To investigate and evaluate the scavenging and antioxidative effects of various ftavonoids on paraquat induced pulmonary toxicity, in vivo and vitro tests of eight flavonoids(catechin, epicatechin, flayone, chrysin, apigenin, quercetin, morin and biochanin A) were carried out. In vitro test, inhibitory and antioxidative effects of lipoxygenase dependent lipidperoxidation, NADPH dependent cytochrome p-450 reductase to liver and lung microsome and superoxide anion production in rat peritoneal exudated macrophage were studied. In vivo test, biochemical parameters and cell population in bronchoalveolar lavage fluid(BALF) in mouse and rats after administration of paraquat and flavonoids were tested. The results are summerized as follows; 1. All flavonoids tested inhibited on NADPH dependent cytochrome p-450 reductase in liver and lung microsome. 2. All flavonoids tested showed the inhibitory effects on the superoxide anion production in rat peritoneal exudated macropharge. 3. Lactate dehydrogenase, acid phosphatase and total protein in BALF of mouse which increased by the administration of paraquat, decreased significantly by catechin, chrysin, morin and biochanin A. 4. Numbers of alveolar macropharge and PMN in BALF of rats which increased by the administration of paraquat decreased by all the tested flavonoids. Therefore, all flavonoids tested showed the useful compounds for scavenger and antioxidant on paraquat induced pulmonary toxicity.
This study was performed to investigate the in vitro effect of a corn water extract on immune function. Splenocyte proliferation was determined by the MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyl terazolium bromide) assay after preparing asingle cell suspension. Production of macrophage-secreted interleukin(IL)-$1{\beta}$, IL-6, and interferon(IFN)-${\gamma}$, was detected by ELISA using a cytokine assay kit. After a 48-hr incubation with mitogens(ConA or lipopolysaccharide), mice splenocyte proliferation increased with the addition of a corn water extract supplement at 10, 50, 100, 250, 500, or $1,000\;{\mu}g/m\ell$. Production of IL-$1{\beta}$, IL-6, and IFN-${\gamma}$ increased in treatments supplemented with the corn water extract. In an in vitro study, splenocyte proliferation increased when $50\sim1,000\;{\mu}\ell/m\ell$ corn water extract was added. In an ex vivo experiment, the highest production of cytokines by activated peritoneal macrophages was observed in mice orally administered 500 mg/kg body weight/day.
The composition of monosaccharides of acidic polysaccharide isolated from ethanol-insoluble and water-soluble fractions of red ginseng roots was analysed and its immunological activities were investigated. Red ginseng acidic polysaccharide (RGAP) was composed of glucose (26.1 mole %), arabinose (1.6 mole %), glucuroninc acid (51.8 mol %) and galacturonic acid (5.1 mole %) as determined by gas liquid chromatography. Addition of RGAP increased production of nitric oxide (NO) and tumor necrosis factor (TNF)-$\alpha$ in the rodent macrophage cultures. Peritoneal macrophages from RGAP-treated mice exhibited potent tumoricidal activities toward P815 and WEHI 164 tumor cells. It was also observed that concentrations of NO and TNF-$\alpha$ were high in the culture medium of macrophages from the mice administered with RGAP. Moreover, treatment of RGAP in vivo stimulated tumoricidal activities of natural killer (NK) cells. Treatment with RGAP increased life span of sarcoma 180-bearing mice and decreased tumor weights of B16-tumor-bearing mice. These results suggest that activation of macrophages and NK cells serve to enhance in vivo anticancer activities of RGAP.
Inhibitory effects of cockle extracts on carcinogen-induced cytotoxicity in C3H/10T1/2 cells were studied. Soup (62$\mu\textrm{g}$/mL), solubility (28$\mu\textrm{g}$/mL) and liposolubility (9 $\mu\textrm{g}$/mL) of the cockle inhibited 3-methyl-cholanthrene(MCA)-induced cytotoxicity in C3H/10T1/2 cells by 53 and 94%, respectively. These results suggest that the extracts cockle might have anticarcinogen-induced cytotoxicity of C3H/10T1/2 cells. The effects of cockle extracts on the immune response related to its antitumor activity in vitro and in vivo were investigated. The cockle extracts showed a direct cytotoxic effect on sarcoma-180 cells, tumor cells in vitro. Soup (0.49 mg/mL), solubility (0.11 mg/mL) and liposolubiliy (0.05 mg/mL) of the cockle markedly decreased the total numbers of sarcoma-180 cells, but not their viability. The phagocytic acitivity of peritoneal macrophage of mice was significantly augmented by these extracts of the cockle compared with that of control in vivo. These extracts also raised the phagocuytic index, indicating that the number of phagocytize dmicrobes per macrophage increased. Thus, cockle extracts might show a antitumor activity by enhancing the phagocytic cell activities.
