Technologies on preimplantation porcine embryos have been developed quickly and significantly. Successful development of systems for culture of porcine zygotes to the blastocyst stage has made it possible to utilize follicular oocytes for in vitro production of embryos and thus stimulated research on various embryo technologies. Recent technological development of embryo cryopreservation, separation of X- and Y-bearing spermatozoa and non-surgical embryo transfer has also made it easy to utilize in vivo- and in vitro-produced embryos for artificial manipulation to produce clones and transgenic pigs. Further progress in overcoming various problems associated with each embryo technology will result in acceptable efficiency to utilize porcine embryos with a high or increased quality. Combining these technologies will accelerate further expansion of the swine industry not only for meat production but also for the production of therapeutic recombinant proteins and xonografts.
Sills, E. Scott;Obregon-Tito, Alexandra J.;Gao, Harry;McWilliams, Thomas K.;Gordon, Anthony T.;Adams, Catharine A.;Slim, Rima
Clinical and Experimental Reproductive Medicine
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v.44
no.1
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pp.40-46
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2017
Objective: To describe in vitro development of human embryos derived from an individual with a homozygous pathogenic variant in NLRP7 (19q13.42) and recurrent hydatidiform mole (HM), an autosomal recessive condition thought to occur secondary to an oocyte defect. Methods: A patient with five consecutive HM pregnancies was genomically evaluated via next generation sequencing followed by controlled ovarian hyperstimulation, in vitro fertilization (IVF) with intracytoplasmic sperm injection, embryo culture, and preimplantation genetic screening. Findings in NLRP7 were recorded and embryo culture and biopsy data were tabulated as a function of parental origin for any identified ploidy error. Results: The patient was found to have a pathogenic variant in NLRP7 (c.2810+2T>G) in a homozygous state. Fifteen oocytes were retrieved and 10 embryos were available after fertilization via intracytoplasmic sperm injection. Developmental arrest was noted for all 10 embryos after 144 hours in culture, thus no transfer was possible. These non-viable embryos were evaluated by karyomapping and all were diploid biparental; two were euploid and eight had various aneuploidies all of maternal origin. Conclusion: This is the first report of early human embryo development from a patient with any NLRP7 mutation. The pathogenic variant identified here resulted in global developmental arrest at or before blastocyst stage. Standard IVF should therefore be discouraged for such patients, who instead need to consider oocyte (or embryo) donation with IVF as preferred clinical methods to treat infertility.
Kim, Eun-Kuk;Kim, Mi-Yeon;Son, Sun-Mi;Kim, Dong-Won
Journal of Embryo Transfer
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v.23
no.1
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pp.19-24
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2008
The purpose of this study was to compare the efficiency of slow freezing with that of vitrification method for the cryopreservation of human embryos. Human embryos were derived from in vitro fertilization (IVF) or intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and the mixed solution of propanedial (1.5, 1.0, 0.5M PROH) and sucrose (0.1M), ethylene glycol (7.5, 15%), dimethyl sulfoxide (7.5, 15% DMSO), sucrose (0.5, 1.0M) and SPS (Serum Protein Substitute) was used for a cryoprotectant for slow freezing and vitrification solution, respectively. Rates of recovery after thawing, morphological normality, post-thaw viability, arrest, morphological abnormality and preimplantation development were compared between two protocols. After freezing-thawing, recovery and survial rate of slow freezing was (88.6% and 73.4%), whereas vitrification was (99.2% and 96.2%) (p<0.05). The arrest rate of slow freezing was significantly lower compared with those of vitrification(8.7% vs 29.9%) (p<0.05). Preimplantation development to the 2-cell (83.8% vs 67.7%), 4-cell (69.0% vs 47.2%) and 8-cell (62.4% vs 37.8%) stages 24, 48 and 72 h after thawing, respectively, were higher in the slow freezing than the vitrification. After slow freezing and vitrification of human embryo at 2-8cell stage, the rate of recovery rate, survival rate and partial damage rate were 92.0% vs 100%, 80.4% vs 96.2% and 52.2% vs 19.0%, respectively. And partial damage rate was significantly lower than those of slow freezing method (p<0.05). These results demonstrate that a slow freezing using PROH is more efficient than a vitrification for cryopreserving the human zygotes, although the vitrification yielded better recovery, survival and partial damage of frozen-thawed 2-8 cell stage embryos than slow freezing method.
