• Title/Summary/Keyword: Real-Time polymerase chain reaction (PCR)

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육계에서 비타민 C 및 E의 첨가 급여가 성장 능력과 스트레스 반응에 미치는 영향 (The Effects of Dietary Supplementation of Vitamin C and E on the Growth Performance and the Stress Response in Broiler Chickens)

  • 손시환;조은정;장인석;문양수
    • 한국가금학회지
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    • 제40권1호
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    • pp.31-40
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    • 2013
  • 본 연구는 브로일러에서 비타민 C와 E의 첨가 급여가 성장 능력 및 개체별 스트레스 경감 정도에 미치는 영향을 살펴보고자 하였다. 스트레스 반응 정도는 혈액과 각 조직별 세포들에 대한 텔로미어 함량, DNA 손상율 및 열손상단백질 유전자(HSP, HMGCR) 발현율을 분석하고 고찰하였다. 텔로미어 함량 및 감축율은 양적 형광접합보인법(Q-FISH)으로 분석하였고, DNA 손상율은 comet assay로 분석하였다. 열손상단백질 유전자 발현율은 HSP70, HSP90-${\alpha}$, HSP90-${\beta}$ 및 HMGCR을 표적으로 하여 real-time PCR로 분석하였다. 시험 결과, 급여 처리구 간에 체중, 증체량, 사료 섭취량, 사료 요구율 및 생존율 등 생산 능력의 차이는 없는 것으로 나타났다. 텔로미어 감축율에 있어서는 비타민 E 첨가 급여구가 대조구에 비해 유의하게 낮은 감축율을 보여 스트레스 경감의 효과를 나타내었다. DNA 손상율 또한 모든 비타민 첨가 급여구가 대조구에 비해 유의하게 낮은 양상을 보였다. HMGCR, HSP90-${\alpha}$ 및 HSP90-${\beta}$의 유전자 발현율에 있어서도 비타민 E 첨가 급여구가 대조구에 비해 유의하게 낮은 발현율을 나타내어 스트레스 경감 효과를 나타내었다. 이상의 결과에 따라 브로일러에 사료 내 비타민 E의 첨가 급여(100 mg/kg feed)는 성장 능력의 저하 없이 개체의 생리적 스트레스 정도를 경감시키는 바람직한 항산화 제재로 사료된다.

LPS로 유도한 RAW 264.7 세포의 염증반응에서 흰민들레의 항염증 효과 (The anti-inflammatory effect of Taraxacum coreanum on lipopolysaccharide induced inflammatory response on RAW 264.7 cells)

  • 김민준;배기상;최선복;조일주;김동구;신준연;이성곤;김명진;박성주;송호준
    • 대한본초학회지
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    • 제29권6호
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    • pp.21-26
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    • 2014
  • Objectives : Taraxacum coreanum (TC) have been used as a traditional medicine to treat inflammatory diseases and anti-oxidant effect in Korea. However, the anti-inflammatory effect of TC water extract on lipopolysaccharide (LPS)-induced inflammation is not well-known. Therefore, this study was performed to identify the anti-inflammatory effect of TC on LPS induced inflammatory. Methods : RAW 264.7 cells were treated with 500 ng/mL of LPS. Water extracts of TC (0.1, 0.25, 0.5 mg/ml) was treated 1 h prior to LPS. Cell viability was measured by MTT assay. Levels of nitric oxide (NO) were measured with Griess reagent and pro-inflammatory cytokines were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and real-time polymerase chain reaction (real-time PCR). We also examined molecular mechanisms such as mitogen-activated protein kinases (MAPKs) and nuclear factor-B ($NF-{\kappa}B$) activation by western blot. Results : Water Extract from TC itself did not have any cytotoxic effect in RAW 264.7 cells. TC treatment inhibited the production of NO production, and pro-inflamamtory cytokines such as interleukin (IL)-6 and $IL-1{\beta}$ on protein and mRNA levels. In addition, TC treatment inhibited the LPS-induced activation of MAPKs such as extracellular signal-regulated kinase1/2 (ERK1/2), p38 kinases (p38), c-Jun $NH_2$-terminal kinase (JNK) and $NF-{\kappa}B$. Conclusions : In summary, our result suggest that treatment of TC could reduce the LPS-induced inflammation. Thereby, TC could be used as a protective agent against inflammation. Also, this study could give a clinical basis that TC could be a drug or agent to prevent inflammation.

