• 한국발생생물학회:학술대회논문집
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• 한국발생생물학회 2003년도 제3회 국제심포지움 및 학술대회
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• pp.75-75
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• 2003

Transition of the resting primordial follicle to the growing primary follicle is a critical process for female reproduction, but its mechanism is poorly understood. The present study was conducted to investigate gene expression profile at the primordial-primary follicle transition process. We isolated total RNA of female mouse ovary at day1 (contains only primordial follicles) and day5 (contains primordial and primary follicles) and synthesized cDNA using annealing control primers (ACP; Seegene, Inc., Seoul, Korea). ACP provides annealing specificity and sensitivity to the template and allows to identify only authentic differentially expressed genes (DEGs). We used total 80 ACPs for PCR, observed PCR products on 2% agarose gel, cloned 42 DEGs using TOPO TA cloning vector, sequenced, and analyzed by BLAST search. Sequences of 34 clones significantly matched database entries while 4 clones were novel and 4 clones were EST. Two of 34 genes were specifically expressed only in day 5 ovaries (Sui1-rs1, Apg3p/Aut1p-like), and rest of 32 genes were expressed in both stages but were differential in amount. Differential expression was confirmed using semiquantitative RT-PCR, and there was no false positive. Anx11 and Pepp2-pending were highly expressed genes in day1-, while BPOZ, Ches1, Kcmf1, NHE3, Nid2, Ninj1, SENP3 and Survivin were highly expressed genes in day5-ovary. List of genes would provide insight for further study of mechanism regulating primordial-primary follicle transition.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제6권2호
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• pp.89-96
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• 2002

성장을 멈추고 있는 원시난포(primordial follicle)에서 난포발달이 개시되어 1차난포(primary follicle)로 발달하는 조절기전은 잘 알려져 있지 않다. 이 초기 난포발달 과정에 관여하는 유전자를 알아내기 위해 suppression subtractive hybridization(SSH)을 사용하였다. 생후 1일과 5일째의 생쥐 난소로부터 얻은 cDNA로 forward와 reverse subtraction을 수행하여 각각 day1과 day5-subtracted cDNA library를 얻었다. 이를 cloning한 결과, 357개 clone의 염기 서열을 BLAST와 RIKEN을 이용해 분석하여 27개의 clone은 novel gene으로 330개의 clone은 데이터 베이스와 일치함을 알았다. 이 중에 기능이 알려진 유전자는 day1에서는 42종, day5에서는 47종이 각각 차이 나게 발현하고 있는 것으로 나타났다. Day1-subtracted cDNA library에서는 GDF8, lats2, septin2, wee1등 4개 유전자를, day5-subtracted cDNA library에서는 HSP84, laminin2, MATER, MTi7, PTP 및 wrn등 6개 유전자를 선택하여 LCM-RT-PCR방법으로 실제로 원시난포와 1차난포에서 차이 나게 발현되고 있는 것을 확인하였다. 본 연구에서 얻은 유전자 발현 양상의 결과는 앞으로 생쥐뿐만 아니라 사람 난소에서 primordial-primary follicle transition에 관여하는 기전을 연구하는데 중요한 정보를 제공할 수 있을 것으로 사료된다.

• 한국발생생물학회지:발생과생식
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• 제7권2호
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• pp.127-136
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• 2003

