Human glutamate dehydrogenase isozymes (hGDH1 and hGDH2) have been known to be inhibited by palmitoyl-CoA with a high affinity. In this study, we have performed the cassette mutagenesis at six different Cys residues (Cys59, Cys93, Cys119, Cys201, Cys274, and Cys323) to identify palmitoyl-CoA binding sites within hGDH2. Four cysteine residues at positions of C59, C93, C201, or C274 may be involved, at least in part, in the inhibition of hGDH2 by palmitoyl-CoA. There was a biphasic relationship, depending on the levels of palmitoyl-CoA, between the binding of palmitoyl-CoA and the loss of enzyme activity during the inactivation process. The inhibition of hGDH2 by palmitoyl-CoA was not affected by the allosteric inhibitor GTP. Multiple mutagenesis studies on the hGDH2 are in progress to identify the amino acid residues fully responsible for the inhibition by palmitoyl-CoA.
Mitsuhashi, T.;Mitsumoto, M.;Yamashita, Y.;Ozawa, S.
Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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제1권2호
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pp.99-106
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1988
A high performance liquid chromatographic procedure is described for the direct determination of the picomole amount of palmitoyl-Coenzyme A and stearoyl-Coenzyme A, using a stainless steel column packed with C-18 derivatized porous silica ($5{\mu}m$), an isocratic elution with a mixture of 33 mM $KH_2PO_4$/acetonitrile as a mobile phase and a UV detector. The long-chain acyl-Coenzyme A esters were determined in incubated microsomal fractions of a bovine liver to demonstrate the utility of this method for monitoring acyl-CoA synthesis in biological samples. The reaction rate of palmitate was higher than that of stearate. After a 60 minute incubation period, the generated amount of palmitoyl-Coenzyme A and stearoyl-Coenzyme A were approximately 70 and 20 n mol/mg micresomal protein, respectively. The advantage of this method are in that no decomposition of the CoA esters is involved, while the constituent molecular species is detected.
The palmitoyl acyl carrier protein (ACP) specific thioesterase (EC 3.1.2.14) from Iris pseudoacorus was purified and characterized. The thioesterase which was very unstable in relatively high salt concentrations was eluted using a co-gradient of Triton X-100 and low concentration of KCl or Na-phosphate from Q-Sepharose, DEAE-Sepharose, and hydroxyapatite chromatography. SDS-PAGE analysis showed a single band with a molecular weight of 35,000. The native molecular weight of approximately 37,000 was estimated by Sephacryl S-200 chromatography, indicating that the enzyme is a monomer. The thioesterase activity was inhibited about 75% and 50% by N-ethylmaleimide (2 mM) and phenylmethylsulfonyl fluoride (2 mM). respectively. The N-ethylmaleimide-inactivation was protected by sodium palmitate but the inactivation with phenylmethylsulfonyl fluoride was not protected. Oxidation of thiols by 2 mM 5.5'-dithio-bis-(2-nitrobenzoic acid) resulted in 65% inactivation of the enzyme. These results suggest that a cysteinyl residue is essential to the catalytic reaction of the enzyme. The enzyme activity was increased by sodium citrate and also by $Cu^{2+}$
This study evaluated the effects of carnitine supplementation on obesity caused by a high-fat diet in C57BL/6J mice. The mice were fed a normal diet (ND), high-fat diet (HD), or carnitine-supplemented (0.5% of diet) high-fat diet (HDC) for 12 weeks. The results showed that body weight, energy intake, and feed intake were lower in the HDC group than the control groups. Acid-soluble acylcarnitine (A SAC), acid-insoluble acylcarnitine (AIAC), and total carnitine (TCNE) in the serum and liver were significantly higher in the HDC group. Hepatic carnitine palmitoyl transferase-I activity was significantly higher in the HDC group than the control groups. Acyl-coA synthetase (ACS) and carnitine palmitoyl transferase-I (CPT-I) mRNA expression in the liver was highest in the HDC group, however hepatic acetyl-coA carboxylase (ACC) mRNA expression in this group was lowest. Serum leptin levels and abdominal fat weight were lowest in the HDC group. We concluded that L-carnitine supplementation diminished the risk of obesity caused by a high-fat diet.
