• 원예과학기술지
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• 제31권6호
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• pp.657-665
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• 2013

본 연구의 목적은 한국잔디에 발생하는 병해 중 가장 큰 피해를 나타내는 갈색퍼짐병의 생물학적 방제를 위해 새로운 길항 미생물을 분리하고 그 방제효과를 기내 및 생물검정을 통해 확인하는 것이다. 갈색퍼짐병에 항균활성을 갖는 길항미생물을 선발하고자 토양으로부터 미생물을 분리하여 R. solani AG2-2 (IV)와의 대치배양을 통해 61균주를 1차로 선발하였으며, 선발 균주 중 R. solani AG2-2(IV)의 균사 생육 억제력이 가장 큰 3종의 균주 I-009, FRIN-001-1 및 YPIN-022를 최종 길항미생물로 선발하였다. 이들 세 분리균주의 16s rRNA 염기서열을 분석한 결과 I-009와 FRIN-001-1은 Bacillus 속에 속하였고, YPIN-022 균주는 Pseudomonas 속의 미생물로 확인되었다. 배양여액을 이용한 R. solani AG2-2 (IV)의 균체량 측정결과 선발 길항미생물 모두 51.7-63.5%의 균체 증식 억제력을 확인하였다. 장성에서 수확한 들잔디의 일종인 장성중지를 생육상에서 활착시킨 후 조사한 생물검정에서 잔디줄기 위에 균체 발생율은 I-009와 YPIN-022 균주 처리구에서 각각 60.3%와 65.0%로 갈색퍼짐병 병원균 단독처리구에 비하여 28.1%와 23.7%의 병 발생 억제효과를 나타냈으나, FRIN-001-1 균주 처리구는 47.8%의 균체발생율을 보여 비교적 높은 43.0%의 병 발생 억제율을 보였다. 본 연구결과 한국잔디 갈색퍼짐병에 대한 병 발생 억제율이 가장 우수한 선발 길항미생물 균주는 FRIN-001-1였고, 향후 추가적인 포장검증을 통해 한국잔디 이용지역을 위한 생물농약 개발에 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제60권3호
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• pp.213-218
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• 2017

The objective was to examine the antifungal activity of Pinus densiflora extract for the control of turfgrass fungal diseases. Antifungal activities of the various fractions of n-hexane, methylene chloride (Ch), ethyl acetate (EtOAc), and n-butanol from P. densiflora were evaluated against Rhizoctonia solani AG1-1B, R. solani AG2-2IV, Sclerotinia homoeocarpa, R. cerealis, Pythium spp., and Colletotrichum graminicola. The Ch and EtOAc fractions showed antifungal activity against Pythium sp. and C. graminicola in paper disc assay. The effective concentration to produce 50% mycelial inhibition ($EC_{50}$) using five discriminatory concentrations of pinosylvin (1) from the Ch fraction of P. densiflora was evaluated on R. solani AG1-1B, R. solani AG2-2IV, R. cerealis, and S. homoeocarpa. S. homoeocarpa showed the highest sensitivity with the lowest mean $EC_{50}$ value ($8.426{\mu}g/mL$) among the four pathogens. Among the three Rhizoctonia pathogens, R. cerealis had the highest mean $EC_{50}$ value ($99.832{\mu}g/mL$) and R. solani AG2-2IV, with the lowest sensitivity, had the lowest $EC_{50}$ value ($39.696{\mu}g/mL$). These results suggested that pinosylvin (1) from P. densiflora could be a valuable lead compound in the improvement of a novel antifungal agent.

• 한국균학회지
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• 제26권3호통권86호
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• pp.373-379
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• 1998

Rhizoctonia solani의 종내 그룹의 분류에는 균사융합군과 배양형태가 많이 이용되고 있으며, 이미 20종 이상의 R. solani가 생태학적, 형태학적, 효소학적, hyphal anastomosis 등에 의해 이미 구분되어졌다. Anastomosis group은 R. solani를 분리하는데 유용하지만 R. solani의 생물학적과 병리학적 연구를 위한 유전적 특성과 동정의 직접적인 방법이 요구되어진다. RAPD는 특별한 DNA 절편을 증폭하고 이를 genetic mapping, identification of isolates에 유용하게 적용될 수 있으며, 또한 genetic variation 조사에도 사용될 수 있다. Dendrogram을 작성한 결과 크게 5 group으로 나뉘어졌고, 5개의 group은 AG group의 subgroup과 동일하게 나뉘어졌다. AG group에 구분되지 않은 species들도 RAPD결과 AG tester들과 grouping 되어졌다. RS-1은 AG-5 group에 속하며, RS-4, RS-14, RS-17, RS-16은 AG-2-2(III B)에 속하였다. RS-13은 AG-4에 속하였으며, RS-8과 RS-10은 AG-1(I B)에, RS-7과 RS-21은 AG-2-2(IV)에 속하였다. RS-19는 AG-1-1(I C)에 속하고, RS-3, RS-5, RS-18, RS-6, RS-15는 AG-1에 속하였다. RAPD 결과 AG group의 subgroup간의 차이를 볼 수 있었고, 이에 AG group 되어 있지 않은 species의 AG grouping이 이루어졌다. 또한 subgroup 간의 유전적 차이를 확인 할 수 있는 marker를 개발하거나 subgroup의 특별한 primer를 제작하는 SCAs기법을 이용하여 식물체 병반 또는 토양에서 분리된 R. solani를 간이 동정에 이용할 수 있을 것으로 기대한다.