둥근성게(Strongylocentrotus nudus)의 Smad3와 Estrogen Receptor-related $Receptor\;{\beta}$ like 1 유전자 발현 (Gene Expression of Smad3 and Estrogen Receptor-related $Receptor\;{\beta}$ like 1 in Sea Urchin, Strongylocentrotus nudus)

  • 정유정;손영창
    • 한국발생생물학회지:발생과생식
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    • 제11권1호
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    • pp.43-47
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    • 2007
  • Transforming growth $factor-{\beta}(TGF-{\beta})$ 신호의 매개자 역할을 하는 Smad 계열 단백질은 발생과정에 중요한 역할을 한다고 알려져 있다. Estrogen receptor(ER)와 구조적으로 유사한 estrogen receptor-related receptor(ERR)은 포유동물에서 후기 배발생기에 외배엽 형성과 관련이 되어 있는 고아핵수용체이다. 본 연구에서는 해양무척추동물의 초기발생과정과 계절번식기 동안에 Smad3와 ERR의 유전자 발현이 발생과정과 성숙에 어떠한 연관성을 갖고 있는지 알아보기 위하여, 동해안 연안에 주로 서식하는 극피동물문 둥근성게과 둥근성게(Strongylocentrotus nudus)를 재료로 하여 계절별 및 배발생 과정중에 Smad3와 $ERR{\beta}$ like 1의 mRNA 농도를 real-time PCR 방법으로 조사하였다. Smad3 mRNA는 샘플링을 시작한 2004년 2월의 생식소와 비교하면 4월부터 그 농도가 증가하기 시작하여 6월까지 증가하였으며, 산란기인 8월에 감소하였다가 10월부터 12월까지 높은 수준을 유지하였다. $ERR{\beta}$ like 1 mRNA는 6월까지 낮은 수준이었으나, 산란기인 8월에 급증한 후 다시 감소하였다. 수정란부터 초기 유생기까지 발생과정을 분석한 결과, Smad3 mRNA는 8세포기 및 16세포기에 높은 발현이 관측되었다. 한편, $ERR{\beta}$ like 1 mRNA는 포배기, 낭배기, 초기 유생기에 현저하게 높은 발현패턴을 보였다. 이상의 결과로부터 둥근성게의 산란기 및 발생배의 발생후기에 $ERR{\beta}$ like 1이 중요한 역할을 담당할 것으로 추정되며, 초기 난할시기에는 Smad3의 관련성이 시사되었다.

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비타민 C 및 E의 첨가 급여가 육계의 소포체 스트레스와 지방 및 포도당 대사 연관 유전자의 발현에 미치는 영향 (The Effects of Dietary Supplementation of Vitamin C or E on the Expressions of Endoplasmic Reticulum Stress, Lipid and Glucose Metabolism Associated Genes in Broiler Chickens)

  • 박정근;안영숙;손시환;장인석;문양수
    • 한국가금학회지
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    • 제40권2호
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    • pp.147-155
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    • 2013
  • 본 연구는 육계에서 비타민 C와 E의 첨가 급여가 소포체(ER) 스트레스 및 지방 및 포도당대사 연관 유전자들의 발현에 미치는 영향을 살펴보고자 실시하였다. 육계에 비타민 첨가 급여 후 5주령에 닭의 간을 취하여 유전자들의 발현을 real-time PCR로 비교 분석하였다. 육계의 비타민 C 및 E 첨가 급여는 HSP70, HSP90 및 HMGCR 스트레스 마커 유전자들의 발현을 감소시켰다. ER 스트레스 관련 유전자들 또한 스트레스 마커 유전자들과 마찬가지로 비타민 처리에 의하여 대조구에 비하여 낮은 발현 양상을 보여줌으로서, 대표적 스트레스 마커 유전자들과 더불어 세포 내 ER stress도 영향을 받을 수 있음을 보여 주었다. 육계의 비타민 첨가 급여는 대조구에 비하여 지방대사 연관 유전자들의 발현이 비타민 첨가구에서 감소함에 따라 지방대사에도 영향을 미치고 있음을 보여주었다. 비타민의 첨가 유무와 관계없이 간세포 내부로 포도당을 운반하는 운반체인 GLUT 단백질들의 발현에는 큰 영향을 주지 못하였다. 본 연구의 결과는 육계에 사료 내 비타민 C 또는 E의 첨가급여가 닭의 스트레스 정도를 완화시킬 수 있으며, 또한 지방합성 대사에도 영향을 미칠 수 있음을 세포 수준의 관련 유전자들의 분석을 이용하여 검증할 수 있음을 보여 주었다.

