토양의 생물학적 복원은 산업화로 무차별하게 오염되어 있는 국내 산업단지 주변과 지하수 환경보전을 위한 경제적 도구로 인식되어왔다. 본 연구는 친환경적 생물복원을 위한 기초자료를 얻기 위하여 유류로 오염된 양토에서 Pseudomonas sp. (KCCM 40055)를 접종한 polyurethane 매체환경을 적용, 유류의 성분중 PAH 분해도를 조사하였다. 다공성 매체로서 재현성이 뛰어나며 미생물 부착에 활용되어 온 polyurethane foam을 사용하여 미생물 부착성을 아울러 조사하였다. 사용된 PU중 최저공극 foam인 SR9-35C/G 의 경우 부착률과 PAH분해율이 가장 높았으며 토양함수율 증가에 따라 그 효율이 증가하였다.
연안오염퇴적물에 함유된 유기물질과 PAHs의 현장정화를 위한 생물활성촉진제의 효능을 파일럿 규모의 현장실험을 통하여 1년간 평가하였다. 실험 해역의 수온은 계절적인 요인으로 인해 $16.5^{\circ}C$에서 $21^{\circ}C$까지 변화가 있었으나, 파일럿 반응조의 오염퇴적물의 pH는 8.4-8.5로서 비교적 일정하였다. 파일럿 실험종료 후 바탕시험구와 초산, 황산이온, 질산이온을 함유한 생물활성촉진제를 주입한 오염퇴적물의 화학적 산소요구량은 각각 39% 및 79%까지 감소하였으며, 휘발성고형물은 초기 약 15 g/kg에서 7 g/kg 및 2.5 g/kg까지 각각 감소하였다. PAHs는 2- ,3- ,4- ,5-ring 과 6-ring 16PAHs를 평가하였으며, 생물활성촉진제를 주입한 오염퇴적물에서 2-ring 화합물인 나프탈렌은 실험시작 2개월 후 100%(바탕시험구의 감소율 55.6%)까지 감소되어 가장 빨랐고, 12개월 후 3-ring 및 4-ring PAHs의 감소율은 모두 100%(바탕시험구의 감소율 46%-100%)에 달하였다. 5-ring과 6-ring PAHs의 12개월 후의 감소율은 바탕시험구와 생물활성촉진제를 투여한 오염퇴적물에서 각각 26%-87% 및 77%-100%로 평가되었다. 연안오염퇴적물에 투입한 생물활성촉진제는 유기물질 및 난분해물질인 PAHs의 제거속도를 향상시킬 수 있는 것으로 평가되었다.
Polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) are ubiquitous in the environment. They are highly toxigenic and carcinogenic. Probiotic bacteria isolated from fermented foods were tested to check their ability to degrade and/or detoxify PAHs. Five probiotic bacteria with distinct morphologies were isolated from a mixture of 26 fermented foods co-cultured with benzo(a)pyrene (BaP) containing Bushnell Haas minimal broth. Among them, B. velezensis (PMC10) significantly reduced the abundance of BaP in the broth. PMC10 completely degraded BaP presented at a lower concentration in broth culture. B. velezensis also showed a clear zone of degradation on a BaP-coated Bushnell Haas agar plate. Gene expression profiling showed significant increases of PAH ring-hydroxylating dioxygenases and 4-hydroxybenzoate 3-monooxygenase genes in B. velezensis in response to BaP treatment. In addtion, both live and heat-killed B. velezensis removed BaP and naphthalene (Nap) from phosphate buffer solution. Live B. velezensis did not show any cytotoxicity to macrophage or human dermal fibroblast cells. Live-cell and cell-free supernatant of B. velezensis showed potential anti-inflammatory effects. Cell-free supernatant and extract of B. velezensis also showed free radical scavenging effects. These results highlight the prospective ability of B. velezensis to biodegrade and remove toxic PAHs from the human body and suggest that the biodegradation of BaP might be regulated by ring-hydroxylating dioxygenase-initiated metabolic pathway.
Soils contaminated by hazardous hydrophobic organic compounds, such as polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs), have become a major environmental issue due to toxic and carcinogenic properties of those compounds. In this work, we investigated effects of various metabolic inducers on phenanthrene biodegradation. Biodegradation tests were peformed with two different Pseudomonads: Pseudononrdia hydrocarboxydans (Gram positive) and Pseudomonas putida (Gram negative). Intermediates of phenanthrene metabolism (1-hydroxy-2-naphthoate, salicylate, catechol, phthalate and protocatechuate) were selected as inducers. The tests indicated that 1-hydroxy-2-naphthoate was the most effective inducer and enhanced the phenanthrene degradation rate up to 5.7 times, even though all the others also had induction ability to some extent. The effective induction could be achieved even at a low concentration of 1-hydroxy-2-naphthoate. Addition of metabolic inducers would be an attractive trick for the successful bioremediation of PAH-contaminated soil.