• 아시안잔디학회지
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• 제25권1호
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• pp.48-51
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• 2011

본 연구는 SCB저농도액비의 기능성향상을 위한 섬유소분해 미생물균주를 탐색하고 선발하기 위해 수행되었다. 예초물 퇴비에서 섬유소분해 미생물균주는 배양 및 형태적 특성에 따라 5개의 균주를 선발하였다. 선발된 섬유소 분해 미생물균주의 배지에 따른 균생장은 TSB배지에서 배양할 때 균의 생장속도가 가장 높게 나타났다. 섬유소분해 미생물균주를 SCB저농도액비에 접종한 결과, 접종 후 18시간에는 균생장이 거의 이루어지지 않다가 24시간이 지나면서 급격히 증가하여 36시간 후에 균생장이 최고조를 이룬 뒤 48시간 이후에는 사멸기가 시작되는 것으로 조사되었다. NB배지에서 보다 TSB배지에서 CDMs의 생장속도가 빠른 것으로 조사되었다. 주요 잔디병원균에 대한 항균력을 검정한 결과 Sclerotinia homoeocarpa, Rhizoctonia solani AG2-2(IV)와 Pythium spp.에서 CDMs을 첨가한 SCB 저농도액비는 각각 14.1, 11.0, 26.8% 균사생장이 억제되었다. 통계적인 유의차는 없었으나, 잔디 퇴비에서 선발된 CDMs을 배양한 SCB저농도액비를 지속적으로 코스관리에 이용한다면 일부 잔디병원균에 효능이 있을 것으로 기대된다.

• 한국균학회지
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• 제22권4호
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• pp.309-324
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• 1994

68종의 병든 작물(作物)에서 분리한 총 2,276균주의 Rhizoctonia solani를 균사융합군(菌絲融合群) 검정결과(檢定結果), 균사융합군(菌絲融合群) AG-1, AG-2-1, AG-2-2, AG-3, AG-4, AG-5로 분류되었다. 이들 균주중 1,091균주는 AG-1으로 동정(同定)되고, 326 균주는 AG-2-1, 191 균주는 AG-2-2, 71 균주는 AG-3, 505 균주는 AG-4, 92 균주는 AG-5로 동정(同定)되였다. AG-1의 균주들중에서 791 균주는 배양형 IA 로 분류되고, 280 균주는 배양형 IB, 나머지 균주들은 배양형 IC 로 분류되었다. AG-2-2의 균주들 중에서 112 균주는 배양형 IIIB로 분류되고, 나머지 균주들은 배양형 IV로 분류되었다. AG-1의 배양형 IA, IB, IC 는 각각 7종, 26종, 2종의 작물(作物)에서 분리되었다. AG-2-1은10 종의 작물(作物)에서 분리되었다. AG-2-2의 배양형 IIIB와 IV는 각각 7종 및 3종의 작물(作物)에서 분리되었다. AG-3은 감자에서만 분리되었다. AG-4는 43종의 작물(作物)에서 분리되었으며, AG-5는 13종의 작물(作物)에서 분리되었다. 45종의 작물(作物)에서는 단일한 균사융합군(菌絲融合群)이 분리되었으나, 나머지 작물(作物)에서는 둘 혹은 둘 이상의 균사융합군(菌絲融合群)이 분리되었다. 일부 균사융합군(菌絲融合群) 혹은 배양형의 배양적인 모습은 서로 비슷하였으나, 하나의 균사융합군(菌絲融合群) 혹은 배양형에 속하는 균주들의 배양적인 모습은 다른 균사융합군(菌絲融合群) 혹은 배양형에 속하는 균주들의 배양적인 모습과 대부분 달랐다. AG-1, AG-2-2, AG-4, AG-5의 균사생장 최적온도(最適溫度) 범위는 $26{\sim}30^{\circ}C$이고, AG-2-1과 AG-3의 균사생장 최적온도(最適溫度) 범위는 $22{\sim}26^{\circ}C$였다. AG-2-1의 균사생장 최저온도(最低溫度)는 $2{\sim}3^{\circ}C$로서 가장 낮았고, AG-1(IA)와 AG-4의 균사생장 최저온도(最低溫度)는 $10{\sim}11^{\circ}C$로서 가장 높았으며, 이외 다른 균사융합군(菌絲融合群)의 균사생장 최저온도(最低溫度) 범위는 $5{\sim}10^{\circ}C$였다. AG-2-2(IIIB)의 균사생장 최고온도(最高溫度)는 $36{\sim}37^{\circ}C$로서 가장 높았고, AG-2-1의 균사생장 최고온도(最高溫度)는 $29{\sim}30^{\circ}C$로서 가장 낮았으며, 이외 다른 균사융합군(菌絲融合群)의 균사생장 최고온도(最高溫度) 범위는 $31{\sim}36^{\circ}C$였다. $26^{\circ}C$에서의 균사생장율(菌絲生長率)을 비교한 결과, AG-1(IC)가 가장 빨리 자랐으며, AG-1(IA) 와 AG-1(IB)가 다음으로 빨리 자라고, AG-2-1이 가장 느리게 자랐다.