Palmitoyl CoA was found to inhibit corn embryo axis glucose-6-phosphate dehydrogenase and 6-phosphogluconate dehydrogenase, which were also inhibites by polyamines. However, reversal of inhibition of both enzymes by palmitoyl CoA was made by spermine. Activity of corn embryo axis protein kinase was found to increase steadily after germination. Activation and inhibition of protein kinase were made by MgCl$_2$and all polymines, respectively. Suc results suggest that fatty acid biosynthesis and lypolysis could be regulated to some extent by polyamines in corn embryo axis.
Palmitoyl tripeptide (M330)는 최소 저해농도(MIC) 결정 실험에서 기존 화장품 방부제인 메칠 파라벤, 페녹시 에탄올보다 적은 농도로도 높은 항균활성을 나타냈다. 하지만 화장품 제형에 M330을 혼합하면 점증제인 carbopol (carboxy vinyl polymer)과의 정전기적 인력 결합으로 침전이 생기면서 점도가 떨어지고 항균효과도 크게 떨어지는 현상이 일어났다. 따라서 화장품 제형에서 M330의 항균효과를 회복시키고 제형의 침전을 방지하기 위하여 ethosome 베시클로 M330의 캡슐화를 시도하였다. M330을 ethosome에 캡슐화하여 화장품 제형에 첨가한 결과 침전이 형성되지 않았고 캡슐화되지 않은 M330을 첨가했을 때보다 점도의 감소폭이 적었다. 챌린지 테스트를 시행한 결과, M330을 캡슐화하여 첨가했을 때 E. coli나 P. aeruginosa 등의 그람 음성균에서는 항균활성이 더욱 향상되었지만 그람 양성균인 S. aureus와 진균인 C. albicans에서는 캡슐화에 의한 효과가 없었고, 특히 C. albicans에서는 1주일 동안 생균수의 감소가 전혀 없었다. M330에 EDTA를 혼합하여 실시한 챌린지 테스트 결과 C. albicans에 대한 항균활성이 크게 증가함을 확인하였고, 두 성분을 함께 캡슐화 했을 때는 더욱 빠른 속도로 균이 사멸하였다.
역마이셀-효소반응계에서 팜유와 스테아르산으로부터 Rhizopus arrhizus 리파제의 에스테르교환 반응에 의한 코코아 버터 대용지 생산을 위한 연구를 실시하였다. HPLC를 이용하여 각 트리글리세리드의 정성 및 정량분석을 행하였다. 트리올레인과 스테아르산의 모델반응에서 Aerosol OT에 대한 물의 몰비율을 변화시켰을 때 그 비가 10일 때, 30mM 트리올레인에 대하여 3배의 스테아르산을 첨가했을 때 최대의 전환율을 보였다. 또 pH는 7.5, 온도는 $50^{\circ}C$에서 최대의 전환율을 보였다. 팜유와 스테아르산을 기질로 이용하였을 때는 팜유내의 POP, POO, SOO가 줄어든 반면 POS와 SOS가 생성, 증가되는 경향을 보였다. 본 연구에서 얻은 코코아 대용지의 POP. POS, SOS 등 트리글리세리드 조성은 시판되는 코코아 대용지보다 천연코코아 버터의 조성과 더욱 유사하였다.
Kim, Ju-Sun;Shim, Sang-Hee;Lee, Sang-Hyun;Chae, Sung-Wook;Han, Sang-Jun;Kang, Sam-Sik;Lee, Yeon-Sil;Jung, Sang-Hoon;Shin, Kuk-Hyun
Natural Product Sciences
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제10권6호
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pp.341-343
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2004
A monoacyldigalactosyl glycerol was isolated from the $CH_2Cl_2$ soluble fraction of the MeOH extract from the green alga Enteromorpha prolifera. The structure was established as $1-O-palmitoyl-3-O-[{\alpha}-D-galactopyranosyl(1{\rightarrow}6)-{\beta}-D-galactopyranosyl]-sn-glycerol$ (1) by chemical and spectroscopic methods.