In-vitro와 In-vivo에서 산수유의 남성갱년기 개선효과 (Effect of Corni Fructus on Testosterone Deficiency Syndrome in In vitro and In vivo)

  • 김태묵;정호경;장지훈;심미옥;이무진;조정희;조현우
    • 생약학회지
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    • 제47권3호
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    • pp.264-272
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    • 2016
  • This study was carried out to evaluate the preventive effect of the Corni Fructus (SSU) 50 % EtOH extract (SSU-E50) against bisphenol A (BPA) toxicity in Leydig cells and improving testosterone deficiency syndrome in orchidectomized Sprague-Dawly (SD) rats. Antioxidant properties were measured by radical scavenging activity of SSU-E50 in ABTS assay and DPPH assay. Also, real-time polymerase chain reaction(real-time PCR) was performed to quantify the mRNA expression levels of antioxidant enzyme. SD rats were divided into eight group: normal, sham operation (Sham), orchidectomized (ORX), ORX treated with testosterone 1 mg/kg (Tes. 1), ORX treated with SSU water extract 100 mg/kg (SSU-A 100) and 300 mg/kg (SSU-A 300), ORX treated with SSU 50 % EtOH extract 100 mg/kg (SSU-E 100) and 300 mg/kg (SSU-E 300). On a comparative basis, the SSU showed better activity quenching ABTS with an IC50 value of 0.29 mg/ml and DPPH with an IC50 value of 0.33 mg/ml. Cell viability was evaluated by MTS assay as described not cytotoxic at the highest concentration of $500{\mu}g/ml$. Cytotoxicity of BPA showed in $200{\mu}M$, but definitely survived by treatment with SSU in Leydig cells. In addition, SSU increased the mRNA expression levels of antioxidant enzyme in BPA induced Leydig cells. Superoxide dismutase (SOD) level was slightly increased and malondialdehyde (MDA) level was decreased with SSU-A 100 in in-vivo. These results suggest that Corni Fructus extracts have the greatest property as a natural anti-oxidative and improves testosterone deficiency syndrome source.

miR-155, miR-191, and miR-494 as diagnostic biomarkers for oral squamous cell carcinoma and the effects of Avastin on these biomarkers

  • Emami, Naghmeh;Mohamadnia, Abdolreza;Mirzaei, Masoumeh;Bayat, Mohammad;Mohammadi, Farnoush;Bahrami, Naghmeh
    • Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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    • 제46권5호
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    • pp.341-347
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    • 2020
  • Objectives: Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is one of the most common types of head and neck cancer. MicroRNAs, as new biomarkers, are recommended for diagnosis and treatment of different types of cancers. Bevacizumab, sold under the trade name Avastin, is a humanized whole monoclonal antibody that targets and blocks VEGF-A (vascular endothelial growth factor A; angiogenesis) and oncogenic signaling pathways. Materials and Methods: This study comprised 50 cases suffering from OSCC and 50 healthy participants. Peripheral blood samples were collected in glass test tubes, and RNA extraction was started immediately. Expression levels of miR-155, miR-191, and miR-494 biomarkers in the peripheral blood of OSCC-affected individuals and healthy volunteers in vivo were evaluated using real-time PCR. The influence of Avastin on the expression levels of the aforementioned biomarkers in vitro and in the HN5 cell line was also investigated. Results: Expression levels of miR-155, miR-191, and miR-494 in the peripheral blood of individuals affected by OSCC were higher than in those who were healthy. Moreover, Avastin at a concentration of 400 μM caused a decrease in the expression levels of the three biomarkers and a 1.5-fold, 3.5-fold, and 4-fold increase in apoptosis in the test samples compared to the controls in the HN5 cell line after 24, 48, and 72 hours, respectively. Conclusion: The findings of this study demonstrate that overexpression of miR-155, miR-191, and miR-494 is associated with OSCC, and Avastin is able to regulate and downregulate the expression of those biomarkers and increase apoptosis in cancerous cells in the HN5 cell line.

