In Saccharomyces cerevisiae, ribosomal protein L7, one of the ~46 ribosomal proteins of the 60S subunit, is encoded by paralogous RPL7A and RPL7B genes. The amino acid sequence identity between RPl7a and RPl7b is 97 percent; they differ by only 5 amino acid residues. Interestingly, despite the high sequence homology, Rpl7b is detected in both the cytoplasm and the nucleolus, whereas Rpl7a is detected exclusively in the cytoplasm. A site-directed mutagenesis experiment revealed that the change in the amino acid sequence of Rpl7b does not influence its subcellular localization. In addition, introns of RPL7A and RPL7B did not affect the subcellular localization of Rpl7a and Rpl7b. Remarkably, Rpl7b was detected exclusively in the cytoplasm in rpl7a knockout mutant, and overexpression of Rpl7a resulted in its accumulation in the nucleolus, indicating that the subcellular localization of Rpl7a and Rpl7b is influenced by the intracellular level of Rpl7a. Rpl7b showed a wide range of localization patterns, from exclusively cytoplasmic to exclusively nucleolar, in knockout mutants for some rRNA-processing factors, nuclear pore proteins, and large ribosomal subunit assembly factors. Rpl7a, however, was detected exclusively in the cytoplasm in these mutants. Taken together, these results suggest that although Rpl7a and Rpl7b are paralogous and functionally replaceable with each other, their precise physiological roles may not be identical.
원핵생물체의 생명유지에 중요한 역할을 담당하는 유전자들을 밝히기 위해 미생물 유전체들 사이의 공통적 유전자를 파악하는 COG 알고리즘을 이용하였다. 원핵생물 711종 모두에 보존적인 것은 COG0080 (Ribosomal protein L11) 1개였다. 708종 이상의 원핵생물에 보존적인 22개의 ortholog 중 전사관련 2개, tRNA synthetase 관련4개, ribosamal large subunit 8개, ribosomal small subunit 7개였다. 700종 이상의 원핵생물에 보존적인 COG는 58개였다. 이중 리보좀을 구성하는 소단위체 등 번역 관련 COG가 50개(86.2%), 전사관련 COG가 4개(6.9%)로 나타나 생명현상에서의 단백질의 중요성을 알 수 있었다. 58개의 COG 중 보존성은 COG0060 (Isoleucyl tRNA synthetase)이 가장 높았고 COG0143 (Methionyl tRNA synthetase)이 가장 낮았다. 문(phylum)과 강(class) 수준에서 보존적 유전자들의 평균과 분산으로 유전체 분석을 수행한 결과 변이가 큰 고세균은 진정세균과 구분되었으며 편차는 일부 진정세균이 고세균보다 컸다. 보존적 유전자를 탐색하는 본 연구의 기법은 기초과학 연구와 함께 항균제 개발과 항암요법 개발 등에도 유용할 것이다.
목 적 : 최근에 macrolide계 항균제에 내성인 M. pneumoniae 균주가 증가한다는 외국의 보고가 있었으며, 국내에서 수행된 한 연구에서도 M. pneumoniae의 macrolide 내성률을 49% 정도로 보고한 바 있다. 이에, 본 연구는 M. pneumoniae 폐렴으로 진단된 소아의 비인두 흡인물에서 M. pneumoniae의 macrolide 계항균제 내성에 연관된 것으로 알려진 유전자 변이 유무를 확인하고, M. pneumoniae의 macrolide계 항균제에 대한 최소억제농도를 측정하기 위한 기초 연구로 M. pneumoniae 배양법을 구축하고자 시행되었다. 방 법 : 2000년과 2003년 M. pneumoniae 감염의 유행기에 급성 호흡기 증상을 주소로 서울대학교 어린이병원과 분당서울대학교병원에서 치료받은 소아 중 혈청학적 검사와 M. pneumoniae PCR을 통해 M. pneumoniae 폐렴으로 진단받은 환아 62명으로 부터 채취하여 $-80^{\circ}C$에 보관되었던 비인두 흡인물을 대상으로 하였다. M. pneumoniae의 23S rRNA domain V의 peptidyl transferase 부위와 ribosomal protein L4를 M. pneumoniae 특이 PCR로 증폭한 후 염기서열분석을 시행하였다. 염기서열의 분석은 M. pneumoniae 표준 균주와 비교하여, 23S rRNA domain V의 A2063G, A2064G 변이와 ribosomal protein L4의 M144V변이 유무를 확인하였다. 또한, M. pneumoniae 표준 균주와 33개의 비인두흡인물($-80^{\circ}C$에 보관되었던 28검체와 1-2일간 냉장보관되었던 비인두흡인물 5 검체)을 Chanock's glucose 액체배지와 한천배지에 접종하고 $37^{\circ}C$의 5% $CO_2$ 항온기에서 6주간 관찰하여 배양을 확인하였다. 결 과 : 총 62 검체 중 23S rRNA gene에 대한 염기서열분석이 가능했던 61 검체 중 1검체(1.6%)에서 A2064G변이가 관찰되었고, 62 검체의 ribosomal protein L4에 대한 염기서열분석 결과 17검체(27.4%)에서 M144V 아미노산 변이가 확인되었다. M. pneumoniae 배양 결과, 표준 균주는 Chanock's glucose 액체배지와 한천배지 모두에서 배양되었고 2009년에 채취된 5검체 중 2검체에서 배양이 확인되었으나, $-80^{\circ}C$에 보관되었던 28검체는 모두 배양되지 않았다. 결 론 : 본 연구에서 23S rRNA gene의 유전자 변이 빈도는 매우 낮았고, ribosomal protein L4의 M144V 변이는 좀 더 많은 검체에서 확인되었다. Macrolide계 항균제에 내성인 M. pneumoniae의 분포와 M. pneumoniae의 23S rRNA gene과 ribosomal protein L4의 변이에 대한 추가적인 연구들을 통해 M. pneumoniae의 macrolide 항균제에 대한 내성기전을 이해하는데 도움을 줄 수 있을 것으로 생각된다.
