Complementary DNAs (cDNAs) to the coat protein gene of an ordinary Korean strain of potato virus Y (PVY-OK) isolated from potato (cv. Superior) were synthesized and cloned into a plasmid pUC119 and sequenced. The RNA of the virus propagated in tobacco (Nicotinaa sylvestris) was extracted by the method of phenol extraction. The first strand of cDNAs to the coat protein penomic RNA of the virus was made by Moloney murine leukemia virus reverse transcriptase. The cDNA were synthesized and amplified by the method of polymerase chain reaction (PCR) using a pair of oligonucleotide primers. PVYCP3P and PVYCP3M. The size of cDNAs inserted in pUC119 plasmid was estimated as about 840 bp upon agarose gel electrophoresis. Double stranded cDNAs were transformed into the competent cell of E. coli JM109. Sequence analysis of cDNAs was conducted by the dideoxynucleotide chain termination method. Homology of cDNAs of the PVY-OK coat protein genomic RNA with those of PVY-O (Japan), PVY-T (Japan), PVY-TH (Japan), PVYN (The Netherlands),and PVYY (France) was represented as 97.3%, 88.9%, 89.3%, 89.6% and 98.5%, respectively. Homology at the amino acid level turned out to the be 97.4%, 92.5%, 92.9%, 92.9% and 98.5%, respectively.
The vein necrotic strain of Potato Virus Y (PVY - VN) and black shank (Phyto-phthora parasitica var. nicotianae) are the two major diseases causing severe damages especially in burley tobacco (N. tabacum L.) area in Korea. A new tobacco variety, KB 111, resistant to PVY and black shank disease, was developed by Korea Ginseng & Tobacco Research Institute in 1997. It is a male sterile(MS) F$_1$ hybrid of the cross between MS TC 613 and KB 108. KB 111 was compared to Burley 21 on the agronomic characteristics and disease resistances in performance tests: It possessed upright growth habit and flowered two days later than Burley 21. It was resistant to both PVY and black shank and yielded about 3% more cured leaf than Burley 21, but other characteristics are very simiar to those of Burley 21. The chemical composition and physical properties of the cured leaf of KB 111 were as much acceptable as those of Burley 21 while it produced average yield of good quality leaf and appeared to resistant to PVY and black shank disease on regional farm test in 1998.
A total of 163 virus infected pepper plants(Capsicum annuum L.) collected from various pepper growing regions in Korea were investigated on the presence of tobacco mosaic virus (TMV), cucumber mosaic virus (CMV), potato virus X(PVX), potato virus Y(PVY) and alfalfa mosaic virus (AMV) by serological methods. Van Slogteren's microprecipitin test was applied for the testing of TMV, PVX and PVY from infected plants, and Ouchterlony agar double diffusion test was used for CMV and AMV. Results obtained are as follows: 1. TMV, CMV, PVX, PVY and AMV were found to occur on the pepper plants growing in Korea. 2. The prevalence of each of these viruses among the 163 pepper plants investigated was in the order of CMV: 93 plants(57.0%)>TMV: 91 plants (55.8%)>AMV: 58 plants (35.6%)>PVY: 40 plants (24.5%)> PVX:6 plants(3.7%). 3. Among the 163 plants investigated, 72 plants (44%) showed infection with one kind of virus and 91 plants (56%) showed mixed infection with more than two different viruses. In general, heavier damage of the plants was observed from mixed infection. 4. The results of serological identification of pepper viruses coincided with those results obtained by sap inoculation experiment conducted at the Horticultural Experiment Station along with present investigation. Thus the serological techniques applied in this experiment proved to be very reliable for the identification of TMV, CMV, PVX, PVY and AMV from pepper plants infected with these viruses.
