남해안에서 다량 생산되고 있는 김(Porphyra yezoensis)의 생리활성 물질은 porphyran을 분리 추출한 후, 흰쥐에서 고지혈증 및 고 콜레스테롤혈증을 유발시켜 간장의 항산화 효소활성 및 면역능을 측정하였다. 간의 효소활성 측정을 위해 Sprague-Dawley계 흰쥐를 9마리씩 5군으로 나누어 1군은 정상군, 2군은 대조군(고지혈증 유발군), 3, 4 및 5군은 porphyran 급이군으로서 대조군에 porphyran을 각각 1%, 5% 및 10%의 비율로 사료에 첨가하여 4주간 사육하였다. 면역능은 Balb/c female mouse를 이용하여 3마리씩 4군으로 대조군 및 porphyran 1%, 2% 및 5%로 조제된 시료를 실험동물에게 2일에 1회 1mL씩 복강 주사를 연속적으로 20일간 투여한 후 비교하였다. 혈청중의 alanine aminotransferase(ALT), aspartate aminotransferase(AST), alkaline phosphatase(ALP) 및 lactic dehydrogenase(LDH) 활성은 대조군에 비해 porphyran 급이군에서 낮았으며, porphyran의 급이 수준이 증가할수록 대조군에 비해 유의하게 낮은 경향을 보였다. 간장의 superoxide dismutase와 catalase활성은 정상군에 비하여 대조군이 유의하게 높았으나, 대조군에 비해 porphyran 급이군에서는 낮았으며, 특히 10% porphyran 급이군에서는 정상군 수준으로 유의하게 감소되었다. TBARS 역시 대조군에 비해 porphyran 급이군 모두 유의하게 감소하였으며, 정상군 수준이하로 감소되었다. Interleukin-1농도는 porphyran 2% 및 5%를 투여한 흰쥐의 혈청에서 정상군보다 각각 26.81%, 77.95%의 증가를 나타내었으나, Interleukin-2는 감소하였다. 본 연구 결과에서 porphyran 급이는 고지혈증을 유발한 흰쥐에서 과산화물 농도를 저하시켜 항산화 효소활성을 낮추었으며, 면역능에서 일정한 현상은 나타나지 않았다.
본 연구는 김에서 추출한 porphyran을 음료로 이용하여 Sprague-Dawley계 흰쥐를 5군으로 나누어 정상식이에 물, 고콜레스테롤 식이에 물, 고콜레스테롤 식이에 1, 2, $3\%$ porphyran 음료를 4주간 급여하여 혈액과 간중의 지방과 콜레스테롤 함량을 측정한 결과는 다음과 같다. 혈청중 중성지방과 총콜레스테롤 함량은 정상군에 비해 대조군에서 높게 나타났으며, porphyran 음료군은 대조군보다 유의하게 낮았으며, 이는 섭취수준이 높을수록 더 낮아지는 경향을 나타냈다. 혈청중 HDL-콜레스테롤 함량은 대조군에서 가장 낮게 나타났으나 porphyran 음료 섭취수준이 높아질수록 높아지는 경향을 보였다. 간중의 중성지방과 총콜레스테롤 함량 역시 대조군에 비해 porphyran음료 섭취수준이 높을수록 유의하게 낮은 경향을 나타냈다. 이들 결과로 볼 때 고 콜레스테롤 식이를 섭취시킨 흰쥐에서 김에서 추출한 porphyran 을 음료의 형태로 섭취 시 체내 중성지방과 콜레스테롤을 낮추어 지방개선의 효과가 있음을 알 수 있었다.