미란형 구강편평태선과 재발성 아프타성 구내염 환자들의 비자극성 전타액내 T림프구 조절인자들의 발현 양상 (Expression Pattern of T Lymphocyte Regulatory Factors in Unstimulated Whole Saliva of Erosive Oral Lichen Planus and Recurrent Aphthous Stomatitis Patients)

  • 윤선학;고현미;박지일;김재형
    • Journal of Oral Medicine and Pain
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    • 제34권4호
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    • pp.363-369
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    • 2009
  • 미란형 구강편평태선과 재발성 아프타성 구내염은 T림프구에 의해 매개되는 염증성 면역질환이다. T림프구에 영향을 주는 다양한 조절 인자들 중 CD28, CD45, CD152, CD154, CD279등의 mRNA가 미란형 구강편평태선 및 재발성 아프타성 구내염 환자들의 비자극성 전타액내에서 어떻게 발현되는지를 살펴보고, 이것의 진단학적 가치를 평가하고자 한다. 미란형 구강편평태선으로 진단받은 환자군 18명, 재발성 아프타성 구내염으로 진단받은 환자군 12명, 정상군 8명에게서 비자극성 전타액을 10분간 채득한 후, 상피세포를 분리하여 mRNA를 추출하였다. Real time PCR을 이용하여 각 군의 T림프구 조절 인자들의 mRNA 발현 양상을 비교분석하였다. 미란형 구강편평태선의 T림프구 조절인자들의 mRNA 발현 양상은 정상인과 비교 결과, CD45, CD279는 높게 측정되었고, CD154는 낮게 측정되었다. 재발성 아프타성 구내염 환자들의 T림프구 조절인자들의 mRNA 발현 양상은 정상인과 비교 결과, CD45, CD279는 높게 발현되었고, CD28, CD154는 낮게 발현되었다. 부가적으로 미란형 구강편평태선 환자군의 타액내 CD152의 발현 양상은 재발성 아프타성 구내염 환자군보다 높게 발현되었다. 미란형 구강편평태선과 재발성 아프타성 구내염 환자들의 비자극성 전타액내 T림프구 조절인자들의 mRNA 발현 양상은 각 질환의 진단에 기여할 수 있을 것으로 사료된다.

마우스 대식세포 RAW264.7에서 어성초와 야관문의 항염증 효과 (Anti-inflammatory Effects of Houttuynia cordata and Lespedeza cuneata on Lipopolysaccharide-stimulated RAW264.7 Cells)

  • 김정태;정정욱;박성익;이만효;노중희;손호용;김종식
    • 생명과학회지
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    • 제33권1호
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    • pp.73-81
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    • 2023
  • 본 연구에서는 어성초(Houttuynia cordata, HC) 와 야관문(Lespedeza cuneata, LC)의 열수 추출물과 메탄올 추출물의 순차적 유기용매 분획물을 제조하였다. LPS를 처리한 RAW264.7세포에서 HC와 LC의 열수 추출물과 메탄올 추출물의 유기용매 분획물의 항염증 활성을 연구하였다. 어성초와 야관문의 hexane, chloroform, ethyl acetate 분획물의 처리에 의해 농도의존적으로 nitric oxide (NO) 생산을 저해하였으며, iNOS의 발현도 감소되었다. 이전 연구에서 HC와 LC의 메탄올 추출물의 ethyl acetate 분획물의 플라보노이드 함량을 분석하였다. 분석된 플라보노이드 중 HC와 LC에 공통적으로 함유된 apigenin을 선택하여 추가실험을 진행하였다. Apigenin은 세포 생존율에 영향을 주지 않으면서 NO 생산을 저해하였으며, iNOS와 COX-2의 단백질 발현도 억제하였다. 또한, apigenin은 p38 MAPK와 JNK의 인산화를 억제함으로써 항염증 활성을 가지는 것으로 생각된다. Apigenin 처리에 의해 차별적으로 발현되는 유전자 발현을 확인하기 위하여 RNA-seq 분석을 수행하였다. 발현이 감소된 유전자 중 4개의 cytokine 유전자(IL-1α, IL-1β, IL-6, CSF2)의 발현 감소를 정량적 real-time PCR을 통해 확인하였다. 종합적으로, 본 연구결과는 어성초와 야관문은 항염증 활성을 가지고 있으며, apigenin이 두 약용 작물의 항염증 활성을 담당하는 중요한 성분 중의 하나가 될 수 있다는 것을 제시한다.