Objective: Platelet-rich plasma (PRP) therapy has received a considerable attention as an adjunct to fertility treatments, especially in women with very low ovarian reserve and premature ovarian insufficiency. Although recent studies have demonstrated that PRP led to improvements in folliculogenesis and biomarkers of ovarian reserve, the effect of intraovarian PRP administration on embryo genetics has not been studied. Methods: We report a pilot study of patients who had preimplantation genetic testing for aneuploidy (PGT-A) before and then within 3 months following PRP administration. Twelve infertile women with at least one prior failed in vitro fertilization (IVF) cycle underwent ovarian stimulation (cycle 1) with a gentle stimulation protocol and PGT-A performed at the blastocyst stage. Following cycle 1, autologous intraovarian PRP administration was performed. Within 3 months following PRP administration, the patients underwent cycle 2 and produced blastocysts for PGT-A. The percentage of euploid embryos between both cycles was compared. Results: The mean age of all participants was 40.08±1.46 years, and their mean body mass index was 26.18±1.18 kg/m2. The number of good-quality embryos formed at the blastocyst stage was similar between cycle 1 and cycle 2 (3.08±0.88 vs. 2.17±0.49, respectively; p=0.11). Among all patients in cycle 1, 3 of 37 embryos were euploid (8.11%) while in cycle 2, 11 out of 28 embryos were euploid (39.28%, p=0.002). Three clinical pregnancies were noted among this patient group. Conclusion: This novel study is the first to present an improvement in the embryo euploidy rate following intraovarian PRP application in infertile women with prior failed IVF cycles. The growth factors present in PRP may exhibit a local paracrine effect that could improve meiotic aberrations in human oocytes and thus improve euploidy rates. Whether PRP improves live birth rates and lowers miscarriage rates remains to be determined in large trials.
In the bovine embryo transfer industry, sexing preimplantation embryos is an important management tool. Several methods for bovine embryo sexing utilizing polymerase chain reaction (PCR) have been developed. However, they were not popularized because the methods requiretechnical skills and expensive instruments, and are time consuming. PCR also has the risk of false positives due to DNA contamination during the electrophoresis. (omitted)
Preimplantation genetic diagnosis (PGD) is gradually widely used in prevention of gene diseases and chromosomal abnormalities. Much improvement has been achieved in biopsy technique and molecular diagnosis. Blastocyst biopsy can increase diagnostic accuracy and reduce allele dropout. It is cost-effective and currently plays an important role. Whole genome amplification permits subsequent individual detection of multiple gene loci and screening all 23 pairs of chromosomes. For PGD of chromosomal translocation, fluorescence $in-situ$ hybridization (FISH) is traditionally used, but with technical difficulty. Array comparative genomic hybridization (CGH) can detect translocation and 23 pairs of chromosomes that may replace FISH. Single nucleotide polymorphisms array with haplotyping can further distinguish between normal chromosomes and balanced translocation. PGD may shorten time to conceive and reduce miscarriage for patients with chromosomal translocation. PGD has a potential value for mitochondrial diseases. Preimplantation genetic haplotyping has been applied for unknown mutation sites of single gene disease. Preimplantation genetic screening (PGS) using limited FISH probes in the cleavage-stage embryo did not increase live birth rates for patients with advanced maternal age, unexplained recurrent abortions, and repeated implantation failure. Polar body and blastocyst biopsy may circumvent the problem of mosaicism. PGS using blastocyst biopsy and array CGH is encouraging and merit further studies. Cryopreservation of biopsied blastocysts instead of fresh transfer permits sufficient time for transportation and genetic analysis. Cryopreservation of embryos may avoid ovarian hyperstimulation syndrome and possible suboptimal endometrium.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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