Brevibacterium ammoniagenes 염색체상에서 phosphotrans-ferase system의 glucose permease를 코드하는 ptsG 유전자와 인접한 지역의 염기서열을 결정한 결돠 1,467 nucleo-tides로 구성된 1개의 open reading frame(ORF)이 발견되었고 이것은 489 아미노산 잔기로 구성되는 단백질을 코드하는 것으로추정된다. 이러한 ORF로부터 추정된 단백질의 아미노산 잔기배열을 분석한 결과 30S 리보좀을 구성하는 단백질중의 하나인 S1과 상동성이 높은 것으로 나타났는데 특히 Mycobacterium tuberculosis M. leprae와 Srepto-myces coelicola의 S1단백질의 아미노산 잔기배열과 각각 83%, 74%m, 77%의 매우 높은 상동성을 보였으며 Escherichia coli의 것과도 약 40%의 상동성을 보였다 이로보아 B.ammoniagenes 염색체상에서 ptsG 유전자와 인접한 지역에 존재하는 ORF는 리보좀 단백질 S1의 유전자로 추정된다. 또한 이들은 염색체상에서 동일한 방향으로 판독되며 S1의 유전자가 ptsG의 위 지역으로 266 nucleotides 떨어져 존재하고 있다.
The influence of refeeding with either vitamin, mineral, fibre of water on protein synthesis and mRNA content in the liver and breast muscle of fasted chicks was investigated. At 15 d of age, chicks were fasted for 2 d and then refed either vitamin, mineral, fibre or water. The fractional synthesis rate (FSR) of protein was measured after 30 min of refeeding by using a large dose injection of L - 2, $6[^3H]$ phenylalanine. In the liver, FSR was reduced by fasting and tended to increase but not significantly by refeeding with vitamin or mineral. FSR was not affected by refeeding with fibre or water. There was no influence of fasting and refeeding on ribosomal capacity (the RNA : protein ratio) and ribosomal efficiency (total protein synthesised per total RNA). The absolute synthesis rate (ASR) of liver protein and hepatic mRNA content were reduced by fasting and unchanged by refeeding. In the muscle, FSR, ASR and mRNA content were significantly decreased by fasting and not recovered by refeeding with either vitamin, mineral, fibre or water. It concluded that vitamin, mineral, fibre and water have little capacity to stimulate liver and muscle protein synthesis reduced by fasting.
원핵생물 1,309종(species)에 보존적인 유전자(ortholog)를 파악하기 위해 1,309종을 대상으로 COG(Cluster of Orthologous Groups of proteins) 기법을 적용하였으며, 그 결과 ribosome protein S11 (COG0100)을 확인하였다. 1,308, 1,307, 1,306 및 1,305종에서 보존된 ortholog의 수는 각각 2, 5, 5 및 6개였다. 1,303종 이상에서 보존된 유전자는 29개였고, 이들은 23개의 리보솜 단백질, 3개의 tRNA 합성효소, 2개의 번역 인자 및 1개의 RNA 중합효소 소단위체 유전자였다. 대부분이 단백질 합성과 연관되어 원핵생물에서 단백질 발현이 중요한 것으로 판단되었다. 29개의 COG 중에서 ribosome protein S12 (COG0048)가 보존성이 가장 높았다. 29개의 보존된 COG는 대개 하나의 원핵생물에 하나의 단백질이 분포하였다. COG0090은 보존성이 가장 낮았으며 phylogenetic distance value의 표준편차도 가장 컸다. COG0090은 리보솜의 구성원 기능 외에 복제와 전사의 조절자 역할을 하기에, 각 원핵생물이 다양한 환경에서 생존하기 위해 변이가 큰 것으로 추론되었다. 이 연구는 기초 과학과 종양 조절 및 항균제 개발에 필요한 데이터를 제공할 수 있을 것이다.