김 가공 후 발생되는 자투리 김으로부터 porphyran을 추출(13.9% 수율)하고, 이를 청국장에 첨가하여 porphyran-청국장을 제조하고 이의 항암활성을 조사하였다. Crude porphyran의 암세포에 대한 증식억제효과는 AGS와 HT-29에서 모두 농도가 증가할수록 농도 의존적으로 높은 억제율을 나타내었다. Crude porphyran의 정상세포 BJ에 대한 세포 독성은 거의 없는 것으로 관찰되었으며 0.25 mg/mL의 농도까지는 농도 의존적으로 세포성장효과를 보였다. Bacillus subtilis DJI으로 제조한 청국장의 물 추출물과 메탄올 추출물의 세포증식에 미치는 효과를 살펴보았다. 정상세포 BJ에 대해 청국장 물 추출물의 경우 0.5 mg/mL의 농도에서는 최고 153%의 생존율을 나타냈으며, 메탄올 추출물의 경우 동일 농도에서 140%의 생존율을 보여 청국장이 정상세포에 대해 세포성장효과가 있는 것으로 관찰되었다. Porphyran-청국장의 정상세포 BJ에 대한 세포독성을 관찰한 결과 물, 메탄올 추출물 모두 독성이 없었으며, 물 추출물의 경우 1.0 mg/mL 농도 처리 시 160%, 메탄올 추출물의 경우 0.25 mg/mL에서 최대 127%의 생존율을 보이므로 porphyran-청국장이 정상세포에 대해 세포독성이 없는 것으로 관찰되었다. 청국장 추출물과 porphyran-청국장 추출물의 암세포 증식 억제효과를 농도 1.0 mg/mL 구간에서 비교해보았을때 porphyran을 첨가하지 않은 청국장 물 추출물에서 최고 17%, 메탄올 추출물은 24%의 AGS 세포증식억제효과를 나타내는 것에 비해, porphyran-청국장의 물 추출물과 메탄올 추출물은 최고 23%와 38%의 세포증식 억제효과를 각각 나타내었다. 장암세포 HT-29에 대해서는 porphyran을 첨가하지 않은 청국장 물 추출물에서 19%, 메탄올 추출물은 27%의 세포증식억제효과를 나타내는 것에 비해 porphyran-청국장의 물 추출물과 메탄올 추출물은 최고 27%, 32%를 각각 나타내었다. 이로부터 청국장과 porphyran-청국장의 물 추출물보다 메탄올 추출물이 더 높은 항암활성을 나타내며, 청국장보다 porphyran-청국장이 $1.2{\sim}1.5$배 더 높은 암세포 성장 억제율을 나타냄을 알 수 있었다. 본 실험에서 김으로 부터 유용한 기능을 가지고 있는 porhyran을 추출하여 항암 활성 기능을 가지는 porphyran-청국장을 제조하여 그 우수성을 확인하였다. 앞으로 이러한 기능성 식품을 널리 이용하여 해조가공산업에 기여하고 부가가치를 향상시켜 새로운 소비를 창출할 수 있을 것으로 기대된다.
김(Porphyra yezoensis)의 생리활성 물질인 porphyran을 분리 추출한 후, Sprague-Dawley계 흰쥐에 4주간 급여한 후의 혈액과 간의 지질농도와 간의 조직학적 변화를 관찰한 결과는 다음과 같다. 혈청의 중성지질, 총 콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤은 정상군에 비해 대조군에서 중성지질, 총콜레스테롤 및 LDL-콜레스테롤함량이 높게 나타났다. porphyran 1%, 5% 및 10% 급이에서 첨가량이 증가할수록 혈청중의 중성지질, 총콜레스테롤, LDL-콜레스테롤함량은 유의적으로 감소한 반면, HDL-콜레스테롤함량은 증가하였다. 간 조직의 현미경학적인 관찰 결과 정상군에 비해 대조군에서 수많은 지방입자가 세포내에 침착되어 있었으며, porphyran 1% 급이군에서도 유사한 현상을 나타내었다. 그러나 porphyran 5% 및 10% 급이군에서는 점차 지방 입자가 감소되었음을 확인할 수 있었으며, 특히 10% porphyran 급이군에서는 정상군과 유사한 경향을 나타내 porphyran의 급여수준이 높을수록 간의 지방침착이 감소됨을 알 수 있었다. 이러한 결과로 볼 때 고지혈증을 유발시킨 흰쥐의 식이에 김의 추출물인 porphyran의 첨가는 지방개선의 효과가 있음을 알 수 있었다.
