_{3}$ 및 2 g/L Gelrite가 첨가된 MS 배지에 배양하였을 때 형질전환된 식물체의 분화율이 17.5%로 나타났다. 형질전환체로 확인된 식물체를 자가수정시켜 얻어진 후대에 대한 유전분석을 실시한 바 rolC 유전자가 후대로 유전됨을 확인 할 수 있었다.

• 한국자원식물학회지
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• 제11권2호
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• pp.176-176
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• 1998

This study was carried out to obtain the information for growth characteristics of crown gall tumor and hairy root transformed by Agrobacterium spp,. on the media with phytohormones, casein hydrolysate and activated charoal. Crown gall tumors and hairly roots were formed respectively on potato tuber discs infected by tumerfaciens A ch 5 and A.rhizogenes ATCC15834. These tumors and roots could be grown on the phytohormone free media. PCR analysis of Rol C and Vir C gene fragments confirmed that crown gall root was prompted on the medium containing 2,4-D 2mg/l with casein hydrolysate lg/l. The survival ration of crown gall tumor callus derived from potato increased on medium containing the activated charcoal 0.5∼0.2mg/l because of the prevention, on the other hand, hairly roots were necrosis on the same medium. Callus derived from hairly root were excellently grown for a short time by suspension culture on liquid medium containing 2.4-d 2mg/L and casein hydrolysate lg/l.

• 한국자원식물학회지
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• 제11권2호
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• pp.179-187
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• 1998

This study was carried out to obtain the information for growth characteristics of crown gall tumor and hairy root transformed by Agrobacterium spp,. on the media with phytohormones, casein hydrolysate and activated charoal. Crown gall tumors and hairly roots were formed respectively on potato tuber discs infected by tumerfaciens A ch 5 and A.rhizogenes ATCC15834. These tumors and roots could be grown on the phytohormone free media. PCR analysis of Rol C and Vir C gene fragments confirmed that crown gall root was prompted on the medium containing 2,4-D 2mg/l with casein hydrolysate lg/l. The survival ration of crown gall tumor callus derived from potato increased on medium containing the activated charcoal 0.5∼0.2mg/l because of the prevention, on the other hand, hairly roots were necrosis on the same medium. Callus derived from hairly root were excellently grown for a short time by suspension culture on liquid medium containing 2.4-d 2mg/L and casein hydrolysate lg/l.

• Journal of Microbiology
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• 제33권3호
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• pp.201-207
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• 1995

We have previously reported that SPP2 gene product of yeast Saccharomyces cerevisiae is involved in the pre-mRNA splicing. To investigate the rol ein the splicing pathway of the Spp2p protein, the SPP2 gene was overexpressed in Escherichia coli and polyclonal antibodies to Spp2p were generated from rabbits. First, a DNA fragment containing the SPP2 GENE without its promoter was subcloned into an E. coli expression vector, pKK233-3. The resulting recombinant plasmid pBQ14 contained an IPTG inducible tac promoter and the SPP2 structural gene. Overexpression of the SPP2 gene was achieved by additionof 0.1 to 1.0 mM IPTG to a logarithmic culture of E. coli JM103(pBQ14) for 90 min at 37.deg.C. Sequence of N-terminal 15 amino acids of the overproduced protein was well matched to the deduced one from the SPP2 reading frame. Then, polyclonal antibodies were generated from rabbits immunized with gel-purified SppSp protein. These antibodies reacted specifically with the Spp2p protein extracted from yeast cells expressing the SPP2 gene to a great extent. The antibodies could also block the activity of yeast splicing extracts.

• 식물조직배양학회지
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• 제25권6호
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• pp.525-530
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• 1998