Proceedings of the Korean Society of Tobacco Science Conference
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1997.10a
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pp.134-152
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1997
Plant viruses of tobacco including tobacco mosaic virus (TMV) and potato virus Y (PVY) cause severe economic losses in leaf-tobacco production. Cultural practices do not provide sufficient control against the viruses. Use of valuable resistant cultivars is most recommendable for the control of the viruses. However, conventional breeding programs are not always proper for the development of virus-resistant plants mostly owing to the frequent lack of genetic sources and introduction of their unwanted properties. Therefore, we tried to develop virus-resistant tobacco plants by transforming commercial tobacco cultivars, NC 82 and Burley 21, with coat protein (CP) or replicase (Nlb) genes of TMV and PVY necrosis strain (PVY-VN) with or without untranslated region (UTR) and with or without mutation. Each cDNA was cloned and inserted in plant expression vectors with 1 or 2 CaMV 35S promotors, and introduced into tobacco leaf tissues by Agrobacterium tumefaciens LBA 4404. Plants were regenerated in kanamycin-containing MS media. Regenerated plants were tested for resistance to TMV and PVY In these studies, we could obtain a TMV-resistant transgenic line transformed with TMV CP and 6 genetic lines with PVY-VN cDNAs out of 8 CP and replicase genes. In this presentation, resistance rates, verification of gene introduction in resistant plants, stability of resistance through generations, characteristics of viral multiplication and translocation in resistant plants, and resistance responses relative to inoculum potential and to various PVY strains will be shown. Yield and quality of leaf tobacco of a promising resistant tobacco line will be presented.
Potato virus Y (PVY) is an important viral disease in burley tobacco in Korea and is mostly transmitted by green peach aphid, Myzus penicae, in nature. Effects of barrier nets on the immigration of the aphid population into tobacco fields and on the control of PVY were investigated in 3 tobacco fields with 1.8 m - height polyethylene (PE) nets on their outer - sides in Iseo - Myeon, Wanju - Kun, Cheonbuk. Immigration of aphids to the tobacco yields started at late April and reached maximum at early June. The immigrating aphid population was apparently blocked by the barrier nets to be reduced by 54-73%. PVY severity was also reduced by the barrier nets. However, the control value was variable, ranging 24-67%, which suggests that effect of the PE net barrier on the prevention of aphid-borne virus might be variable depending on the location and slope of the fields.
Potato virus Y (PVY) and potato leafroll virus (PLRV) are among the most damaging potato viruses and prevalent in most potato growing areas. In this study, cryopreservation was used to eradicate PVY and PLRV using two cryogenic methods. Potato shoot tips proliferated in vitro were cryopreserved through droplet-vitrification and encapsulation-vitrification using plant vitrification solution 2 (PVS2; 30% glycerol + 15% dimethyl sulfoxide + 15.0% ethylene glycol + 13.7% sucrose) and modified PVS2. Both cryogenic procedures produced similar rates of survival and regrowth, which were lower than those from shoot tip culture alone. The health status of plantlets regenerated from shoot tip culture alone and cryopreservation was checked by reverse transcription-polymerase chain reaction. The frequency of virus-free plants regenerated directly from highly proliferating shoot tips reached 42.3% and 48.6% for PVY and PLRV, respectively. In comparison, the frequency of PVY and PLRV eradication after cryopreservation was 91.3~99.7% following shoot-tip culture. The highest cryopreserved shoot tip regeneration rate was observed when shoot tips were 1.0~1.5 mm in length, but virus eradication rates were very similar (96.4~99.7%), regardless of shoot tip size. This efficient cryotherapy protocol developed to eliminate viruses can also be used to prepare potato material for safe long-term preservation and the production of virus-free plants.
PARK, Young Doo;RONIS D.H.;DUYSEN M.E.;CHENG Z.M.;LORENZEN J.H.
Korean Journal of Plant Tissue Culture
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v.24
no.5
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pp.313-317
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1997
Leaf segments of the potato (Solanum tuberosum L.) genotypes, ND860-2, Norchip, Russet Norkotah, Goldrush, and Norqueen Russet were transformed with the coat protein gene of potato virus Y (PVY). The white-skinned genotypes, ND860-2 and Norchip, were easily transformed and regenerated into shoots, whereas the three russet-skinned genotypes had low frequencies of regeneration. Transformed shoots were generally recovered in four to six weeks. Antibody to PVY coat protein detected a single band of 30 kD in western blots of transgenic plants. Transformed plants had a normal phenotype in the greenhouse and many showed a delayed buildup of PVY following inoculation. Several transgenic lines had negative ELISA readings 85 days after inoculation. Transgenic lines which did not show detectable levels of PVY antigen will be further tested for resistance to PVY.