건조김과 변색김의 탄수화물과 지방 및 회분함량은 거의 동일한 함량을 나타냈으나 단백질함량은 건조김이 더 높게 나타났다. 김의 chlorophyll과 carotenoids 색소는 95% 에탄올 농도에서 그 추출성이 크게 증가하는 경향을 나타냈으며, 변색김 보다 건조김에서 그 함량이 총 chlorophyll은 1.5배, 총 carotenoids는 10배정도 더 높게 나타났다. 건조김과 변색김의 비타민 C 함량은 건조김은 35.9 mg%, 변색김은 21.4 mg%를 나타내, 건조김이 변색 김보다 높게 나타났다. 총당은 건조김이 15.6%, 변색김이 15.2%를 나타내 거의 동일한 함량이 존재하였다. Crude porphyran의 함량은 건조김이 12.5%, 변색김이 12.3%를 나타내 건조김과 변색김으로부터 crude porphyran의 추출율은 거의 같은 수준으로 나타났다. 건조김과 변색김으로부터 얻어진 porphyran의 화학적 조성을 비교해 보면 crude porphyran의 총당 함량은 건조김 porphyran이 64.5%, 변색김 porphyran은 63.7%를 나타내어 각각의 crude porphyran의 총당은 거의 비슷한 함량임을 나타냈다. 황산기 함량은 총당 중에 황산기의 함량이 건조김 porphyran은 17.6%, 변색김은 16.9%을 나타내었고, 3,6-anhydrogalactose은 건조김 porphyran이 18.8%, 변색김 porphyran이 18.1%를 나타내어 거의 같은 수준의 화학조성을 갖고 있어 변색김으로부터도 포피란의 추출이 가능한 것으로 나타났다.
The purpose of this study was to process extraction and separation for polyglucose porpyran from pophyra yezoensis as high yield. The acidic porphyran solution was extracted with 0.1~1N of ${\alpha},{\beta}$-dichloromaleic acid or ${\alpha}$-chloromaleic acid of 2% solution as organic acid instead of inorganic acid at $60^{\circ}C$ and then porphyran was collection of high yield to acidic solution and it was neutralization treated with 0.1N of $d-Ca(OH)_2$ solution and the mixture was conversion to porphyran salt form and treated with a shell powder of ouster and then added of ethanol as precipitator. It recovery porphyran contained of violet purple laver coloring matter was obtained as a crystalline and used for the next step without future purification to prepare of porphyran laver jam. so, The resulting porphyran and porphyran jam was characterized by it component and physical properties.
In this study, we isolated porphyran was isolated from the red seaweed Porphyra yezoensis and assessed in terms of in vitro anti-proliferative activity. Sequential anion-exchange and gel-filtration chromatography led to purification of 3 porphyrans of different molecular masses, which contained <$50\;{\mu}g/mL$ protein and >$10\;{\mu}g/mL$ porphyran. Crude porphyran inhibited cell growth in a dose-dependent manner (0-5 mg/mL). When HT-29 colon cancer cells and AGS gastric cancer cells were cultured with various concentrations of the purified porphyran, cancer cell growth was inhibited by 50% at a low concentration (5 or $10\;{\mu}g/mL$). Furthermore, the polysaccharide portion of the porphyran preparation, rather than the protein portion, is the most effective at inhibiting cancer cell proliferation via apoptosis, as indicated by increased caspase-3 activity. Our results indicate that purified porphyran has significant in vitro anti-proliferative activity (p<0.05).
Effect of the ingestion of porphyran extracted from Porphyra yezoensis on calcium, magnesium and potassium contents in serum and tissue was investigated using hyperlipidemic and hypercholesterolemic rats. The contents of calcium magnesium and potassium in serum of rats fed porphyran for four weeks were higher than those of the control group. The contents of calcium and potassium were decreased with increasing a porphyran level while magnesium content was increased. Liver calcium contents in an $1\%$ porphyran group were significantly (p<0.05) higher than those in the control group, and magnesium contents in a $10\%$ porphyran group were higher than those in the control group. Kidney calcium and magnesium contents in rats fed porphyran were significantly (p<0.05) high compared with the control group. However, potassium content in kidney was Increased as a porphyran level was increased in diet. Spleen calcium and potassium contents were significantly lower in the porphyran groups than those in the control group. Rats fed the $5\%$ porphyran diet had higher magnesium content in spleen than any other diets. The results showed that diets supplemented with several porphyran levels had variable effects on the contents of calcium, magnesium and potassium in serum and tissue of hyperlipidemic rats.
