생체내 중요한 면역조절물질의 하나인 IL-l은 주로 Macrophage로부터 분비되어 각종 면역반응에 관여하는 것으로 알려져 있는데 이러한 Macrophage에 의한 IL-I 생성에 미치는 Histamine의 효과를 검토하고자 Mac-rophage-like cell line인 $P388D^1$세포에 의한 IL-1생성에 미치는 Histamine의 첨가효과는 $10^-^8M~10^-^3M$에 이르기까지 전 범위에서 농도의존적으로 IL,-1생성을 촉진시켰으며 첨가후 배양시간에 있어서는 24~36시간이 가장 크게 상승되었다. Histamine에 의한 Macropahge로 부터의 IL-1생성은 EGTA 및 $Co^2^+$의 첨가로 인하여 농도의존적으로 저하되었으며 이 결과는 Histamine의 IL-1 생성촉진작용이 세포내로의 $Ca^2^+uptake가 signal 역할을 하고 있음을 시사한다. $P388D_1$세포로의 $Ca^2^+$uptake양을 동정한 결과는 Histamine의 $10^-^7M$에서 $10^-^3M$까지 농도의존적으로 $Ca^2^+3M$유입이 촉진되는 결과를 나타내었다.
The objective of this study was to evaluate and compare the antitumor activity of different solvent fractions (ethanol, dichloromethane, ethyl acetate, butanol and water) of the Auricularia auricula-judae 70% ethanol extract on the P388D1 macrophage and sarcoma 180 cells. A dose-dependent antitumor activity of each solvent fraction (from 0.01 mg/ml to 0.3 mg/ml) was shown against both cell types. These cytotoxic effects of all the tested fractions were confirmed on the MTT and SRB assays, without statistical differences each other. $IC_{50}$ value of dichloromethane fraction was 94.2 ${\mu}g/ml$ against sarcoma 180 cells lower than any other solvent fractions. The potent antitumor effect of the dichloromethane (DCM) fraction was also found against solid tumor in BALB/c mice. The splenomegaly and higher splenic index were found in tumor-bearing mice, with the DCM fraction returning to the negative control values. Thus, the results indicated the dichloromethane fraction may have potential ingredients as antitumor candidates.
These experiments were conducted to investigate the effects of Glycyrrhizae Radix extract(GR) on histamine synthesis, lymphocyte blastogenesis in C57BL/6J mice splenocytes, IL-1 production, $Ca^{2+}$ uptake by macrophage-like P388D$_{1}$ cells and plaque forming cell assay against SRBC. Histamine contents, lymphocyte blastogenesis, IL-1 activity, $Ca^{2+}$ uptake and plaque forming cell were determined by enzyme isotope method, [$^{3}$H]-thymidine incorporation, C3H/HeJ mouse thymocytes proliferation, the addition of 5 $\mu$Ci/ml $^{45}Ca^{2+}$ to P388D$_{1}$ cell suspension and assay to sheep red blood cell, respectively. Cytotoxicity, which was expressed as 50% mortality, was occurred by the addition of GR(10$^{-3}$g/ml). Histamine production in mouse spleen cell culture was significantly increased by 48 hour incubation added 0.25$\mu\textrm{g}$/ml of Con A. Con A-dependent T-lymphocyte proliferation was also enhanced by the addition of 0.25 $\mu\textrm{g}$/ml of Con A. GR depressed histamine contents at 10$^{-9}$~10$^{-4}$g/ml. and Con A (0.25 $\mu\textrm{g}$/ml) dependent T-lymphocyte proliferation at 10$^{-5}$~10$^{-4}$g/ml. IL-1 activity was significantly decreased by 10$^{-8}$~10$^{-4}$g/ml of GR. $Ca^{2+}$ uptake was not changed by GR, but antibody production markedly increased at 10.0~50.0 mg/kg of GR. From the above results, it is suggested that GR have immuno-regulatory action; GR decreased cell-mediated immune response and increased antibody production by B lymphocyte at high doses.
These experiments were conducted to investigate the effects of glycyrrhizin(GL) and glycyrrhetinic acid(GA) on histamine synthesis, lymphocyte blastogenesis in C57BL/6J mice splenocytes, IL-1 production, $Ca^{2+}$ uptake by macrophage-like P388D$_{1}$ cells and plaque forming cell assay against SRBC. Histamine contents, lymphocyte blastogenesis, IL-1 activity, $Ca^{2+}$ uptake and plaque forming cell were determined by enzyme isotope method, [sup 3/H]-thymidine incorporation, C3H/HeJ mouse thymocytes proliferation, the addition of 5 $\mu$Ci/ml $^{45}$Ca$^{2+}$ to P388D$_{1}$, cell suspension and assay to sheep red blood cell, respectively. Cytotoxicity, which was expressed as 50% mortality, was occurred by the addition of GL(10$^{-3}$M) and GA(10$^{-4}$M). Histamine production in mouse spleen cell culture was significantly increased by the addition of 0.25 $\mu\textrm{g}$/ml of Con A, after 48 hour incubation. Con A dependent T-lymphocyte proliferation was also enhanced by the addition of 0.25 .mu.g/ml of Con A. The effects of GL on histamine contents and T-lymphocyte proliferation were significantly decreased at high dose (10$^{-5}$M), while IL-1 activity was remarkably suppressed by 10$^{-8}$~10$^{-4}$M of GL. $Ca^{2+}$ uptake was not changed, but antibody production was increased by GL(10 mg/kg). GA inhibited histamine contents at 10$^{-9}$~10$^{-7}$ and depressed Con A (0.25 $\mu\textrm{g}$/ml) dependent T-lymphocyte proliferation at 10$^{-7}$~10$^{-5}$M of GA, but increased suboptimal dose (Con A 0.1 $\mu\textrm{g}$/ml) at 10$^{-9}$~10$^{-7}$M of GA. IL-1 activity was suppressed by 10$^{-8}$~10$^{-4}$M of GA and $Ca^{2+}$ uptake was enhanced by 10$^{-9}$~10$^{-6}$ of GA, but antibody production was not changed by GA. From the above results, it is suggested that GL and GA have immuno-regulatory action. GL decreased cell-mediated immune response, and increased humoral immune response at high dose. On the other hand, low dose of GA enhanced cell-mediated immune response, while high doses of GA decreased humoral immune reaction.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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