본 연구에서는 이러한 초기 난포 발달 과정 중 원시난포-1차 난포 변화과정 시기에 발현하는 유전자를 알아보고 자 수행하였다. 원시난포로만 이루어져 있는 생쥐의 생후 1일자 난소와 원시난포 및 1차 난포로만 이루어져 있는 5일자 난소의 RNA와 총 80개의 annealing control primer(ACP) primer를 사용하여 PCR을 수행하여 서로 다르게 발현하는 유전자 (differentially expressed genes; DEG) 41개를 찾아내었다. 이들 중 33개는 BLAST에 등록되어 있는 유전자와 일치하였고 4개는 novel sequence였으며 나머지 4개의 유전자는 EST이었다. 실험결과, 1일자 난소에서 더 많이 발현되는 유전자를 9개, 5일자 난소에서 더 많이 발현되는 유전자 31개, 5일자 난소에서만 특이적으로 발현하는 유전자를 1개를 얻었다. 1일자 난소에서 높게 발현하는 Anx11과 Pepp2-pending, 반면에 5일자 난소는 Apg3/Autlp-like, BPOZ, Ches1, Kcmf1, NHE3, Nid2, Ninj1, SENP3, Suil-rsl, TIAP/m-survivin등의 유전자를 선택하여 semi-quantitative RT-PCR을 수행하여 이들 중에는 false positive 없음을 확인하였다. In situ hybridization을 수행하여 대부분의 유전자가 원시난포의 난자에서 발현하다가 1차 난포 이상의 발달단계에서는 난자 내 발현이 사라지면서 오히려 과립세포에서 높게 발현됨을 확인하였다. 또한 laser capture microdissection을 이용하여 원시난포와 1차 난포를 각각 오려내고, real-time PCR을 이용하여 실제로 BPOZ와 TIAP/m-survivin의 발현이 1차 난포에서 각각4.5배, 3.4배 높은 것을 다시 확인하였다. 본 연구결과로 얻어진 유전자 목록은 앞으로 초기 난포발달, 특히 원시난포-1차 난포 변화과정에 관여하고 있는 분자생물학적 기전을 연구하는데 기여하게 될 것이다

• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 대한불임학회 2004년도 제47차 추계학술대회
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• pp.56-57
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• 2004

• 대한임상검사과학회지
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• 제49권1호
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• pp.40-47
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• 2017

난포 내 난자를 둘러싸고 있는 과립세포는 난자를 위한 성장상태 및 난포의 발달에 중요하다. Solute carrier family 유전자는 스테로이드 호르몬, 다양한 약물, 몇몇 다른 기질을 유입시킨다. 연구에서 획득한 서로 다르게 발현하는 유전자들 (DEGs) 중 일부를 in situ hybridization을 통해 분석하였다. 분석한 결과 SLC23A3과 SLC39A10이 난소에서 높게 발현하였다. SLC39A10 유전자는 원시난포에서 높게 발현하였고, SLC23A3은 일차, 이차 난포에서 높게 발현하였다. 특히 성장하는 난포의 과립막 세포에서 발현하였다. SLC23A3과 SLC39A10은 원시난포와 일차난포에서 다르게 발현하는 것은 각 난포의 분리를 통해 좀 더 확인해야 할 것이다. 본 연구에서는 유전자 발현 정보를 통해 원시난포의 개시와 성장을 위한 전환에 관여하는 기전을 이해하는데 기초정보와 난포발달 촉진을 위한 난소기능부전의 기전을 규명하는데 정보를 제공할 것으로 기대된다.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2002년도 국제심포지엄
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• pp.98-98
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• 2002

Recruitment of primordial follicles(PMF) is crucial for female fertility. however, factors and mechanisms that regulate this process is poorly understood. The present study was conducted to obtain an inclusive view of the gene expression and to identify novel factors and their pathways of regulating PMF arrest and/or growth initiation. Ovaries from one-day neonatal(consists of oocyte and PMF) and five-day old(consists of PMF and primary follicles, PRIF) mice were collected, either total RNA or mRNA was isolated, and suppression subtractive hybridization(SSH) was used to isolate and clone genes that differentially expressed in day 1 and day 5 ovaries. Confirmation that some of these genes are differentially expressed in PMF and/or in PRIF was accomplished by using laser captured microdissection(LCM), RT-PCR. in situ hybridization(ISH) and/or immunohistochemistry(IHC). In toto, 357 clones were sequenced and analyzed by BLAST and RIKEN program. Sequences of 330 clones significantly matched database entries while 27 clones were novel. Forty-two and 47 different genes were identified as differentially expressed in day 1 and day 5 ovaries, respectively, while 7 genes were expressed in both stages of ovaries. Day 5-subtracted library included several genes known as markers far growing follicles, such as ZP2, MATER, and fetuin. Among the genes with assigned functions, 23.8% was associated with cell cycle/apoptosis regulation, 7.1% with cellular structure, 11.9% with metabolism, 26.2% with signal transduction, and 31.0% with gene/protein expression in day 1; while 10.6%, 17.0%, 23.5%, 25.5%, and 23.4% in day 5, respectively. Genes such as GDF-8, Lats2, Septin2, and Weel were the highly expressed genes in PMF, while HSP84, Laminin2, MATER, MTi7, PTP, and Wrn were highly expressed genes in PRIF. We have successfully discovered list of genes expressed in day 1 and day 5 ovaries and confirmed that some of them are differentially expressed in PMF and/or PRIF. Gene expression profile from the present study would provide insight for the future study on the mechanism(s) involved in primordial-primary follicular transition. This work was Supported by Korean Health 21 RND Project, Ministry of Health and Welfare, Korea (01-PJ10-PG6-01GN13-0002).