Differential Expression of PPARγ, FASN, and ACADM Genes in Various Adipose Tissues and Longissimus dorsi Muscle from Yanbian Yellow Cattle and Yan Yellow Cattle

  • Ji, Shuang;Yang, Runjun;Lu, Chunyan;Qiu, Zhengyan;Yan, Changguo;Zhao, Zhihui
    • Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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    • 제27권1호
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    • pp.10-18
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    • 2014
  • The objective of this study was to investigate the correlation between cattle breeds and deposit of adipose tissues in different positions and the gene expressions of peroxisome proliferator-activated receptor gamma ($PPAR{\gamma}$), fatty acid synthase (FASN), and Acyl-CoA dehydrogenase (ACADM), which are associated with lipid metabolism and are valuable for understanding the physiology in fat depot and meat quality. Yanbian yellow cattle and Yan yellow cattle reared under the same conditions display different fat proportions in the carcass. To understand this difference, the expression of $PPAR{\gamma}$, FASN, and ACADM in different adipose tissues and longissimus dorsi muscle (LD) in these two breeds were analyzed using the Real-time quantitative polymerase chain reaction method (qRT-PCR). The result showed that $PPAR{\gamma}$ gene expression was significantly higher in adipose tissue than in LD in both breeds. $PPAR{\gamma}$ expression was also higher in abdominal fat, in perirenal fat than in the subcutaneous fat (p<0.05) in Yanbian yellow cattle, and was significantly higher in subcutaneous fat in Yan yellow cattle than that in Yanbian yellow cattle. On the other hand, FASN mRNA expression levels in subcutaneous fat and abdominal fat in Yan yellow cattle were significantly higher than that in Yanbian yellow cattle. Interestingly, ACADM gene shows greater fold changes in LD than in adipose tissues in Yan yellow cattle. Furthermore, the expressions of these three genes in lung, colon, kidney, liver and heart of Yanbian yellow cattle and Yan yellow cattle were also investigated. The results showed that the highest expression levels of $PPAR{\gamma}$ and FASN genes were detected in the lung in both breeds. The expression of ACADM gene in kidney and liver were higher than that in other organs in Yanbian yellow cattle, the comparison was not statistically significant in Yan yellow cattle.

Distinct Genetic Variation of Helicobacter pylori cagA, vacA, oipA, and sabA Genes in Thai and Korean Dyspeptic Patients

  • Boonyanugomol, Wongwarut;Kongkasame, Worrarat;Palittapongarnpim, Prasit;Jung, Myunghwan;Shin, Min-Kyoung;Kang, Hyung-Lyun;Baik, Seung-Chul;Lee, Woo-Kon;Cho, Myung-Je
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제46권3호
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    • pp.261-268
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    • 2018
  • Differences in host ethnicities and geographical distributions may influence the genetic variation and pathogenesis of Helicobacter pylori strains, particularly with respect to those with a high risk of gastric cancer and in Asian Enigma regions. We simultaneously identified H. pylori virulence-associated genes involved in inflammation and cell damage in Thai and Korean dyspeptic patients. The virulence-associated gene cagA, cagA genotypes (East Asian and Western type cagA), vacA genotypes (s- and m-), oipA, and sabA were detected in Thai and Korean dyspeptic patients by polymerase chain reaction (PCR), real-time PCR, and DNA sequence analysis. Comparisons between the two regions showed that cagA, East Asian type cagA, and vacA s1/m1 in Korean dyspeptic patients occurred at rates of 100%, 86.67%, and 88.89%, respectively (p < 0.05). The oipA- and sabA-positive samples were significantly more predominant in the Korean population (95.56%, 91.11%) than in the Thai population (32%, 34%). DNA sequence analysis revealed differences in the patterns of cytosine-thymine dinucleotide repeats of oipA and sabA among the two populations of dyspeptic patients. Our results indicate that the H. pylori strains detected in the two regions were divergent, and strains colonizing the Korean dyspeptic patients may be more virulent than those in the Thai population. Our data may help explain H. pylori pathogenesis in Asian Enigma areas with a low gastric cancer incidence. However, other factors involving H. pylori infection in these two regions should be further analyzed.