Protoplast Culture and Plant Regeneration of Rice

벼의 원형질체 배양과 식물체 재분화

Embryogenic calli were induced from mature seed scutella of anther culture-derived rice variety Zhonghua 8. Cell suspension cultures were initiated from friable embryogenic calli and utilized as source material for protoplast isolation. Generally, the older and finer cell suspensions gave higher protoplast yields than younger suspension cultures. Protoplasts exhibited sustained cell division and formed microcalli when cultured in KPR medium supplemented with 0.5 mg $l^{-1}$ 2,4-D, 1.0 mg $l^{-1}$ NAA and 0.5 mg $l^{-1}$ zeatin using the agarose embedding procedure without feeder cells. Protoplast plating efficiencies ranged from 0.20 to 0.54％. Microcalli were transferred to MS medium supplemented with 2.0 mg $l^{-1}$ kinetin and 0.5mg $l^{-1}$ NAA for plant regeneration. The regeneration frequencies were 2 to 12％, depending on the cell suspension lines of Zhonghua 8. The plants were transferred to the glasshouse and were fertile.

약배양을 통해 유도된 벼의 품종 Zhonghua 8의 종자로부터 배발생 캘러스를 유기한 캘러스로부터 현탁배양을 실시하였다. 원형질체 분리 는 이러한 현탁배양된 캘러스를 사용하였으며, 일반적으로, 오래되고 미세한 현탁배양세포를 사용했을 때 어린 현탁배양세포보다 원형질체 나출율이 증가되었다. 원형질체는 feeder cell 없이 agarose embedding 방법에 의해 0.5 mg $l^{01}$ 2,4-D, 1.0mg $l^{-1}$ NAA와 0.5 mg $l^{-1}$zeatin이 첨가된 KPR 배지에서 배양하였을 때 세포분열이 일어났으며 microcalli가 형성되었다. 원형질체의 plating 효율은 0.20~0.54% 범위로 나타났으며, 원형질체로부터 유도된 microcalli는 식물체 재분화를 위해 2.0 mg $l^{-1}$ kinetin과 0.5 mg $l^{-1}$ NAA가 첨가된 MS 배지에 옮겨 주었다 실물체 재분화 빈도는 현탁배양의 line에 따라 2~l2%였다. 원형질체로부터 재분화된 식물체들은 온실에서 종자를 맺었다었다