• 대한임상검사과학회지
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• 제40권1호
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• pp.31-40
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• 2008

Despite of the importance of the primordial follicle (PMF) recruitment, factors and mechanisms for process are poorly understood. To evaluate expression and role of the follicular transition from PMF to PMF/primary follicles (PMIF) in the present study, we evaluated expression of lats1, lats2, cyclin A1, and cyclin A2 mRNA and protein, and elucidated and role of lats1-cyclin A in the follicular transition from PMF to PRIF. To analysis of differential expression in PMF and PMIF, each stage follicles were collected by day1 and day5 of immuno-compromised rats (ICR) and analyzed by real-time PCR for the genes. For localization of mRNAs and proteins of the genes, in situ hybridization and immunohistochemistry were performed. We confirmed that the lats1, lats2, cyclin A1, and cyclin A2 mRNA were more expressed in PMF than PMIF. Localization of the four genes expression were observed in nuclei of oocytes from the arrested primordial, and in the surrounding granulosa cells of the growing follicles. The mRNA expressions were gradually decreased with follicular development. From immunohistochemistry studies, Cyclin A1 protein expression were observed in oocyte cytoplasmas of early stage follicles, while observed in granulose cells and oocyte nucleoli during growing follicles. This study suggested that the presence of lats gene family might perform negatively regulation of cell proliferation by modulation of the CDC2/Cyclin A complex activity. lats-cyclin A genes in oocytes of the early stage follicles might play a role in the meiotic cell cycle arrest of the primary oocytes at the primordial follicle stage as well as the follicular growth.

• 대한생식의학회:학술대회논문집
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• 대한불임학회 2002년도 제43차 추계학술대회
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• pp.87.1-87.1
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• 2002

• 대한임상검사과학회지
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• 제48권1호
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• pp.8-14
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• 2016

포유류의 난소에서 과립막 세포)는 난포내 난자를 둘러싸고 난자 뿐만 아니라 난포의 발달에 필요한 상태를 만드는데 중요한 역할을 한다, 그리고 협막세포 등의 성장과 분화를 조절하는 매우 복잡한 과정이다. 본 연구의 목적은 성장이 정지되어 있는 원시난포에서 성장이 개시되는 1차난포, 2차난포로 전환하는 동안에 관여하여 발현하는 유전자를 조사하는 것이다. 본 연구에서는 5일자, 12일자 난소로부터 총 리보핵산을 추출하여 동량의 RNA로부터 cDNA를 합성하여 ACP-PCR을 수행하였다. 서로 다르게 발현하는 유전자들 (DEGs)을 클로닝과 BLAST를 통한 염기서열 분석하였다. Anxa11과 Plekha5는 5일자 난소에서 높게 나타났으며 특히 난자핵과 세포질에서 높게 발현하였다. 이에 반해 과립막 세포에서는 난포발달단계에 따라 증가하는 양상을 보였다. 본 연구에서 성공적으로 5일, 12일 난소에서 서로 다르게 발현하는 발현유전자 목록을 일부 찾아 확인하였다. 이들은 막융합을 통해 난소의 난포발달과정에서 시간적-공간적인 조절 기전에 의해 이루어 질 것으로 보인다. 이 유전자 발현 정보는 원시난포의 개시와 성장을 위한 전환에 관여하는 기전을 이해하는 기초정보와 난소기능부전의 기전을 규명하는데 정보를 제공할 것으로 기대된다.

• 한국수정란이식학회:학술대회논문집
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• 한국수정란이식학회 2003년도 제3회 발생공학 국제심포지움 및 학술대회
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• pp.75-75
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• 2003