A total of 40 virus infected tobacco plants (Nicotiana tabaccum L.) with various symptom types Were collected from Bucheon and Jeonju area by its symptoms were investigated on the incidence of tobacco mosaic virus (TMV), cucumber mosaic virus (CMV), alfalfa mosaic virus (AMV), potato virus X (PVX) and potato virus Y (PVY) by serological methods. van Slogteren's microprecipitin test was applied for the testing of PVX and PVY from infected plants and Ouchterlony agar double diffusion test was used for CMV, TMV and AMV. Results obtained are as follows: 1. TMV, CMV, AMV, PVX and PVY wcre found to occur on the tobacco plants growing in Korea. 2. The prevalence of each of these viruses among the 40 tobacco plants investigated was in the order of AMV: $(67.5\%)>CMV:(60.0\%)>TMY:(47.5\%)>PVY:(17.5\%)>PVX: (10.0\%).$ 3. In Burley variety, the percentage of infection by TMV was $15\%$, whereas it was as high as $80\%$ in Hicks variety. 4. Among the 40 tobacco plants investigated, $37.5\%$ showed infection with one kind of virus whereas the remaining $62.5\%$, revealed mixed infection with more than two different viruses.
Kim, Jae-Hyun;Park, Yong-Hack;Chung, Youl-Young;Kim, Kwang-Chul;Shin, Seung-Gu;Kuem, Wan-Soo
Journal of the Korean Society of Tobacco Science
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v.31
no.2
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pp.69-74
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2009
Potato Virus Y (PVY), PVY-vein necrosis strain, causes severe damage at growth, yield and leaf quality on flue-cured tobacco in Korea. The development of PVY resistant flue-cured varieties without quality deterioration is therefore urgently desired. The flue-cured tobacco, KF120 (Korea Flue-cured 120), was a male-sterile (ms) $F_1$ hybrid derived from the cross between msKF117 and KF0007-7. msKF117 was developed from the cross of NC82 with N. africana and KF0007-7 was developed from the cross of KF117 with NC82. The agronomic characteristics and disease resistance of KF120 was evaluated during 2006-2007 field performance test. It showed better growth characteristics and yield performance than standard cultivar KF109. It had 2 more leaves per plant, flowered 2 days later than KF109. The yield of cured leaf of KF120 was increased by about 5% compared to KF109. The chemical composition and physical properties of the cured leaf of KF120 were as much acceptable as those of KF109. KF120 showed high resistance to PVY compared to KF109. It showed a similar mode of resistance to bacterial wilt and black shank as was found in KF109.
The cDNAs derived from the coat protein (CP) genes of six plant RNA viruses, tobacco mosaic virus-pepper strains (TMV-P) and -ordinary strain (TMV-OM), potato virus Y (PVY), turnip mosaic virus (TuMV), cucumber mosaic virus (CMV) and potato leafroll virus (PLRV), were subcloned into the transcription vector, pSPT18, containing SP6 and T7 promoters. The digoxigenin (DIG)-labeled RNA polymerase after linearlization of the cloned pSPTs with XbaI or SacI, and were tested for their sensitivities for the detection of the six viruses. In slot-blot hybridization, dilution end points for the detection of TMV-P and TMV-OM were 10-4, while those of PVY, TuMV and CMV were 10-3. PLRV was detected at the dilution of 10-2. When each RNA probe was applied for the detection of the viruses in the preparations from the leaf disks (8 mm in diameter, and 12 to 15 mg in weight) of infected natural host plants, TMV-P, TMV-OM and TuMV could be detected from one disk, while PVY from 1 or 2 disks. CMV was detected in the preparation from two disks, and PLRV from three disks. With DIG-labeled RNA probe, PVY was detected at 5 days after inoculation, but with ELISA the virus was detected at 8 days after inoculation to tobacco (Nicotiana tabacum cv. Xanthi nc) plants on which symptoms appeared at 9 days after inoculation. No difference was observed in cross reaction between the RNA probes for the detection of TMV-P and TMV-OM.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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