국내산 양식김을 이용한 겔 제조를 위한 기초 자료를 얻기 위하여 채취 장소 및 시기에 따라 crude porphyran 및 porphyran을 제조한 후 알칼리 처리하여 수율, 화학적 및 겔 특성을 조사하였다. 알칼리 처리 crude porphyran과 porphyran의 수율은 각각 $4.9\~10.9\%$와 $4.0\~6.7\%$였으며 채취 시기별로는 부안 김은 2월 산이, 위도 김은 1월 산이 수율이 가장 높았다. 겔 강도는 알칼리처리 crude porphyran의 경우 부안김은 2월 산이 $790 g/cm^2$, 위도김은 $740 g/cm^2$로 가장 높았다. 알칼리 처리에 의해 총당은 증가하고 단백질과 황산기는 감소하였다. 알칼리 처리 crude porphyran과 알칼리처리 porphyran의 3,6-anhydro galactose 함량은 각각 $42.6\~46.6\%$와 $40.8\~45.0\%$로 galactose : 3,6-anhydro galactose의 mole 비가 1.0 : 0.8$\~$1.1였다. GC와 FT-IR 분석 결과 알칼리 처리에 따라 3,6-anhydro galactose peak($932cm^{-1}$)가 증가하고 6-sulfate galactose ($815 cm^{-1}$)와 총 황산기 peak ($1250 cm^{-1}$)가 감소함을 알 수 있어 황산기의 대부분이 3,6-anhydro galactose의 전구 물질인 6-sulfate-galactose로 존재함을 알 수 있다.
시판김, 변색김 그리고 폐기용 김의 수분함량은 12.1%, 14.2% 그리고 12.3%, 탄수화물 함량은 각각 35.7%, 31.7% 그리고 35.2%, 단백질 함량은 32.1%, 33.4% 그리고 32.5%, 지방 함량은 4.2%, 5.4% 그리고 4.3%로 나타났으며, 회분 함량은 15.9%, 15.1% 그리고 15.7%를 나타냈다. 비타민 C의 경우 시판김은 35.9 mg%, 변색김은 21.4 mg% 그리고 폐기용 김은 34.4 mg%를 나타내, 비타민 C 함량은 시판 김과 폐기용 김이 변색 김이 보다 높게 나타났다. 총당의 경우는 시판 김이 15.6%, 변색 김이 13.4% 그리고 폐기용 김이 15.7%를 나타내 시판 김과 폐기용 김의 총당이 거의 동일한 함량으로 존재함을 알 수 있었다. 시판 김과 변색 김 그리고 폐기용 김으로부터 얻어진 porphyran의 화학적 조성을 비교해 보면 총당 함량은 시판 김 porphyran이 54.5%, 변색김 porphyran은 45.7% 그리고 폐기용 김 porphyran은 56.2%를 나타내어 시판 김과 폐기용 김 porphyran의 총당은 거의 비슷한 함량임을 나타냈지만 변색 김에서는 그 함량이 낮게 측정되었다. 총당 중에 황산기의 함량으로 표현하였는데 시판 김 porphyran은 17.6%, 변색 김은 13.9% 그리고 폐기용 김은 17.3%를 나타내었고, 단백질 함량은 각각 12.3%, 12.4% 그리고 12.1%로 동일한 값을 나타냈다. 김 제품으로부터 추출된 3,6-anhydrogalactose은 시판 김 porphyran이 13.8%, 변색김 porphyran이 9.1% 그리고 폐기용 김 porphyran은 13.9%를 나타내어 시판 김과 폐기용 김에서 추출한 porphyran의 3,6-anhydrogalactose는 거의 같은 수준으로 들어 있으며 시판 김과 폐기용 김 porphyran의 화학 조성과 함량은 동일함을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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