본 연구는 정자세포로부터 분리된 genome 내 DNA를 PCR 기법으로 증폭시킨 후 random amplified polymorphic DNA(RAPD) 분석을 통해 무지개송어의 품종 내 유전적 특성과 변이성을 해석하고 품종의 특이 유전적 표지를 개발하기 위해서 수행되었다. 20 종류의 primer를 사용하여 RAPD 양상을 검색한 후 다형현상의 출현빈도와 band 수에 기초하여 이들 중 6개의 primer를 선정하여 이용하였다. 그 중에 4개의 primer는 17개의 RAPD marker를 나타내었고, 그중 primer 당 8개인 48개 (28%)의 band 가 다형성을 보여주었다. 6개의 primer 중 4개는 개체들 사이에 다형성을 나타내는 band를 나타내었다. Bandsharing 의 경우 연어와 비교될 만큼 무지개송어는 3개의 특이적인 DNA marker를 가지고 있었다 (2.3. 2.0 및 1.3kb). 같은 무작위 primer를 이용해서 나타난 개별적인 band는 단일 primer 가 무지개송어의 정자핵 DNA의 경우 적어도 3개의 독립적인 genome 내 다형성을 탐지해 낼 수 있다는 것을 제시하고 있다. 이러한 primer에 의해서 나타난 RAPD 다형성은 개체식별을 위한 유전적 표지인자로서 사용될 수 있는 가능성을 제시하였으며, RAPD-PCR은 많은 어종에서 다형현상을 밝혀내는 기술이라 할 수 있다. 본 연구는 RAPD marker가 풍부하고 재현성이 있으며 RAPD 다형성을 지닌 marker를 사용하여 이러한 중요한 양식대상어종에서 미래의 gene mapping과 MAS 를 위한 기초를 제공해 줄 수 있다. RAPD 다형성은 어류의 품종 분화를 위한 유전적 표지로서 유용한 것으로 결론지을 수 있을 것이다.
피속 잡초 수집종 33종을 대상으로 RAPD marker를 이용하여 피 수집종 간의 유전적변이를 알아보고, 수집종들을 판별할 수 있는 DNA marker를 선발하기 위하여 본 실험을 수행한 결과를 요약하면 다음과 같다. Operon사에서 제작된 74개의 10-mer RAPD primer 가운데에서 명확한 다형성을 보이는 6개 primer를 선발하였다. 이들 primer로 PCR에서 증폭된 밴드는 31개이었으며 이 가운데 다형성을 나타내는 band는 26개(83.9%)로 나타났다. 피 수집종 간의 유연 관계를 분석한 결과 공시된 피 수집종은 크게 3그룹으로 분류할 수 있었다.
Kim, Woo-Jin;Shin, Eun-Ha;Kong, Hee Jeong;Nam, Bo-Hye;Kim, Young-Ok;Jung, Hyungtaek;An, Cheul Min
Fisheries and Aquatic Sciences
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제16권4호
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pp.303-309
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2013
Microsatellite markers are important for gene mapping and for marker-assisted selection. Sixty-five polymorphic microsatellite markers were developed with an enriched partial genomic library from olive flounder Paralichthys olivaceus an important commercial fish species in Korea. The variability of these markers was tested in 30 individuals collected from the East Sea (Korea). The number of alleles for each locus ranged from 2 to 33 (mean, 17.1). Observed and expected heterozygosity as well as polymorphism information content varied from 0.313 to 1.000 (mean, 0.788), from 0.323 to 0.977 (mean, 0.820), and from 0.277 to 0.960 (mean, 0.787), respectively. Nine loci showed significant deviation from the Hardy-Weinberg equilibrium after sequential Bonferroni correction. Analysis with MICROCHECKER suggested the presence of null alleles at five of these loci with estimated null allele frequencies of 0.126-0.285. These new microsatellite markers from genomic libraries will be useful for constructing a P. olivaceus linkage map.
Random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis was done with 19 oligonucleotide primers to study genetic similarities and divergence among different types of Deoni breed of cattle viz., Balankya, Wannera and Waghya. Six random primers produced low to high numbers of polymorphic bands between pooled DNA of different Deoni types. Of the 48 RAPD markers obtained 33 were common to all Deoni types, 3 were individual specific and 12 were polymorphic for different Deoni types. The mean average percentage difference values among Deoni types showed that Balankya and Wannera had less genetic divergence when compared to Waghya.
Six breeds of riverine buffalo viz. Murrah, Mehsana, Jaffrabadi, Nagpuri, Nili-Ravi and Bhadawari were characterized using FAO-recommended cattle specific microsatellite markers. Among the total of twenty microsatellite markers screened to explore genomic variability of six buffalo breeds, only ten were polymorphic in nature. Four out of ten polymorphic microsatellite loci were rated as informative. The numbers of alleles detected ranged from 2 to 7, with a mean of $5.5{\pm}0.07$ per microsatellite marker. The most polymorphic marker was BM1818 with a total of 7 alleles present at this locus. One breed specific marker was found in each of Mehsana (BM1818) and Bhadawari (ILSTS030) and four were found in Jaffarabadi (BM1818, ILSTS030, ILSTS054 and ILSTS011). Genetic distance (Ds) between the Mehsana and Bhadawari breed was the maximum (0.29), followed by Murrah and Mehsana (0.27), and Nili-Ravi and Bhadawari (0.26). The lowest Ds was found between the Jaffrabadi and Nagpuri breeds which was only 0.05. The highest divergence time of 1318 years was established between Mehsana and Bhadawari breeds whereas it was found to be lowest (272 years) between the Jaffrabadi and Nagpuri breeds.
