• 생명과학회지
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• 제13권4호
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• pp.522-528
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• 2003

본 연구는 출아형 효모 Saccharomyces cerevisiae에서 자외선의 상해 시 이를 정상으로 회복시키는 절제회복 (excision repair) 유전자로 알려진 RADA4의 특성 규명을 위하여 균류 Coprinus cinereus에서 이와 유사한 유전자를 분리하였다. RAD4 유사 유전자를 분리하기 위하여 균류 C. cinereus의 염색체 DNA를 전기영동하여 분리한 다음 효모 RAD4 DNA를 probe로하여 이와 hybridization하였다. 이 결과 RAD4 유사 유전자는 3.2 kb의 insert DNA를 갖고 있었다. 또한 Southern hybridization으로 이 유사 유전자는 fungus C. cinereus의 염색체에 존재함을 확인하였다. 분리한 RAD4 유사 유전자의 전사체 크기는 2.5 kb 였으며, 자외선의 상해 시 전혀 'inducibility가 없음을 Northern hybridization으로 확인하였다. 또한 유사유전자 부분을 삭제하였을 때 이 부분이 없는 세포는 전혀 생존을 못하였다. 이 결과 분리한 RAD4 유사유전자는 세포의 생존에 관여함을 알 수 있었다.

• Animal cells and systems
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• 제6권4호
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• pp.311-315
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• 2002

The RAD4 gene is essential for nucleotide excision repair in Saccharomyces cerevisiae. It has been known that the deduced amino acid sequence of Rad4 protein contains three DNA-dependent ATPase/helicase motifs. To determine the biochemical activities and functional role of RAD4 the Rad4 protein was expressed and purified. Immunoblot analysis showed a specific band of 21 kDa, which was well-matched with the size of open reading frame of the RAD4 gene. The purified Rad4 protein had no detectable helicase activity. However, the protein could interact with double stranded oligonucleotides, as judged by mobility shift assay. This result suggests that the Rad4 protein is a DNA binding protein.

• 한국환경성돌연변이발암원학회지
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• 제17권1호
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• pp.1-6
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• 1997

The RAD4 gene of Saccharomyces cerevisiae is essential for the incision step of UV-induced excision repair. A yeast RAD4 gene has been previously isolated by functional complementation. In order to identify the RAD4 homologous gene from fungus Coprinus cinereus, we have constructed cosmid libraries from electrophoretically separated chromosomes of the C. cinereus. The 13 C. cinereus chromosomes were resolved by pulse-field gel electrophoresis, hybridized with S. cerevisiae RAD4 DNA, and then isolated homologous C. cinereus chromosome. The insert DNA of the RAD4 homolog was contained 3.2 kb. Here, we report the partial cloning and characterization of fungus C. cinereus homolog of yeast RAD4 gene. Southern blot analysis confirmed that C. cinereus contains the sequence homologous DNA to RAD4 gene and this gene exists as a single copy in C. cinereus genome. When total RNA isolated from C. cinereus cells was hybridized with the 1.2 kb PvuII DNA fragment of the S. cerevisiae RAD4 gene, a 2.5 kb of transcript was detected. The level of the transcript did not increase upon UV-irradiation, suggesting that the RAD4 homologous gene in C. cinereus is not UV-inducible.

• Journal of Life Science
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• 제10권2호
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• pp.50-54
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• 2000

The RAD4 gene of Saccharomyces cerevisiae is essential for the incision step of UV-induced excision repair. A yeast RAD4 gene has been previously isolated by functional complementation. In order to identify the RAD4 homologous gene from fungus Coprinus cinereus, we have constructed cosmid libraries from electrophoretically separated chromosomes of the C. cinereus. The 13 C. cinereus chromosomes were resolved by pulse-field gel electrophoresis, hybridized with S. cerevisiae RAD4 DNA, and then isolated homologous C. cinereus chromosome. Here, we report the cloning and characterization of fungus C. cinereus homolog of yeast RAD4 gene. Southern blot analysis confirmed that C. cinereus contains the sequence homologous DNA to RAD4 gene and this gene exists as a single copy in C. cinereus genome. When total RNA isolated from C. cinereus cells was hybridized with the 3.4 kb BglII DNA fragment of the S. cerevisiae RAD4 gene, a 2.5 kb of transcript was detected. The isolated gene encodes a protein of 810 amino acids.

