PAP-1, a novel antimicrobial peptide isolated from pyloric caeca extract of the starfish Asterina pectinifera was purified and characterized. First, the acidified pyloric caeca extract was put through Sep-Pak C18 solid phase extraction cartridge using a stepwise gradient. Among the eluents, RM 60 (retained materials at 60% methanol) showed good antimicrobial activity against Bacillus subtilis and Escherichia coli D31 and was purified in C18 reversed-phase and ion-exchange high-performance liquid chromatography columns. The purification steps yielded two novel peptides showing strong antimicrobial activities. These peptides were named pyloric caeca A. pectinifera peptide 1 and 2 (PAP-1 and PAP-2). For the characterization of the purified peptides, the molecular weights and amino acid sequences were determined by MALDI-TOF MS and Edman degradation. The molecular weights of PAP-1 and PAP-2 were about 2951.54 Da and 2980.15 Da respectively. The amino acid sequences of PAP-1 and PAP-2 were partially determined: AIQNAGES and AIQNAAES, respectively. PAP-2 is an isoform of PAP-1, differing merely by a single residue at position 6 (glycine or alanine). The comparison of the N-terminal amino acid sequences and molecular weights of the peptides with those of other known antimicrobial peptides revealed that PAP-1 and PAP-2 have no homology with any known peptides. These findings suggest that PAP-1 and PAP-2 play a significant role in the innate defense system of starfish pyloric caeca.
Domoic acid, and amnesic shellfish poison, is a neurotoxin frequently found in shellfishes. Guidance level for the consumable shellfish has been established as $20\;{\mu}g$ domoic acid/g by Health and Welfare Canada and U.S. FDA. Domoic acid is produced by pennate diatom, a Nitzschia pungens f. multiseries ingested by the shellfish. Content of domoic acid in shellfish samples collected along the Korean shoreline from May to December of 1999 was analyzed. The collection included 1 Gastropoda (Murex shell) and 11 Bivalvias (oyster, little neck clam, orient hard clam, venus clam, surf clam, ark shell, hard-shelled mussel, pen shell, jack-knife clam, pink butterfly shell, and granulated ark shell). Samples were homogenized, extracted with 50% methanol, filtered, and analyzed by reversed-phase liquid chromatography at 242 nm with mobile phase consisting of 10% acetonitrile and 0.1% trifluoroacetic acid. Recovery of the HPLC analysis was 95.80% (${\pm}1.09$). All tested samples showed no domoic acid at the detection limit of 50 ng/g.
The retention data of twenty one monosubstituted phenols in the eluent systems containing 30∼70% of methanol or acetonitrile as organic modifiers, on $ C_{18}$ and Phenyl columns were collected to investigate the effect of the substituted groups on the retention of phenols. The capacity factors of the solutes except amino phenols are greater on $ C_{18}$ than on Phenyl column. And all the solutes have shown greater capacity factors in methanol-water than that in acetonitrile-water as a mobile phase. Generally the elution order between meta and para isomers of monosubstituted phenols in consistent (p < m) regardless of the polarity of the substituted group. But the elution order between ortho and meta isomers of phenol varies with regard to the polarity of the substituted group. The retention of the monosubstituted phenols has been influenced by the interaction between the solute and unreacted silanol of columns as well as the interaction between the solute and $ C_{18}$ or phenyl group of columns. And then, the effect of unreacted silanol on the retention of the monosubstituted phenols is greater on $ C_{18}$ than on Phenyl column. And the greater hydrogen bonding acceptor basicity(${\beta}$) of the substituted group is, the greater this effect is. The relationship between the retention of the monosubstituted phenols and their parameters such as van der Waals volume(VWV) and hydrogen bonding acceptor basicity(${\beta}$) has been investigated. The good linearity has been observed in the plot log k' vs. (1.01VWV/100-1.84${\beta}$). In consequence, the retention of the monosubstituted phenols on $ C_{18}$ and Phenyl columns can be easily predicted by the parameter (1.01VWV/100-1.84${\beta}$).