Yoon, Sun Young;Kang, Ho Bum;Ko, Young-Eun;Shin, Su-Hyun;Kim, Young-Jun;Sohn, Ki-Young;Han, Yong-Hae;Chong, Saeho;Kim, Jae Wha
IMMUNE NETWORK
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제15권2호
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pp.100-109
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2015
Controlling balance between T-helper type 1 (Th1) and T-helper type 2 (Th2) plays a pivotal role in maintaining the biological rhythm of Th1/Th2 and circumventing diseases caused by Th1/Th2 imbalance. Interleukin 4 (IL-4) is a Th2-type cytokine and often associated with hypersensitivity-related diseases such as atopic dermatitis and allergies when overexpressed. In this study, we have tried to elucidate the function of 1-palmitoyl-2-linoleoyl-3-acetyl-rac-glycerol (EC-18) as an essential modulator of Th1/Th2 balance. EC-18 has showed an inhibitory effect on the production of IL-4 in a dose-dependent manner. RT-PCR analysis has proved EC-18 affect the transcription of IL-4. By analyzing the phosphorylation status of Signal transducer and activator of transcription 6 (STAT6), which is a transcriptional activator of IL-4 expression, we discovered that EC-18 induced the decrease of STAT6 activity in several stimulated cell lines, which was also showed in STAT6 reporter analysis. Co-treatment of EC-18 significantly weakened atopy-like phenotypes in mice treated with an allergen. Collectively, our results suggest that EC-18 is a potent Th2 modulating factor by regulating the transcription of IL-4 via STAT6 modulation, and could be developed for immune-modulatory therapeutics.
The aerial parts of garland (Chrysanthemum coronarium L.) were extracted in 80% aqueous methanol (MeOH) and the concentrated extract was then partitioned using ethyl acetate (EtOAc), n-butanol (n-BuOH), and $H_2O$, successively. EtOAc and n-BuOH fractions resulted in 4 glycerides with the application of octadecyl silica gel and silica gel column chromatography. The chemical structures of the glycerides were determined using several spectroscopic methods, including nuclear magnetic resonance (NMR) and mass spectrometry (MS) as (2S)-1-O-palmitoyl-sn-glycerol (1), (2S)-1-O-oleoyl-2-O-oleoyl- 3-O-$\beta$-D-galactopyranosyl-sn-glycerol (2), (2S)-1-O-palmitoyl-2-O-linoleoyl-3-O-phosphorouscholine-sn-glycerol (3), and (2S)-1-O-linolenoyl-2-O-palmitoyl-3-O-[$\alpha$-D-galactopyrasyl-($1{\rightarrow}6$)-$\beta$-D-galactopyranosyl]-sn-glycerol (4). The free fatty acids of these glycerides were determined with gas chromatography (GC)-MS analysis following alkaline hydrolysis and methylation. These glycerides demonstrated an inhibitory effect on acyl-CoA: cholesterol acyltransferase (ACAT, compound 1: $45.6{\pm}0.2%$ at $100{\mu}g/mL$), diacylglycerol acyltransferase (DGAT, compound 1: $59.1{\pm}0.1%$ at $25{\mu}g/mL$), farnesyl protein transferase (FPTase, compound 2: $98.0{\pm}0.1%$; compound 3: $55.2{\pm}0.1%$ at $100{\mu}g/mL$), and $\beta$-secretase ($IC_{50}$, compound 4: $2.6{\mu}g/mL$) activity. This paper is the first report on the isolation of these glycerides from garland and their inhibitory activity on ACAT, DGAT, FPTase, and $\beta$-secretase.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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