• Radiation Oncology Journal
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• 제2권1호
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• pp.25-32
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• 1984

The pathological changes of stomach of the rat following 1,000 rad and 1,800 rad single exposure by Cobalt-60 has been made with 50 experimental rats. The dose of 1,000 rad and 1,800 rad single exposure were equivalent of biologic effect of 2,500 rad in 2 1/2 weeks and 6,000 rad in 6 weeks. Following single exposure, the groups of rat were terminated in 1, 2, 4, 8, 12 weeks intervals and the stomach were fixed to formalin solution immediatly after dissection. The pathological changes were as follows : 1. Following 1,000 rad single exposure, the stomach show only mild to moderate submucosal edema in 4,8,12 weeks group. 1 and 2 weeks group show no changes. 2. Following 1,800 rad single exposure, $32\%(8/25)$ of rats were dead by radiation effect and all other groups of stomach revealed variable pathological changes such as submucosal edema, squamous dysplasia, squamous papilloma as well as squamous cell carcinoma. 3. Optimal tolerance dose to the stomach was $4,500\~5,000$rad when irradiation given by supervoltage. The entire stomach was included within the irradiation field, the dose to the stomach should not exceed 6,000 rad. 4. In conclusion, the radiation injury to the stomach were more direct radiation effects to the gastric mucosa rather than secondary changes of radiation injured vessels.

• Molecular & Cellular Toxicology
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• 제4권4호
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• pp.338-347
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• 2008

Yeast RAD2, a yeast homolog of human XPG gene, is an essential element of nucleotide excision repair (NER), and its deletion confers UV sensitivity and NER deficiency. 6-Azauracil (6AU) sensitivity of certain rad2 mutants revealed that RAD2 has transcription elongation function. However, the fundamental mechanism by which the rad2 mutations confer 6AU sensitivity was not clearly elucidated yet. Using an insertional mutagenesis, PUF4 gene encoding a yeast pumilio protein was identified as a deletion suppressor of rad2${\Delta}$ 6AU sensitivity. Microarray analysis followed by confirmatory RT-qPCR disclosed that RAD2 and PUF4 regulated expression of HPT1 and URA3. Overexpression of HPT1 and URA3 rescued the 6AU sensitivity of rad2${\Delta}$ and puf4${\Delta}$ mutants. These results indicate that 6AU sensitivity of rad2 mutants is in part ascribed to impaired expression regulation of genes in the nucleotide metabolism. Based on the results, the possible connection between impaired transcription elongation function of RAD2/XPG and Cockayne syndrome via PUF4 is discussed.

• Radiation Oncology Journal
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• 제3권2호
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• pp.95-101
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• 1985

1979년 7월부터 1985년 3철까지 한양대학병원에서 자궁경암의 표준화된 방사선치료기준, 즉 전 골반의 외부방사선조사와 강내조사의 병용요법으로 112명의 환자를 치료하였다. 전원이 추적 가능하였고 $6\~75$개월의 추적기간에 평균은 31개월이었다. 2명이 선암이고 110명은 펀평상피 세포암이었고 $I_b$병기 9명$(8\%)$, $II_a$병기 14명$(12.5\%)$, $II_b$ 병기 50명$(44.6\%)$, III병기 33명 $(29.5\%)$, 그리고 IV병기는 6명 $(5.4\%)$이었다. 연령분포는 30대 10명$(8.9\%)$, 40대, 50대가 다같이 41명$(36.6\%)$씩으로 $73.2\%$이고 60대 이상이 19명 $(17\%)$이며 특수하게 20세미만이 1예 있었다. 방사선치료는 전 골반에 평행대항 조사야로 $180\~200rad$를 주 5회 $4,000\~4,200rad$ 조사하였고 중앙부 4cm를 차폐하고 $600\~l,000rad$를 자궁방결합조직에 추가 조사하였다. 강내조사는 Cs-137 소선원(20mg 라디움당량)을 자궁강내 $2\~3$개 질강내 2개를 TAO Applicator로 삽입하였고 $7\~12$일 간격으로 2회 시행하였다. 치료기간은 평균 52일간이고 $40\~65$일에 걸쳐서 시행되었다. A점에 조사한 방사선량은 $6,820\~10,500rad$로 평균 8,388rad이고 B점에는 $4,850\~6,899rad$로 평균 5,898rad이었다. 생명표 5년 생존율(actuarial 5year survival rate)은 전체로 $61.8\%$이고, $I_b$병기에서 $84.6\%$, $II_a$병기는 $77.8\%$, $II_b$병기는 $56.7\%$, III병기는 $60.6\%$, 그리고 IV 병기는 $33.3\%$이었다. A점의 방사선량이 8,000rad 이상일 때는 7/18$(38.9\%)$의 실패율이었고 이에 비해서 8,000rad이상일 때는 25/94$(26.5\%)$의 실패율이었다. 또 B점 선량으로 보면 6,000rad이하에서 20/63$(34.9\%)$의 실패율에 비하여 6,000rad이상일 때는 10/49$(20.4\%)$의 실패율이었다. 연령 벨로는 $40\~49$세에서 실패율(14/41 $24.1\%$)이 많았다. 본 성적으로 보아서 생존율은 여러 저자들과 큰 차이가 없음을 알 수 있었고 A점 선량은 8,000rad 이상, B점은 6,000rad이상이 조사되어야 적정선량이 됨을 시사해 주고 있다.