The Journal of the Convergence on Culture Technology
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v.10
no.5
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pp.775-780
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2024
In this study, a simultaneous analysis method was developed using reversed-phase high-performance liquid chromatography(RP-HPLC) for the main components of motion sickness medication: Dimenhydrinate, Caffeine, Methyl Paraben, and Propyl Paraben. The analysis was conducted after pretreating the four components, utilizing a C18 column with Acetonitrile and H2O as the mobile phase. UV detection was carried out at a wavelength of 254nm. As a result of the experiment, the values of Resolution(Rs) was well over Rs > 1.5, which indicates that the separation of the four components was efficient. Additionally, the symmetry factor of the components was 0.989, 1.120, 1.256, and 1.280, respectively, showing their symmetrical stability. In the stability assessment, the calibration curves for the four components showed excellent linearity with R2 > 0.9991 to 0.9998. Furthermore, the limit of detection(LOD) ranged between 0.017 to 3.060㎍/ml, while the limit of quantification(LOQ) ranged between 0.050 to 9.180 ㎍/ml. The recovery rates range from 98.28% to 101.71%, and repeatability showed precision within the range of 0.447 to 0.550, and robustness confirmed values with %RSD < 2. The quantitative analysis results of this study demonstrated the effectiveness of a simultaneous analysis method for motion sickness medication components.
The analytical method of HPLC with the radial-flow electrochemical cell (RFEC) has been developed to determine doxorubicin, epirubicin, nogalamycin, daunorubicin and idarubicin simultaneously by employing a reversed-phase chromatography. Anthracyclines were detected at -0.74 V vs. a Ag/AgCl (0.01 M NaCl) reference electrode, a potential of diffusion current plateau in the mobile phase. At a $V_f$ of 1.0 mL/min doxorubicin, epirubicin, daunorubicin and idarubicin appeared at a retention time ($t_r$) of 6.4 min, 7.4 min, 12.7 min and 18.4 min, respectively, while at a $V_f$ of 0.6 mL/min, doxorubicin, epirubicin, nogalamycin, daunorubicin and idarubicin appeared at a $t_r$ of 9.9 min, 11.5 min, 13.5 min, 19.6 min and 28.7 min, respectively. The linearity between each anthracycline injected ($2.40{\times}10^{-7}M{\sim}1.42{\times}10^{-5}M$) and peak area (charge) was excellent with the square of the correlation coefficient ($R^2$) higher than 0.999. The detection limits were $1.0{\times}10^{-8}M{\sim}1.5{\times}10^{-7}M$ for the five anthracyclines. Within-day precision for the five anthracyclines were in reasonable relative standard deviations less than 3 % ($1.00{\times}10^{-6}M{\sim}1.42{\times}10^{-5}M$) except the lower concentrations less than $0.7{\mu}M$. Solid phase extractions of $1.00{\times}10^{-5}M$ epirubicin, $0.48{\times}10^{-5}M$ nogalamycin and $1.52{\times}10^{-5}M$ daunorubicin from human serum with a $C_{18}$ cartridge resulted in 97 %, 100 % and 90 % of recoveries, respectively.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.44
no.8
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pp.1194-1199
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2015
Vitamin $K_1$ (phylloquinone) content of commonly consumed foods in Korea were determined by solvent extraction followed by reversed-phase liquid chromatography using post-column derivatization and fluorescence detection. Samples were obtained in the years of 2013 and 2015. In this study, 46 vegetables, 14 fruits, and 6 legumes were analyzed. Relatively higher amounts of vitamin $K_1$ were found in sweet potato leaves, green kiwi, and mung beans among vegetables, fruits, and legumes, respectively. The content of vitamin $K_1$ in vegetables including spinach, broccoli, and potato ranged from non-detectable (ND) to $1,467.3{\mu}g/100g$. The content of vitamin $K_1$ in fruits ranged from ND to $42.7{\mu}g/100g$. The content of vitamin $K_1$ in legumes, including soybeans, mung beans and peas ranged from 1.7 to $63.4{\mu}g/100g$. In addition, the analytical method validation parameters including recovery, reproducibility, repeatability, peak purity, and linearity were calculated to ensure the method's validity. The results showed high linearity with a correlation coefficient of 0.9999. Overall recovery was close to 100% (n=5). This study revealed reliable vitamin K content in commonly consumed foods in Korea for a nutritional information and food composition database.
Little is known about the genetic variability in lutein content for soybeans (Glycine max L.) cultivated in Korea. Therefore, the objective of this study was to screen high quality soybean cultivars for lutein content. The lutein contents of 23 recommended varieties, 56 sauce varieties, 44 sprout varieties, and 40 local varieties were determined by saponification followed by reversed phase high performance liquid chromatography (HPLC). We found that IT No. 153398 and 22789, originating from sauce and local varieties, respectively, contained significantly higher amounts of lutein as compared to the other 161 samples. Moreover, relevant quantitative differences were found among the samples, which had lutein contents ranging from 83 to $402{\mu}g/100g$ in the recommended varieties, from 39 to $778{\mu}g/100g$ in the sauce varieties, from 52 to $589{\mu}g/100g$ in the sprout varieties, and from 106 to $861{\mu}g/100 g$ in the local varieties, respectively. In summary, this study provides reliable lutein data for soybean cultivars that can be used for breeding studies and the development of functional foods.
