Cotyledon of Panax ginseng was cultured in the growth regulator-free Knudson C medium comprising only several kinds of mineral salts and sucrose. Shoot primordium or callus developed profusely from the cotyledonary tissue and finally plantlets were produced directly from the shoot primordium or indirectly through callus. Microscopic examination revealed that the epidermal cell as well as the mesophyll cell of the cotyledon became meristematic and divided, changing into multinucleate cell or multicellular body, eventually developing into either a shoot primordium or callus.
The growth kinetics and the production of $\beta$-glucuronidase from transgenic tobacco's suspension culture was investigated in the flask culture and a 2.5 L bubble column reactor. The growth of bubble column reactor was similar to that of flask culture. However, in the bubble column reactor, the production of $\beta$ -glucuronidase reached 2850 U/mg (85-fold higher than that of flask culture). In both case, the production level of $\beta$ -glucuronidase was fluctuated, which was resulted from periodical degradation of the protein. Sucrose is important component in plant culture medium. Twice addition of sucrose in bubble column reactor could not improve cell growth, since other components in a medium were already depleted. However, the addition of sugar decreased cell size, which facilitated the operation of bioreactor. The production of $\beta$ -glucuronidase was continuously increased, however final concentration of $\beta$ -glucuronidase was similar to that without sucrose addition.
Chlorella ellipsoidea were grown in a Mg-free medium. Aliquots of the algal cell were taken out at the beginning and predetermined time intervals during the culture and were analyzed the contents of phosphate in various fractions of the cell constituents. The results obtained were compared with those of the control. When Chlorella cells were grown in a Mg-free medium, the contents of phosphate in the DNA protein, RNA-olyphosphate complex, nucleotidic-lbileP, and PCA-soluble, fractions decreased compared with those of the control, while the content of acid insoluble polyphosphate increased significantly. On the otherhand, RNA-P and lipid-P showed the tendency of decrease at the early stage of the culture, but they were increased more than those in the control as culture proceeds. It is showed that phosphate turnover from acid-insoluble polyphosphate into DNA, protein, and RNA-polyphosphate complex was inhibited by magnesium-deficiency of the cells.
In order to develop the biotechnological methods for the mass production of anticancer compounds from tissue culture of Panax ginseng C.A. Mayer, these studies were carried out for the selection of ginseng cell lines containing higher concentration of polyacetylene compounds and optimal condition for their biosynthesis. Panaxynol, one of ginseng polyacetylene, was not detected in any callus induced from ginseng superior cell lines cultured on MS medium supplemented with $\beta$-chlorophenoxy acetic acid (CPA). Panaxydol, another one of polyacetylene and anticancer compounds, were detected in calli of 5 cell lines by thin layer chromatogram and gas chromatogram. Among the 18 ginseng superior lines, the cell line 30201 has higher content of panaxydol. Especially, panaxydol was not detected in the callus induced from cell line 10301 which cultured on the medium containing CPA only, however, it was detected on the same callus cultured on mixed medium containing CAP 2 mg/L and BA 0.05 mg/L. SH medium was better than MS medium for ginseng callus growth and biosynthesis of polyacetylene, and also found that it was not effected by NAA and sucrose concentration in the culture medium.
From the single cell cultures of haploid tobacco (Nicotiana tabacum L. cv. NC 2326) glyphosate-resistant plants were regenerated. After treated with N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG) and then inoculated onto the LS medium supplemented with 1 mM glyphosate, the single cells survived formed colonies and calluses in 65 and 95 days after culture, respectively, and then whole plants were regenerated in 0.1 mM glyphosate-containing medium from the selected calluses. There was no difference in fresh weight and shikimate content between the selected and normal haploid calluses. When sprayed with 0.1 mM glyphosate, the shikimate contents in the regenerated and normal plants were 0.659 and 20.816 mol/g fr. wt., while that in other normal plants which were not sprayed was 0.921. In addition, the calluses induced from the regenerated plants grew without showing any retardation when treated with glyphosate. These results indicate that the secelcted calluses and regenerated plants are resistant to glyphosate.