• 미생물학회지
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• 제50권2호
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• pp.95-100
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• 2014

Hrq1은 곰팡이 유전체에서 생물정보분석에 의해 발견된 새로운 RecQ helicase이다. 이 단백질은 인간의 RECQL4와 가장 상동성이 높으며 최근의 유전학적 생화학적 연구를 통해서 유전체 안정성을 유지하는데 어떤 역할을 할 것으로 예상되었다. 본 연구에서는 RECQL4와 상호작용하는 것으로 알려진 인간 유전자들과 상동성이 있는 효모 유전자들이 Hrq1과 상호작용하는지를 yeast two-hybrid assay를 이용하여 조사하였다. 총 11개의 유전자를 조사한 결과, nucleotide excision repair (NER) 인자 중의 하나인 Rad14이 Hrq1과 상호작용하는 것을 발견하였다. 또한 정제한 단백질을 이용한 pull-down assay로 Hrq1과 Rad14 사이의 직접적인 상호작용을 확인하였다. Hrq1과 Rad14 사이의 yeast two-hybrid 상호작용은 4-nitroquinoline-1-oxide에 의한 DNA 손상으로 더욱 증가하였으며, 이러한 상호작용의 증가는 또 다른 NER 인자인 Rad4에 의존적이었다. 이러한 결과들은 Hrq1이 Rad14과의 상호작용을 통하여 NER 과정에 어떤 역할을 할 가능성을 제시하고 있다.

• Radiation Oncology Journal
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• 제4권1호
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• pp.1-13
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• 1986

방사선 조사와 adriamycin 병용투여가 마우스 소장 소낭선세포의 방사선 감수성에 미치는 영향을 관찰하고 adriamycin의 방사선 증강효과를 측정하기 위하여 $C_3H$계 마우스 120마리를 cobalt-60원 격치료기로 전복부에 조사하였다. 방사선 단독조사군은 1,000rad에서 1,600rad까지, adriamycin병용투여군은 900rad에서 1,400rad까지 각각 100rad씩 증강시켜 조사하였고 adriamycin 10mg/kg을 조사 2시간전과 4시간후에 각각 복강내에 주사하였다. 실험군은 84시간 후에 공장을 절제하고 소낭선 측정법을 이용하여 세포생존곡선을 작성하므로써 adriamycin 병용투여시의 조사효과를 측정하였으며, 주사전자현미경(SEM)으로 소장융모의 형태변화를 관찰하여 다음과 같은 효과를 얻었다. 1) 조사군의 환상면당 소낭선수는 평균 $130{\pm}16$개이었다. 2) 방사선 단독조사 군에서 소낭선세포의 평균 치사선량은 160rad이었으며, 방사선조사 2시간과 4시간후 adriamycin 병용투여군은 모두 170rad이었다. 3) 방사선조사 2시간전과 4시간 후에 adriamycin 투여군의 dose effect factor(DEF)는 1.19와 1.26이었다. 4) 주사전자현미경소견에서 조사선량 증가에 따라 소장융모의 손상이 각각 다른 형태로 뚜렷이 변하였으며, conical collapse형태로 면한 것은 단독조사군의 1,200rad와 adriamycin병용투여군의 1,000rad에서 각각 관찰되었다. 이상의 실험결과로 보아 마우스 소장에서 방사선과 adriamycin 병용투여시 $19{\sim}26%$의 유의한 조사효과 상승이 관찰되었으므로 향후 복부나 골반부에 방사선조사와 항암제를 병용하는 경우에는 방사선 감수성이 높은 장기인 소장에 대한 손상을 고려하여 임상에서 암의 방사선치료에 깊은 배려가 필요하다고 사료된다.

• Radiation Oncology Journal
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• 제3권1호
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• pp.1-8
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• 1985

To determine the dose·survival and repair characteristics of the jejunal crypt cells, experimental study was carried out using total 70 mice. Single or split irradiations of 1,100 to 2,200 rad were delivered to whole bodies of $C_{57}$ BL mice, using a cesium 137 animal irradiator and those mice were sacrificed after 90 hours. The number of regenerating crypts per jejunal circumference was counted by a jejunal crypt cell assay technique and dose·response curve was measured. The results were as follows : 1. The average number of jejunal crypts per circumference in control group was 140. In a single irradiation group, the number of regenerated jejunal crypts was, 125, 56, 2 in each subgroup of 1,100 rad, 1,400 rad and 1,800 rad respectively. In split irraiation group, it was 105,44,2 in each subgroup of 1,400rad 1,800rad and 2,200rad respectively. 2. Mean lethal dose of mouse jejunal crypt cell was 167 and 169 rad respectively in a single and split irradiation. 3. Repair dose of sublethal damage was 280 rad. 4. Sublethal damage was completely repaired within 4 hours between the split dose of irradiation.