• Weed & Turfgrass Science
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• 제4권2호
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• pp.124-128
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• 2015

갈색퍼짐병은 토양 병원성균으로 Rhizoctonia solani AG2-2 IV가 원인균이다. 한국잔디나 버뮤다글라스와 같은 난지형 잔디에 가장 중요한 병으로 알려져 있다. 본 연구는 갈색퍼짐병 발병토양의 미생물 군집 분석으로 생물적 방제제로 이용할 근거자료를 수집하기 위하여 실시하였다. 갈색 퍼짐병의 중심부(CLC)와 가장자리(CLE), 건전부(CLH)에서 채취한 근권부 토양의 미생물 군집(bacterial composition)을 Metagenomics 데이터 분석으로 Phylum 수준에서 조사한 결과 미생물상은 Proteobacteria, Acidobacteria, Chloroflexi, Firmicutes, Planctomycetes, Gemmatimonadetes, Nitrospira, Cyanobactria, Verrucomicrobia, Bacteroidetes 등의 순으로 분포 경향은 모두 유사하게 나타났다. 이에 반해 Actinobacteria의 경우 중심부에서 9.28%, 가장자리에서 10.84%로 건전부에서의 16%에 비하여 5~6% 정도 높은 비율로 분포하는 결과가 나타났다. Phylum 수준에서 중복되는 미생물의 종류를 조사한 결과 전체적으로 중심부에서는 총 6,948 OTUs가 분포하였으며 가장자리와 건전부에서는 각각 6,505와 5,537 OTUs 분포하는 것으로 나타났다. Actinobacteria의 경우 중심부의 총 OTUs는 615였으며 가장자리와 건전부는 709와 891 OTUs로 나타났다. 또한 모두 중복되는 OTUs도 382로 높게 나타났으나 서로 중복되지 않는 OTUs는 건전부에서 286으로 중심부와 가장자리가 91과 126 OTUs인 것에 비하여 2~3배 이상으로 월등히 높게 나타났다.

• 원예과학기술지
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• 제32권6호
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• pp.879-886
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• 2014

가축분뇨액비의 토양전염성 잔디병해들의 억제능력을 알아보고자 군위, 논산, 무안, 여주, 이천, 익산, 합천, 횡성 등 8개 지역의 가축분뇨액비생산시설에서 생산된 액비를 이용하여 기내에서 수행하였다. 가축분뇨액비와 병원균주들과의 대치배양을 통해 총 110종의 길항미생물을 선발하였으며, 각 병원균주별로 길항능력이 우수한 한 종씩을 선발하였다. 선발된 각각의 미생물은 16s rRNA 서열분석을 통해 brown patch에 길항력을 보인 ICIIIB60은 Alcaligenes sp., large patch에 길항력을 나타낸 GWIV70은 Bacillus licheniformis Ab2, dollar spot에 길항력을 보인 ISSH20은 B. subtilis C7-3으로 동정되었다. 이들의 최적배양조건은 NB 배지(ICIIIB60)와 TSB 배지(GWIV70, ISSH20)에서 온도는 $29.5^{\circ}C-31.4^{\circ}C$의 범위에서, pH는 6.5-7.3의 범위에서 잘 자라는 것으로 확인되었다. 또한 각 균주를 5종의 살균제와 혼용한 결과, ICIIIB60 균주는 테부코나졸 제제, GWIV70와 ISSH20 균주는 토클로포스메틸 제제에서 생존율이 높아 혼용처리가 가능할 것으로 판단되었다. 이러한 결과를 통해 가축분뇨액비는 비료로서의 역할뿐만이 아니라 잔디 병해를 줄일 수 있는 친환경적인 소재로 이용이 가능함을 확인하였다.