Soybean is the one of recalcitrant legume species for shoot induction. Shoot regeneration via direct organogenesis was investigated in five soybean cultivars, 'Dawon', 'Pungsan', 'Daewon', 'Taekwang' and 'Chongdoo 1' by using cotyledonary node explants. Out of 5 soybean cultivars, an efficient shoot regeneration condition was developed in the two soybean cultivars, 'Dawon' and 'Pungsan'. When various kinds of plant growth regulators with different concentration were estimated, the optimum medium condition for shoot induction in both soybean cultivars was MS + B5 vitamin supplemented with BA at concentration 2 mg/L. In addition, shoot formation efficiency was increased with 97.09% and 93.88% by the pretreatment of BA onto the explants before in vitro culture in both cultivars. Shoot induction in 'Dawon' cultivar was originated from epidermal tissue and sub-epidermal layers when histological changes were investigated under shoot regeneration after culturing cotyledonary node segments on shoot induction medium for 0 to 21 days. Especially, cell dedifferentiation was observed from parenchyma cells to meristematic cell in 3-day cultured segments.
Embryogenic calli were induced from petioles of Aralia elata on MS solid medium supplemented with 1.0 mg/L 2,4-D. When embryogenic calli were transferred to MS liquid medium supplemented with 1.0 mg/L 2,4-D, embryogenic cells and embryogenic cell clusters were developed after 2 weeks of culture. Embryogenic cells were filtered through a 250 ${\mu}{\textrm}{m}$ sieve and the passed cells were proliferated and maintained in MS liquid medium supplemented with 1.0 mg/L 2,4-D. Embryogenic cell clusters entrapped on the sieve were transferred to 1/2 MS liquid medium without plant growth regulators, globular-shaped embryos were developed from embryogenic cell clusters after 2 weeks of culture. Numerous early stage somatic embryos could be developed to heart-shaped, torpedo-shaped, cotyledonary embryos and plantlets in 5 L bioreactor. Above results suggest that effective somatic embryo proliferation can be achieved via bioreactor culture systems in Aralia elata.
A structured kinetic model is proposed to describe cell growth and secondary metabolite, flavone glycosides, synthesis in batch suspension culture of Scutellaria baicalensis G. The model has been developed by representing the physiological state of cell described as the activity and viability which can be estimated based on the culture fluorescence. In the model, three type of cells are considered; active-viable, nonactive-viable and dead cells. Viable cell weight could be determined based on the relative fluorescence intensity. The flavone glycosides could be produced by both active-viable and non-active viable cells with a different production rate. And the model includes the cell expansion due to glucose concentration and death phase which accounts for the release of intracellular secondary metabolite into medium. Dependent variables include substrate concentration(glucose), cell mass(dry cell weight and fresh cell weight), product concentration(flavone glycosides), activity and viability. Satisfactory agreement between the model and experimental data is obtained from shake flask culture of Scutellaria baicalensis G. The proposed model can predict the cell growth and flavone glycosides synthesis as well as intermediate materials.
Embryogenic calli were induced from mature seed scutella of anther culture-derived rice variety Zhonghua 8. Cell suspension cultures were initiated from friable embryogenic calli and utilized as source material for protoplast isolation. Generally, the older and finer cell suspensions gave higher protoplast yields than younger suspension cultures. Protoplasts exhibited sustained cell division and formed microcalli when cultured in KPR medium supplemented with 0.5 mg $l^{-1}$ 2,4-D, 1.0 mg $l^{-1}$ NAA and 0.5 mg $l^{-1}$ zeatin using the agarose embedding procedure without feeder cells. Protoplast plating efficiencies ranged from 0.20 to 0.54%. Microcalli were transferred to MS medium supplemented with 2.0 mg $l^{-1}$ kinetin and 0.5mg $l^{-1}$ NAA for plant regeneration. The regeneration frequencies were 2 to 12%, depending on the cell suspension lines of Zhonghua 8. The plants were transferred to the glasshouse and were fertile.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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