인삼의 뿌리절편, 줄기, 엽병에 Agrobacterium을 접종하여 고생장 모상근을 선발하고자 수행하였다. 인삼 뿌리 절편에서 A. rhizogenes R1000과 A. rhizogenes $A_4$에 의하여 모상근이 유도되었으며, 인삼의 줄기 및 엽병에서도 모상근이 유도되었다. 유도된 모상근은 rolC및 virC DNA절편의 확인으로 형질전환체임을 확인하였으며, 균이 제거된 모상근을 선발하였다. 선발된 모상근 300 세포주중 성장과 형태적 특징이 뚜렷한 11 모상근을 선발하였다. 이들 모상근은 주근이 비후된 것, 주근이 가는 것, 측근의 돌기가 많은 것, 측근의 생장이 높은 것 등의 특징을 나타내었다. 이들 11 모상근중 주근이 가늘고 측근의 생장이 왕성한 형태가 모상근의 생장이 좋았으며, 주근이 비후되고 측근의 돌기가 많은 형태는 생장이 낮았다. 본 연구에서 인삼 뿌리절편으로부터 고생장 모상근인 KGHR-1, KGHR-5, KGHR-8을 선발하였다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제39권3호
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• pp.205-211
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• 2012

Pueraria lobata is a perennial legume plant, widely distributed in the countries of East Asia. It is a medicinally important leguminous plant and produces various isoflavones such as puerarin, daidzein etc which have potential for preventing several chronic diseases including osteoporosis, cardiovascular disease and cancer. In this study, we tried to induce hairy roots in vitro from Korean wild arrowroot P. lobata and investigated the effects of hormones and light conditions. Initially leaf and stem segments were infected with Agrobacterium rhizogenes and incubated in different conditions. Hairy roots were induced from only stem segments and the induction was best at dark condition and the presence of IBA during incubation. Secondary roots were also significantly much more induced at the dark condition than at the 16 hours light condition. Among plant growth regulators of auxin, IBA was best for secondary root formation while 2,4-D, IAA and NAA produced callus or less hairy roots. The presence of the foreign gene rolC transferred by A. rhizogenes that plays a major role in hairy root induction was confirmed by PCR. The accumulation of isoflavones such as puerarin and daidzin was also confirmed. These results will facilitate mass production of hairy root and can be used for the production of functional substances from wild arrowroots.

• 식물조직배양학회지
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• 제25권3호
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• pp.207-217
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• 1998

한국에서 자생한 자연산 tumor 조직과 근권토양으로부터 형질전환율이 높은 hypervirulent Agrobacterium spp를 분리하기 위해서 Salix, Diospyros, Populus 및 Malus에서 형성된 tumor 조직과 근권토양을 채취하괴 Schroth 선택배지와 New and Kerr 배지를 이용하여 78 균주의 colony를 특성에 따라 분리하였다. 이중에서 48 균주가 당근 disc에서 tumor를 형성하였으며 tumor를 형성한 균주중 형성시기가 빠르며 크기가 커 hypervirulent 균주로 생각되는 A. tumefaciens SP101을 biotype 1, 그리고 A. tumefaciens SM042를 biotype 2로 동정하였다. 토양중에서 선발한 A. tumefaciens SM042와 disarmed A. tumefaciens PC2760에 kanamycin 저항성 유전자를 함유하고 있는 binary vector pGA643을 도입하여 conjugant인 A. tumefaciens SM643과 A. tumefaciens PC643을 kanamycin과 tetracycline이 함유된 최소배지에서 획득하였다. 연초의 형질전환을 위해서 conjugant Agrobacterium과 연초조직을 동시배양 후 2,4-D와 kanamycin이 함유된 선발배지에 치상하여 형질전환을 유도한 결과 A. tumefaciens SM643이 A. tumefaciens PC643보다 더 많은 캘러스가 형성되었다. 그러나 A. tumefaciens PC643을 사용한 형질전환 캘러스는 대부분 friable한 캘러스로 유도되었으며 정상적으로 식물체로 생장하였으나 A. tumefaciens SM643을 사용한 캘러스는 매우 딱딱하며 둥그런 형태의 캘러스와 friable한 캘러스가 혼재한 상태로 생장하였으며, 이중에서 friable한 캘러스는 정상적인 shoot가 형성되었으나 딱딱한 캘러스로 유도된 형질전환체는 식물체로 형성되지 않고 반구형 미색의 전형적인 tumor 캘러스로 생장하였다. 한편 형질전환시 캘러스를 유도하지 않고 직접 shoot를 형성시킨 결과 disarmed Ti-plasmid를 사용하지 않고 wild-type Ti-plasmid를 사용해도 정상적인 형질전환체를 획득할 수 있었다.