• 식물조직배양학회지
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• 제22권6호
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• pp.311-316
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• 1995

Pelargonium aridum과 P. zonale 아속간의 체세포 잡종을 얻기 위하여 이들로부터 원형질체를 유리하여 polyethylene glycol (PEG)와 electrofusion 방법으로 융합시켰다. 원형질체는 자엽과 본엽을 550 mM sucrose, 0.7% cellulase (OnozukaR-10), 0.4% Macerozyme이 함유된 MS 배지로 유리하였다. 배양밀도는 배지 mL당 원형질체수는 6 x $10^4$이 배양에 적당하였다. Electrofusion 방식으로 융합된 원형질체는 PEG방식으로 융합된 것보다 세포분열이 덜 활발하였다. 두종간의 원형질융합체는 550mM glucose, 1~2 mg/L NAA와 0.5~l mg/L BA가 함유된 M 배지에서 배양하였을 때 캘러스를 형성하였다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제36권6호
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• pp.557-561
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• 1993

Polyethylene glycol(PEG)법 또는 electroporation법으로 제라니움 원형질체에 neomycin phosphotransferase II(nptII) 유전자를 옮기고, 세포내에 도입된 nptII DNA의 존재유무와 발현여부를 조사하였다. Polymerase chain reaction(PCR)을 이용하여 검토한 결과, PEG법을 사용했을 때나 electroporation법을 사용했을 때 모두 세포내에 도입된 nptII DNA가 있음이 확인되었다. 또 이들 세포의 추출물을 전기영동하여 neomycin phosphotransferase 활성을 조사한 결과, 효소활성을 보이는 band가 검출되어 marker gene 으로 도입된 notII 유전자가 세포내에서 발현된다는 것이 확인되었다.

• 식물조직배양학회지
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• 제21권1호
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• pp.29-34
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• 1994

제라니움(Pelargonium zonale hybrids, 'Pinto Scarlet') 엽조직으로부터 캘러스를 유기시킨 뒤에 이를 단세포로 만들고 여기에 세포막의 물리화학적 성질을 변화시킬 수 있는 요인들 즉 낮은 pH,고농도의 $K^{+}$ 그리고 Gh$_3$와 2,4-D를 처리한 다음 원심력을 가하여 DNA가 세포 밖으로 나을 수 있는지의 가능성을 검토했다. 음하전을 갖고 있는 DNA를 세포벽을 손상시키지 않으면서 분리해 내기 위해 사용되는 SDS의 최적농도는 300mg/L였다. pH 4.0에서 0.5 % KNO$_3$를 처리했을 경우 1,800 x g의 원심력만 가해줘도 DNA가 검출되었으나 아무런 처리도 안했을 경우는 7,300 x g가 필요했다. 또 pH 5.8 보다는 PH 4.0일때 그리고 KNO$_3$ 농도에 따라 더 많은 DNA가 이동된 것이 검출되었으며 GA$_3$는 1.5mg/L 2,4-D는 2.0 mg/L를 한시간 처리했을 때가 그 이상 또는 그 이하인 경우 보다 더 효과적이었다. 이상의 사실을 종합해 보면 원심력에 의해서 DNA를 세포벽 밖으로 유출시킬 수 있으며 수소이온과 K+ 그리고 GA$_3$나 2,4-D처리가 DNA 이동을 부가적으로 촉진시킨다고 말할 수 있다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제36권6호
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• pp.562-566
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• 1993

제라니움(Pelargonium zenale hybrids)의 원형질체에 외래유전자를 전기충격에 의해 직접도입시키는 조건을 methylene blue 염색법을 이용하여 조사하였다. 그 결과 1.77 kV/cm의 직류전압을 $40{\mu}\;sec$ 동안 가해 주는 것이 제일 효과적이었으며 이때의 원형질체 생존율은 70% 염색율은 58%이었다. 정제한 pBin19 plasmid를 전기충격법으로 원형질체에 삽입시킨 뒤 kanamycin이 포함된 배지에서 배양하였으며 원형질체의 세포분열은 KM8P 액체배지에서 제일 높았다. 윈형질체의 최적 전기융합 조건은 교류 주파수 1 MHz를 40 V/cm에서 15 sec 동안 가한 후 직류전압 0.5 kV/cm를 $60{\mu}\;sec$ 동안 처리해 준 결과 이때의 융합율과 생존율은 각각 13%, 81%이었다.