Objective: The presence of the various cytokines in human peritoneal fluid has been evaluated incompletely. Changes in cytokine levels may be related to activation of peritoneal macrophage and T-lymphocyte, development of endometriosis, and infertility. This study assesses peritoneal fluid levels of interleukin-6 (IL-6), interleukin-8 (IL-8), interleukin-10 (IL-10) and tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$) in infertile women with endometriosis and normal women without endometriosis. Design: Prospective and case-control study in university hospital. Materials and Methods: Cytokine levels in peritoneal fluid obtained during laparotomy or laparoscopy from 21 patients in infertile patients with endometriosis and 24 controls undergoing laparotomy or laparoscopy with no evidence of pelvic endometriosis were determined by enzyme-linked immunosorbent assay. Results: The mean levels of interleukin-6 in infertile patients with endometriosis and controls were $72.7{\pm}23.7$ pg/ml and $18.5{\pm}9.7$ pg/ml respectively (p=0.02). Similarly, the mean levels of interleukin-8 in infertile patients with endometriosis was significantly higher than that of controls ($445.0{\pm}89.6$, vs $45.1{\pm}48.4$, p=0.04). The mean concentration of interleukin-10 in infertile patients with endometriosis was significantly lower than that of controls ($1.09{\pm}0.04$ vs $2.19{\pm}0.03$, p=0.03). The level of tumor necrosis factor-${\alpha}$ was not significantly different between the two study groups. Conclusions: Increased IL-6 and IL-8 and decreased IL-10 levels in the peritoneal fluid may be related to pathogenesis in the endometriosis and infertility, suggesting that partially contribute to the disturbed immune regulation observed in infertili women with endometriosis.
1. 10種染料 (neutral red, toluidine blue, pyronin, methylene blue, alcian blue, trypan blue, carmine, orange G, aniline blue, Janus green B, and India ink)로 處理된 흰쥐의 腹腔內細胞 特히 肥滿細胞의 식作用 및 複屈折性의 有無를 位相差顯微鏡法 및 偏光顯微鏡法으로 分析하였으며 附隨的으로 cytomorphic change 도 觀察하였다. 2. 腹腔內 肥滿細胞는 大部分 染料에 對하여 아무런 식作用을 보이지 않았으며 India ink 群에서 輕微한 식作用을 보였다. 大식細胞와 各種 白血球는 大體로 旺盛한 식作用을 나타내었다. 3. 腹腔內 肥滿細胞는 大部分의 染料를 處理하여도 아무런 複屈折性을 보이지 않았으며 trypan blue 와 aniline blue 處理群에서 매우 輕微한 反應을 보였을 뿐이었으며 白血球는 全然 反應을 보이지 않았다. 4. 各種染料에 對한 肥滿細胞의 細胞形態學的 反應은 一定하지 않았으며 大體로 輕微한 變化를 일으켰다. 白血球의 同染料에 對한 反應은 特히 trypan blue, orange G, India ink群에 서 顯著하였다.
Background: Crocus sativus and its major constituent crocin are well established to have anti-cancer properties in breast cancer cells (MCF-7). However the role of C. sativus extract (CSE) and crocin on caspase signaling mediated MCF-7 cell death at molecular level is remains unclear. In this study, we tried to unravel role of CSE and crocin on caspase mediated MCF-7 cells death and their in vivo preclinical toxicity profiling and immune stimulatory effect. Materials and Methods: CSE extract was fractionated by HPLC and crocin was isolated and characterized by NMR, IR, and MS. MCF-7 cells were treated with both CSE and crocin and expression of Bcl-2 and Bax was assessed after 24 and 36 hours. Furthermore, caspase 3, caspase 8 and caspase 9 expression was determined by Western blotting after 24 hours of treatment. DNA fragmentation analysis was performed for genotoxicity of CSE and crocin in MCF-7 cells. The in vivo toxicity profile of CSE (300 mg/kg of b.wt) was investigated in normal Swiss albino mice. In addition, peritoneal macrophages were collected from crocin (1, 1.5 and 2 mg/kg body weight) treated mice and analyzed for ex vivo yeast phagocytosis. Results: Immunoblot analysis revealed that there was time dependent decline in anti-apoptotic Bcl-2 with simultaneous upregulation of Bax in CSE and crocin treated MCF-7 cells. Further CSE and crocin treatment downregulated caspase 8 and 9 and cleaved the caspase 3 after 24 hours. Both CSE and crocin elicited considerable DNA damage in MCF-7 cells at each concentration tested. In vivo toxicity profile by histological studies revealed no observable histopathologic differences in the liver, kidney, spleen, lungs and heart in CSE treated and untreated groups. Crocin treatment elicited significant dose and time dependent ex vivo yeast phagocytosis by peritoneal macrophages. Conclusions: Our study delineated involvement of pro-apoptotic and caspase mediated MCF-7 cell death by CSE and crocin at the molecular level accompanied with extensive DNA damage. Further we found that normal swiss albino mice can tolerate the maximum dose of CSE. Crocin enhanced ex vivo macrophage yeast phagocytic ability.