Six parent and their 12 gamma ray-induced somatic flower colour mutants of garden rose were characterized to discriminate the mutants from their respective parents and understanding the genetic diversity using Random amplification of polymorphic DNA (RAPD) markers. Out of 20 primers screened, 14 primers yielded completely identical fragments patterns. The other 7 primers gave highly polymorphic banding patterns among the radiomutants. All the cultivars were identified by using only 7 primers. Moreover, individual mutants were also distinguished by unique RAPD marker bands. Based on the presence or absence of the 48 polymorphic bands, the genetic variations within and among the 18 cultivars were measured. Genetic distance between all 18 cultivars varied from 0.40 to 0.91, as revealed by Jaccard's coefficient matrix. A dendrogram was constructed based on the similarity matrix using the Neighbor Joining Tree method showed three main clusters. The present RAPD analysis can be used not only for estimating genetic diversity present in gamma ray-induced mutants but also for correct identification of mutant/new varieties for their legal protection under plant variety rights.
Linkage maps based on molecular markers are valuable tools in plant breeding and genetic studies. A population of 76 RI lines from the mating of A3733 and PI437.088 was evaluated with Random Amplified Polymorphic DNA(RAPD) and Simple Sequence Repeats (SSR) markers to create soybean molecular linkage map, 302 RAPD and 21 SSR markers were genetically linked and formed forty linkage groups. These linkage groups spanned a genetic distance of 1,775 cM. The average distance between markers was 5.5 cM.
DNA 마커는 유전현상 분석이나 품종육성에 널리 사용되고 있다. 본 연구에서는 내냉성 오이 계통인 'NC76'과 냉해 감수성 계통인 'GY14'로부터 내냉성 연관 마커을 목적으로 기존의 총 995개 SSR 마커의 다형성을 평가하였다. Agarose gel 전기영동법으로 'NC76과 'GY14' 간 PCR증폭 산물의 길이 다형성을 보이는 145개 SSR 마커를 개발하였으며, high resolution melting (HRM) 기술을 사용하여 염기서열 다형성을 보이는 30개의 SSR 마커를 확인하였다. 개발된 175개 SSR 마커 중 20개 마커를 선발하여 'NC76'과 'GY14' 간 $F_2$ 분리 집단에 대한 연관지도를 작성하였으며 그 결과 13개의 마커가 예상했던 연관군에 일치하여 위치됨을 확인할 수 있었다. 따라서 본 연구에서 확인된 175개의 SSR 마커는 향 후 냉해 저항성 연관 마커 개발을 위한 오이 유전자 지도 작성 및 이를 통한 품종 육성에 크게 활용될 수 있을 것으로 기대된다.
Lee, Dong Hyeon;Lee, Sun Keun;Lee, Sang Yong;Lee, Jong Kyu
Mycobiology
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제41권2호
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pp.86-93
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2013
Sequence characterized amplified region (SCAR) markers are one of the most effective and accurate tools for microbial identification. In this study, we applied SCAR markers for the rapid and accurate detection of Phytophthora katsurae, the casual agent of chestnut ink disease in Korea. In this study, we developed seven SCAR markers specific to P. katsurae using random amplified polymorphic DNA (RAPD), and assessed the potential of the SCAR markers to serve as tools for identifying P. katsurae. Seven primer pairs (SOPC 1F/SOPC 1R, SOPC 1-1F/SOPC 1-1R, SOPC 3F/SOPC 3R, SOPC 4F/SOPC 4R, SOPC 4F/SOPC 4-1R, SOPD 9F/SOPD 9R, and SOPD 10F/SOPD 10R) from a sequence derived from RAPD fragments were designed for the analysis of the SCAR markers. To evaluate the specificity and sensitivity of the SCAR markers, the genomic DNA of P. katsurae was serially diluted 10-fold to final concentrations from 1 mg/mL to 1 pg/mL. The limit of detection using the SCAR markers ranged from $100{\mu}g/mL$ to 100 ng/mL. To identify the limit for detecting P. katsurae zoospores, each suspension of zoospores was serially diluted 10-fold to final concentrations from $10{\times}10^5$ to $10{\times}10^1$ zoospores/mL, and then extracted. The limit of detection by SCAR markers was approximately $10{\times}10^1$ zoospores/mL. PCR detection with SCAR markers was specific for P. katsurae, and did not produce any P. katsurae-specific PCR amplicons from 16 other Phytophthora species used as controls. This study shows that SCAR markers are a useful tool for the rapid and effective detection of P. katsurae.
본 연구에서는 국내에 유통되고 있는 40개 표고 품종들로부터 산백향과 설백향의 구분이 가능한 CAPS 마커를 개발하였다. 제한효소 Hha I 과 HpyCH4IV를 이용한 밴드 패턴 분석을 통해 각각 산백향과 설백향을 다른 균주들과 구분하여 구별성을 확보할 수 있었다. 본 연구에서 개발된 CAPS 마커는 표고의 품종들 간에 유전적 다양성을 부여함으로써, 품종을 보호할 수 있는 분자생물학적 근거가 될 수 있다. 이로써 향후 유전자원에 대한 국가간 분쟁을 미연에 방지할 수 있을 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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