The cDNA encoding ribosomal protein S4(RPS 4) from an ovary cDNA library of the Japanese monkey (Macaca fuscata) was cloned and sequenced. The RPS4X gene from monkey X chromosome encodes a deduced protein of 263 amino acids and share 99.1% cDNA sequence similarity and 100% amino acid sequence identify with the human RPS4X. Rate of synonymous substitution was higher in RPS4Y than in RPS4X in comparison to the monkey and human. The ratio of synonymous and nonsynonymous substitutions per site indicated that directional selection has nor occurred in RPS4 genes. Phylogenetic analysis using the neighbor-joining method revealed that X and Y-linked RPS4 genes have evolved independently.
Kim, Hong-Gyum;Lee, Jin-Joo;Park, Eun-Hee;Sa, Jae-Hoon;Ahn, Ki-Sup;Lim, Chang-Jin
BMB Reports
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제34권4호
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pp.379-384
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2001
The cDNA encoding ribosomal protein was identified from a cDNA library of Schizosaccharomyces pombe. The nucleotide sequence of the 548 by cDNA clone reveals an open reading frame, which encodes a putative protein of 166 amino acids with a molecular mass of 18.3 kDa. The amino acid sequence of the S. pombe L11 protein is highly homologous with those of rat and fruit, while it is clearly less similar to those of prokaryotic counterparts. The 1,044 by upstream sequence, and the region encoding N-terminal 7 amino acids of the genomic DNA were fused into the promoterless $\beta$-galactosidase gene of the shuttle vector YEp357 in order to generate the fusion plasmid pHY L11. Synthesis of $\beta$-galactosidase from the fusion plasmid varied according to the growth curve. It decreased significantly in the growth-arrested yeast cells that were treated with aluminum chloride and mercuric chloride. However, it was enhanced by treatments with cadmium chloride ($2.5\;{\mu}M$), zinc chloride ($2.5\;{\mu}M$), and hydrogen peroxide (0.5 mM). This indicates that the expression of the L,11 gene could be induced by oxidative stress.
Protein methylation occurs ubiquitously in nature and involves N-methylation of lysine, arginine, histidine, alanine, proline and glutamine, O-methylesterfication o dicarboxylic acids, and S-methylation of cysteine and methionine. In nature, methylated amino acids accur in highly specialized proteins such as histones, flagella proteins, myosin, actin, ribosomal proteins. hn RNA-bound protein, HMG-1 and HMG-2 protein, opsin, EF-Tu, EF-$1\alpha$, porcine heart citrate synthase, calmodulin, ferredoxin, $1\alpha$-amylase, heat shock protein, scleroderma antigen, nucleolar protein C23 and IF-3l.
Kim, Ji-Hee;Kang, Soon-Min;Suh, Jin-Soo;Kim, Chong-Rak
대한의생명과학회지
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제8권3호
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pp.195-202
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2002
Osteoarthritis (OA), the most common form of arthritis, involves the destabilization of the normal balance between the degradation and the synthesis of articular cartilage and subchondral bone within a joint. As articular cartilage degrades over time, its smooth surface roughens and bone-against-bone contact ensues, producing the inflammation response symptomatic of this 'wear and tear' disease. Although a variety of genetic, developmental, metabolic, and traumatic factors may initiate the development of osteoarthritis, its symptoms (joint pain, stiffness, and curtailed function) typically evolve slowly, and patients experience periods of relative calm alternation with episodes of inflammation and pain. Rheumatoid arthritis (RA), an autoimmune disease of unknown etiology characterized by chronic synovitis and cartilage destruction, affect 1% of the total population. Cartilage is a specialized connective tissue in which the chondrocytes occupy only 5% of the volume. Cartilage is particularly rich in extracellular matrix, with matrix making up 90% of the dry weight of the tissue chondrocytes have cell processes that extend a short distance into the matrix, but do not touch other cells thus in cartilage, cell-matrix interactions are essential for the maintenance of the extracellular matrix. In this study, subtractive hybridization method was utilized to detect genes differentially expressed in chondrocytes treated with methylprednisolone. We have isolated 57 genes that expressed differentially in the chondreocytes by methylprednisolone. 13 clones of them were analyzed with sequencing and their homologies were searched. 8 cDNAS included KIAA 0368, upregulated during skeletal muscle growth 5 (usmg 5), ribosomal protein S 18 (RPS 18), skeletal muscle ryanodine receptor, radial spoke protein 3 (RSP 3), ribosomal protein QM, ribosomal protein L37a (RPL37A), cytochrome coxidase subunit VIII (COX8).
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[게시일 2004년 10월 1일]
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