Anthracene is a PAH that is not readily degraded, plus its degradation mechanism is still not clear. Thus, two strains of anthracene-degrading bacteria were isolated from long-term petroleum-polluted soil and identified as Sphingomonas sp. 12A and Pseudomonas sp. 12B by a 16S rRNA sequence analysis. To further enhance the anthracene-degrading ability of the two strains, the biosurfactants produced by Pseudomonas aeruginosa $W_3$ were used, which were characterized as rhamnolipids. It was found that these rhamnolipids dramatically increased the solubility of anthracene, and a reverse-phase HPLC assay showed that the anthracene degradation percentage after 18 days with Pseudomonas sp. 12B was significantly enhanced from 34% to 52%. Interestingly, their effect on the degradation by Sphingomonas sp. 12A was much less, from 35% to 39%. Further study revealed that Sphingomonas sp. 12A also degraded the rhamnolipids, which may have hampered the effect of the rhamnolipids on the anthracene degradation.
The process of biodegradation in lingo-cellulosic materials is critically relevant to biospheric carbon. The study of this natural process has largely involved laboratory investigations, focused primarily on the biodegradation and recycling of agricultural by-products, generally using basidiomycetes species. In order to collect super white rot fungi and evaluate its ability to degrade lingo-cellulosic material, 35 fungal strains, collected from forests, humus soil, livestock manure, and dead trees, were screened for enzyme activities and their potential to decolorize the commercially used Poly-R 478 dye. In the laccase enzymatic analysis chemical test, 33 white rot fungi and 2 brown rot fungi were identified. The degradation ability of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) according to the utilized environmental conditions was higher in the mushrooms grown in dead trees and fallen leaves than in the mushrooms grown in humus soil and livestock manure. Using Poly-R 478 dye to assess the PAH-degradation activity of the identified strains, four strains, including Agrocybe pediades, were selected. The activities of laccase, MnP, and Lip of the four strains with PAH-degrading ability were highest in Pleurotus incarnates. 87 fungal strains, collected from forests, humus soil, livestock manure, and dead trees, were screened for enzyme activities and their potential to decolorize the commercially used Poly-R 478 dye on solid media. Using Poly-R 478 dye to assess the PAHdegrading activity of the identified strains, it was determined that MKACC 51632 and 52492 strains evidenced superior activity in static and shaken liquid cultures. Subsequent screening on plates containing the polymeric dye poly R-478, the decolorization of which is correlated with lignin degradation, resulted in the selection of a strain of Coriolus versicolor, MKACC52492, for further study, primarily due to its rapid growth rate and profound ability to decolorize poly R-478 on solid media. Considering our findings using Poly-R 478 dye to evaluate the PAH-degrading activity of the identified strains, Coriolus versicolor, MKACC 52492 was selected as a favorable strain. Coriolus versicolor, which was collected from Mt. Yeogi in Suwon, was studied for the production of the lignin-modifying enzymes laccase, manganese-dependent peroxidase (MnP), and lignin peroxidase (LiP).
A phenanthrene-degrading bacterium was isolated from an oil-spilled intertidal sediment sample and identified as Sphingomonas sp. KH3-2. The strain degraded polycyclic aromatic compounds such naphthalene, fluorene, biphenyl, and dibenzothiophene. When strain KH3-2 was cultured for 28 days at 25C, a total of 500 ppm of phenanthrene was degrated with a concomitant production of biomass and Folin-Ciocalteau reactive aromatic intermediates. Analysis of intermediates during phenanthrene degradation using high-performance liquid chromatography and gas chromatography/mass spectrometry indicated that Sphingomonas sp. KH3-2 primarily degrades phenanthrene to 1-hydroxy-2-naphthoic acid (1H2NA) and further metabolizes 1H2NA through the degradation pathway of naphthalene.
Mycolic acid-containing gram-positive bacteria, so called nocardioform actinomycetes, have become a great interest to environmental microbiologists due to their metabolic versatility, multidegradative capacity and potential for bioremediation of priority pollutants. For example, Rhodococcus rhodochrous N75 was able to metabolize 4-methy1catechol via a modified $\beta$-ketoadipate pathway whereby 4-methylmuconolactone methyl isomerase catalyzes the conversion of 4-methylmuconolactone to 3-methylmuconolactone in order to circumvent the accumulation of the 'dead-end' metabolite, 4-methylmuconolactone. R. rhodochrous N75 has also shown the ability to transform a range of alkyl-substituted catechols to the corresponding muconolactones. A novel 3-methylmuconolactone-CoAsynthetase was found to be involved in the degradation of 3-methylmuconolactone, which is not mediated in a manner analogous to the classical $\beta$-ketoadipate pathway but activated by the addition of CoA prior to hydrolysis of lactone ring, suggesting that the degradative pathway for methylaromatic compounds by gram-positive bacteria diverges from that of proteobacteria. Mycobacterium sp. Strain PYR-l isolated from oil-contaminated soil was capable of mineralizing various polyaromatic hydrocarbons (PAHs), such as naphthalene, phenanthrene, pyrene, fluoranthrene, 1-nitropyrene, and 6-nitrochrysene. The pathways for degradation of PAHs by this organism have been elucidated through the isolation and characterization of chemical intermediates. 2-D gel electrophoresis of PAH-induced proteins enabled the cloning of the dioxygenase system containing a dehydrogenase, the dioxygenase small ($\beta$)-subunit, and the dioxygenase large ($\alpha$)-subunit. Phylogenetic analysis showed that the large a subunit did not cluster with most of the known sequences except for three newly described a subunits of dioxygenases from Rhodococcus spp. and Nocardioides spp. 2-D gel analysis also showed that catalase-peroxidase, which was induced with pyrene, plays a role in the PAH metabolism. The survival and performance of these bacteria raised the possibility that they can be excellent candidates for bioremediation purposes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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