V. vulnificus is an estuarine bacterium which causes septicemia and shock in susceptible patients. The organism produces a hemolytic cytolysin (VvH), which has a membrane damaging effect on erythrocytes. To clarify the mechanisms by which VvH might contribute to virulence, we examined its effect on macrophages. When mouse peritoneal macrophages were harvested and co-cultured with hemolysin-positive V. vulnificus strains (100 bacteria/cell), about 60% of the macrophages were killed; macrophages were not killed when co-cultured V. vulnificus strain CVD 707, a VvH-negative deletion mutant. Exposure of macrophages to filtered culture supernatants (2.5 HU/ml) and purified VvH (3 HU/ml) resulted in an increase in dead cells (80 and 90%, respectively), as determined by the trypan blue dye exclusion method and LDH release from macrophages was also increased (70 and 65.5%, respectively). The cytotoxic effect of VvH on macrophages was both the dose- and time-dependent. The VvH caused damage to the macrophage membrane and was blocked significantly by preincubation with cholesterol (p<0.01). Fetal bovine serum showed remarkable inhibition of VvH synthesis by V. vulnificus and inhibited VvH activity in culture supernatant. Cell viability was increased by 35% (p<0.01) and LDH release decreased by 28% (p<0.01) when macrophages were incubated with V. vulnificus (100 bacterial cell) in DMEM-10% FBS for 2 hr. Bacterial clearance activity of mice against V. vulnificus CVD 707 was decreased by pretreatment with 10 HU of VvH. This result suggests that the VvH can impair the membrane of macrophages and may playa role in the pathogenesis of V. vulnificus septicemia.
Objective : To investigate immune enhancing effects of Boummyunyuck-dan (BMD) Methods : In this study I investigated the effect of BMD on cell proliferation and viability. In addition, I investigated production of cytokines (IL-2, IL-4 and $IFN-{\gamma}$), NO, and $TNF-{\alpha}$ in human T-cell leukemia, MOLT-4 cells. The cells were cultured for 24h in the presence or absence of BMD. Result : BMD increased the cell viability by 15% (P<0.05) and enhanced IL-2, IL-4 and $IFN-{\gamma}$ production compared with media control in a dose-dependent manner (P<0.01) at 24h. BMD also increased mRNA and protein expression levels of $IFN-{\gamma}$ in MOLT-4 cells. In addition, I also assessed the effects of BMD on production of NO and $TNF-{\alpha}$ from the peritoneal macrophages because NO and $TNF-{\alpha}$ as a potent macrophage-derived immune reaction regulatory molecule has received increasing attention. However, BMD had no effect on NO and $TNF-{\alpha}$ production in the cells. Conclusion : These data indicate that BMD has some immune-enhancing effect, and that its action may be due to the proliferation and cytokine production of T cells.
Chlorogenic acid, formed of an ester of caffeic acid and quinic acid, which is naturally abundant in many plant species, was used as a model O-dihydoxy phenolic compound. In the previous study, we have reported that the isolated constituent from Apocynum venetum leaves has an inhibitory effect on $Cu^{2+}$-induced oxidative modification of low-density lipoprotein (LDL). Among them, chlorogenic acid showed the most potent anti-LDL oxidative activity than other compounds. For the reason, we investigated the inhibitory effect of the chlorogenic acid on $Cu^{2+}$-induced oxidative modification of LDL, monitored a lag time in the conjugated-diene formation and TBARS formation, and measured TNBS free amino acid group, and form cell formation in vitro system. The TBARS- and diene- formation were strongly inhibited by chlorogenic acid ($0{\sim}100\;{\mu}g/ml$) with dose dependent manner. On the other hand, TNBS reactive lysine amino groups on LDL oxidation were protected by chlorogenic acid- treated cell group. Therefore, chlorogenic acid inhibited to cholesterol accumulation in the isolated peritoneal macrophage.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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