• Weed & Turfgrass Science
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• 제2권1호
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• pp.70-75
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• 2013

본 연구에서는 7종의 약용식물(송절, 지구목, 측백, 대풍자, 유백피, 은행잎, 참오동나무)을 사용하여 잔디의 주요 병원균 6종(R. solani AG 2-2(IV), R. solani AG-1 IB, Pythium sp., S. homoeocarpa, R. cerealis, C. graminicola)을 대상으로 항진균 활성을 실험하였다. 디스크 확산법으로 항진균 활성이 있는 약용식물 추출물을 선발하였고, 선발된 추출물을 사용하여 균사생육 억제 효과를 검정하였다. 디스크 확산법으로 실험 한 결과 7종의 약용식물 중 송절, 측백, 유백피 등 3종의 추출물에서 항진균 활성이 있는 것으로 나타났다. 송절 추출물 1,000배 처리에서 Pythium sp.에 대하여 100%, C. graminicola에 대하여 84.3%의 균사생육 억제율을 나타내었으며, 특히 Pythium sp.에 대해서는 5,000배 처리에서도 89.5%의 균사생육 억제율을 나타내었다.

• 아시안잔디학회지
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• 제26권1호
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• pp.17-23
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• 2012

Rhizoctonia solani AG2-2(IV)에 의한 갈색퍼짐병은 들잔디에서 가장 심각한 병이다. 이 연구의 목적은 파라핀 오일을 이용하여 갈색퍼짐병에 대한 실내에서 살균효과와 포장에서 병 방제 효과를 평가하는 것이다. 포장시험인 골프장에서 파라핀 오일은 200배와 50배액을 1 $m^2$당 1 L을 살포하였다. 실내시험에서는 균사생육억제효과시험을 위해서는 0.25%에서 2%까지 파라핀농도에서 시험하였다. 파라핀 오일의 0.5%의 농도와 2%의 농도에서 각각 43%와 67%의 균사생장 억제효과가 있었다. 두 지역의 포장시험에서 파라핀 오일의 9월에 1회 살포로서 갈색퍼짐병의 발달을 48%까지 억제하였다. 파라핀오일은 친환경적으로 들잔디에 갈색퍼짐병을 방제하는 대체물질로 사용할 수 있을것이다.

• Journal of Plant Biotechnology
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• 제43권4호
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• pp.450-456
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• 2016

한국형 잔디에서는 다른 병에 비해 진전 속도가 빠르고 주로 뿌리에서부터 발병하여 잔디를 고사시키고 발병 후 구제하기 매우 어려운 라이족토니아잎마름병(라지패취)이 큰 문제로 대두되고 있다. 라이족토니아잎마름병(라지패취)은 Rhizoctonia solani AG2-2 (IV)병원균에 의해 발생하는데, 이 병원균에 강한 내병성 들잔디를 개발하기 위해 식물방어반응에 중요한 역할을 하는 것으로 알려진 PR-Protein 중 하나인 ${\beta}-1,3-glucanase$를 들잔디로부터 클로닝 하였다. ${\beta}-1,3-glucanase$는 바이러스나 균의 감염으로 인해 식물조직이 과민반응을 일으킬 때 세포내에서 생성되고 세포 외로 분비되어 세포 사이 공간에서 주로 병원균 저항성기능을 하는 것으로 알려져 있다. ${\beta}-1,3-glucanase$ 단자엽식물 중 내병성에 대한 연구가 되어있는 옥수수, 밀, 보리, 벼의 염기서열에서 공통으로 보존되어 있는 부분을 이용해 degenerate PCR을 수행하고 얻어낸 sequence를 통해 Full-length의 cDNA를 클로닝 하였다. E.coli overexpression을 수행하여 목표 단백질을 대량 정제하여 in vitro 활성 측정 및 항균테스트를 진행하였다. 또한, ZjGlu1 유전자의 기능을 해석하기 위해 각각의 유전자를 도입한 식물형질전환용 벡터를 제작하여 잔디 형질전환체 제작을 하였다. ZjGlu1 단백질을 이용하여 9개의 균주에 대해 항균활성 테스트를 진행 한 결과 R. cerealis, F. culmorum, R.solani AG-1 (1B), T. atroviride 에서 항균활성을 보였으며, 형질전환체를 이용해 18s 유전자의 발현량을 상대로 한 각 유전자의 기관별 발현량은 크게 차이없이 모든기관에 발현되는 것을 확인할 수 있었다.