The relative density of phytoplasmas in witches'broom (WB)-infected jujube trees was investigated using compatitive polymerase chain reaction (PCR). During dormant and defoliating seasons, the densities of phytoplasmas were about the same in roots and twigs. In early growing season, the density showed the highest rates in roots, then in twigs and in petioles. however, the density was highest in petioles and the lowest in roots during actively growing season. Throughout the year, root samples did not show any serious fluctuation compared with that of t2wigs and petioles. Density was lowest during actively growing season in root samples. In contrast, petiole sample densities varied to a great extent depending on the season, very high during actively growing season, but very low during the early growing season, In twig samples, the densities were very high and almost the same in both defoliating and dormant seasons. Among the parts of the trees, phytoplsma density was the most stable in root samples throughout the year. The highest densities of phytoplasmas were about the same in all tree parts. These results suggest that the phytoplasmas may overwinter not only in roots but also in twigs, and that multiplication rate of phytoplsma becomes very high right after the early growing season.
Phytoplasmas were discovered in diseased Elaeocarpus sylvestris trees growing on Jeju Island that showed symptoms of yellowing and darkening in the leaves. Leaf samples from 14 symptomatic plants in Jeju-si and Seogwipo-si were collected and phytoplasma 16S rRNA was successfully amplified by nested polymerase chain reaction using universal primers. The sequence analysis detected two phytoplasmas, which showed 99.5% identity to 'Candidatus Phytoplasma asteris' and 'Ca. P. malaysianum' affiliated to 16SrI and 16SrXXXII groups, respectively. Through polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (RFLP) analyses using the AfaI (RsaI) restriction enzyme, the presence of two phytoplasmas strains as well as cases of mixed infection of these strains was detected. In a virtual RFLP analysis with 17 restriction enzymes, the 16S rRNA sequence of the 'Ca. P. asteris' strain was found to match the pattern of the 16SrI-B subgroup. In addition, the phytoplasmas in the mixed-infection cases could be distinguished using specific primer sets. In conclusion, this study confirmed mixed infection of two phytoplasmas in one E. sylvestris plant, and also the presence of two phytoplasmas (of the 16SrI and 16SrXXXII groups) in Jeju Island (Republic of Korea).
파이토플라스마 증폭 프라이머, P1/P7 및 R16F2n/R2를 이용하여 뽕나무 품종 42개체에 대하여 뽕나무오갈병 파이토플라스마의 전염여부를 조사한 결과 공시 모두에서 파이토플라스마가 검출되었다. 뽕나무오갈병 파이토플라스마 단일염기변이를 SSCP분석기법을 응용하여 분석조건을 조사한 결과 P1/P7(약 1.8 kb) 및 R16F2n/R2(약 1.2kb)로 증폭한 PCR산물에서는 6% polyacrylamide gel 농도, 150V, $10^{\circ}C$의 전기영동 조건에서 SSCP밴드패턴이 나타났다. 유사한 SSCP밴드 패턴을 보이는 두 시료간의 밴드형태를 뚜렷하게 구별하는 방법을 찾기 위하여 뽕나무 오갈병파이토플라스마와 대추나무 빗자루병 파이토플라스마의 P1/P7 및 R16F2n/R2 프라이머로 증폭한 PCR산물을 혼합한 후 SSCP분석 결과, 전기영동상에서 대추나무 파이토플라스마와 뽕나무 파이토플라스마의 SSCP 밴드패턴 모두를 관찰할 수 있었다. 본 연구 결과, 기존에 약 600 bp 크기로 한정된 것으로 알려진 SSCP 분석법을 응용하여 파이토플라스마 PCR 산물 1.8 kb 또는 1.2 kb 크기에서도 유사한 SSCP 밴드패턴에 의하여 단일염기변이를 검출할 수 있었다.
파이토플라스마 증폭 primer, R16F2n/R2를 이용하여 뽕나무 오갈병 파이토플라스마와 대추나무 빗자루병 파이토플라스마에 대하여 SSCP분석법을 이용하여 염기변이 분석을 하였다. 그 결과 뽕나무 및 대추나무 파이토플라스마는 약 1.2 kb PCR 산물을 이용하더라도 뚜렷한 밴드차이를 나타내었다. 유사한 SSCP밴드 패턴을 보이는 두 시료 간의 밴드형태를 뚜렷하게 구별하는 방법을 찾기 위하여 뽕나무 오갈병 파이토플라스마와 대추나무 빗자루병 파이토플라스마의 PCR산물을 혼합한 후 SSCP분석 결과, 전기영동상에서 대추나무 파이토플라스마와 뽕나무 파이토플라스마의 SSCP 밴드패턴 모두를 관찰할 수 있었다. 본 연구 결과, 기존에 약 600bp 크기로 한정된 것으로 알려진 SSCP 분석을 PCR 산물 1.2 kb을 이용하여 유사한 SSCP 밴드패턴을 보이는 두 시료간의 밴드형태를 두 시료의 PCR 산물을 혼합하여 SSCP분석함으로써 뚜렷하게 구별할 수 있었다.
강원 고랭지의 대표적 지대인 평창의 대관령, 홍천의 내면 그리고 횡성의 둔내지역에서 재배되고 있는 주요 원예작물에 대해 1994년$\sim$1997년까지 4년에 걸쳐 실시한 병해조사의 결과는 다음과 같다. 1) 배추와 무에서는 순무모자이크바이러스(TuMV)가 '92년부터 고랭지에 다발생하여 '94년과 '96년에 피해가 심하였으며, 이 바이러스병과 함께 무름병의 발생이 심한 편이었으며, 최근에는 무사마귀병의 피해고 '96년부터 점증 추세에 있으며 수년 전까지 피해가 심했던 뿌리 마름병은 최근 발생이 지극히 저조한 점이 특이하다. 거의 모든 채소작물에서 무름병, 잿빛곰팡이병, 노균병, 흰가루병, 잘록병, 검은무늬병 등의 발생이 심한 것이 특징인데 저지대와 달리 고랭지 기후환경과 무관하지 않았을 것이다. 한편 조사기간 중 새로운 미기록종으로는 셀러리의 바이러스(BBWV)와 잿빛곰팡이병(Botrytis cinerea), 메론의 점무늬병(Cercospora citullina), 딸기의 흰가루병(Erysiphe polygori), 양상추의 흰가루병(Erysiphe cichoraceaium) 등이 밝혀졌으며 기주 미기록으로는 파슬리의 무사마귀병(Plasmodiophora brassicae)이 밝혀진 것이 특이하다. 2)여러 가지 화훼작물에는 주로 바이러스병, 잿빛곰팡이병, 시들음병, 흰무늬병 등의 발생이 많았으며 특히 자생 나리류에 흰무늬병(Cercospora spp.) 발생이 심하였다. 미기록종으로는 꽃도라지의 시들음병(Fusarium oxysporum f. sp. eustomae), 바이러스병(BBWV, CMV), 균핵병(Sclerotinia sclerotiorum), 잿빛곰팡이병(B. cinerea), 카네이션의 반점병(Cladosporium echinulatum), 용담의 시들음병(Fusarium oxysporum), 잎마름병(Alternavia dianthi) 등과 Phytoplasma에 의한 스타티스의 빗자루병, 리아트리스의 빗자루병, 자생나리류의 흰무늬병(Cercospora sp.), 스토크의 TuMV 등이 동정되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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