Journal of the Society of Cosmetic Scientists of Korea
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v.42
no.1
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pp.65-73
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2016
Korea Food and Drug Administration (KFDA) has officially announced 2,4-dinitrophenylhydrazine (DNPH) derivatization - high performance liquid chromatography (HPLC) methods for analysis of formaldehyde. This study was conducted to develop a convenient derivatization method for cosmetics by improving complex pre-treatment procedures included in KFDA method. To simplify pre-treatment procedures of KFDA method, reaction conditions including pH, time and temperature were optimized. This pre-treatment method does not require complicate pre-treatment steps of KFDA method such as pH adjustment of test solution with acetate buffer (pH 5.0), solvent-solvent partitioning with dichloromethane and concentrating procedure with vacuum evaporator. Formaldehyde-dinitrophenylhydrazone (formaldehyde-DNP) product produced by derivatization reaction was separated and quantified with a reversed-phase HPLC, which was slightly modified with KFDA method. The linearity test showed good results with 0.9999 of correlation coefficient ($r^2$) in the range of 2 ~ 40 ppm of standard solutions. In this method, limit of detection (LOD) and limit of quantitation (LOQ) values for formaldehyde were 0.2 ppm and 0.5 ppm, respectively. In addition, recovery test demonstrated that the method was also accurate and reproducible. Therefore, the proposed method can be applicable to rapid analysis of formaldehyde in cosmetics.
Bae, Jun Tae;Song, Min Hyeon;Kim, Jin Hwa;Lee, Geun Soo;Pyo, Hyeong Bae
Journal of the Society of Cosmetic Scientists of Korea
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v.38
no.4
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pp.327-338
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2012
Liquiritigenin and isoliquiritigenin are the major flavonoids present in licorice. These flavonoid compounds were prepared by submerged culture of Grifola frondosa (G. frondosa) HB0071 mycelia producing ${\beta}$-glucosidase in the aqueous extract of licorice. The contents of liquiritigenin and isoliquiritigenin were increased during the fermentation. This fungus produced a high ${\beta}$-glucosidase (activity of 91.5 mU/mL), thereby achieving high amounts of liquiritigenin and isoliquiritigenin ($568.5{\mu}g/mL$ and $89.6{\mu}g/mL$), respectively at 96 h. A reversed- phase high-performance liquid chromatography method was established for simultaneous determination of liquiritigenin and isoliquiritigenin in fermented licorice extract (FLEx). The anti-inflammatory activities were investigated by licorice extract (LEx) before and after fermentation with G. frondosa HB0071. The treatment of UVB-irradiated HaCaT keratinocytes with FLEx resulted in a dose-dependent decrease in the expression level of cyclooxygenase-2 (COX-2) mRNA. Furthermore, FLEx dose-dependently decreased mRNA of the pro-inflammatory cytokines of IL-$1{\beta}$ and IL-6 in UVB-irradiated HaCaT cells. These results suggest that FLEx may mitigate the effects of skin inflammation by reducing UVB-induced adverse skin reactions.
Objective: The aim was to evaluate roles of vitamin D3 (VD3) and beta-carotene (BC) in the development of esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) in a high-risk area, Huai'an District, Huai'an City, China. Methods: 100 new ESCC diagnosed cases from 2007 to 2008 and 200 residency- age-, and sex-matched healthy controls were recruited. Data were collected from questionnaires, including a food frequency questionnaire (FFQ) to calculate the BC intake, and reversed phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) was used to measure the serum concentrations of BC and VD3. Odds ratios (OR) and 95% confidence intervals (CI) were calculated in conditional logistic regression models. Results: The average dietary intake of BC was $3322.9{\mu}g$ (2032.4-5734.3) in the case group and $3626.8{\mu}g$ (1961.9-5827.9) in control group per capita per day with no significant difference by Wilcoxon test (p>0.05). However, the levels of VD3 and BC in the case group were significantly lower than in the control group (p<0.05). The OR values of the highest quartile and the lowest quartile of VD3 and BC in serum samples were both 0.13. Conclusion: Our results add to the evidence that high circulating levels of VD3 and BC are associated with a reduced risk of ESCC in this Chinese population.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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