In order to clone the peptide synthetase gene form Lysobacter lactamgenus IFO 14,288, the gene fragments were amplified using primers for the adenylation domain and the thionylation domain of the peptide synthetase genes in other organisms by polymerase chain reaction (PCR). The resulting 0.5-kb fragment was cloned in a pGEM-T vector, and the nucleotide sequences were determined. Six different PCR products were obtained; three were identified to be a part of L-$\alpha$-aminoadipyl-L-cysteinyl-D-valine (ACV) synthetase and three to be other peptide synthetases. Using each of the two different classes of PCR products as mixed probes, a cosmid library of L. lactamgenus chromosomal DNA constructed in a pHC79 vector was screened by an in situ hybridization procedure, and one positive clone was selected which was bound by peptide synthetase gene fragments as well as ACV synthetase gene fragments. The partial sequence analysis formt he obtained pPTS-5 cosmid showed th presence of more than two open reading frames. These were for two putative membrane transporters, which were homologous with several integral membrane proteins including the ABC transporter ATP-binding protein of E. coli (YbjZ) and the metal ion uptake protein of Bacillus subtilis (YvrN). A 45% homology was also found between the two transporter proteins at the carboxy terminus. Through a hydropathy analysis and transmembrane analysis. 4-5 transmembrane domains were found in these two proteins. When the genes were expressed in Escherichia coli, the gene products inhibited the hose cell growth, probably due to the disturbance of the membrane transport system.
Journal of the Korean Society of Fisheries and Ocean Technology
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v.53
no.1
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pp.49-59
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2017
The objective of this study was to investigate the growth rate and the optimal stocking density of sea cucumbers. Grow-out was studied in situ by conducting a follow-up survey using visible implant elastomer (VIE) tags. The rearing systems were made of polypropylene pipe for the frames and netting. The experiment ran for 70 days near Yeosu, Korea in the water depth of about 7 m. A total of 576 sea cucumbers which have three groups of body sizes (small: 5.15, medium: 12.34 and large: 23.26 g) were used. The five groups of stocking densities (150, 300, 450, 600 and $850g/m^2$) in rearing system for sea cucumber were considered. Sea cucumbers were fed a mixed diet (mud, mineral, fish meal, etc.). The feed was supplied to 10% of their body wet weight once every 7 days. The survival rate (73%) of sea cucumber in $850g/m^2$ was lower than those of other density groups ($150g/m^2$: 89%, $300g/m^2$: 84%, $450g/m^2$: 78% and $600g/m^2$: 86%). The survival rate of medium size group was higher than those of small and large groups regardless of the density (P<0.05). Most of density groups have no significant difference except for $850g/m^2$ (P>0.05). The growth rate of small size group ($0.63%day^{-1}$) was higher than those of medium ($0.38%day^{-1}$) and large ($0.34%day^{-1}$) group regardless of the density (P<0.05). The threshold water temperature was $11.0^{\circ}C$ for sea cucumber growth in winter season.
Landing phase is one of the crucial and most important phases during robotic aerospace explorations. It concerns the impact of the landing module of a spacecraft on a celestial body. Risks and uncertainties of landing are mainly due to the morphology of the surface, the possible presence of rocks and other obstacles or subsidence. The present work quotes results of a computational analysis direct to investigate the stability during the landing phase of a lander on Phobos, a Mars Moon. The present study makes use of available software tools for the simulation analyses and results processing. Due to the nature of the system under consideration (i.e., large displacements and interaction between several systems), multibody simulations were performed to analyze the lander's behavior after the impact with the celestial body. The landing scenario was chosen as a result of a DOE (Design of Experiments) analysis in terms of lander velocity and position, or ground slope. In order to verify the reliability of the present multibody methodology for this particular aerospace issue, two different software tools were employed in order to emphasize two different ways to simulate the crash-box, a particular component of the system used to cushion the impact. The results show the most important frames of the simulations so as to provide a general idea about how lander behaves in its descent and some trends of the main characteristics of the system. In conclusion, the success of the approach is demonstrated by highlighting that the results (crash-box shortening trend and lander's kinetic energy) are comparable between the two tools and that the stability is ensured.
A bacterial artificial chromosome library of Pectobacterium carotovorum 35 was constructed to characterize the genome and to sequence its hrp region. The hrp cluster of P. carotovorum 35 consisted of 26 open reading frames in five operons. A promoter-based green fluorescent protein technology was used to identify the genes regulated by the alternative sigma factor, HrpL, in P. carotovorum 35. The majority of the selected clones contained the hrpJ operon promoter sequence, which harbors a hrp box, but no putative hrp boxes were detected within the promoter sequences of two other hrpL-regulated genes encoding for pectate lyase and large repetitive protein. Although the promoters of five other hrp operons also contained hrp boxes, their expression was not HrpL-dependent in the promoter-based selection in E. coli. However, transcriptional analysis showed that expression from all operons harboring hrp boxes, except for the hrpN operon, was reduced significantly in the hrpL mutant. The severity of soft-rot symptoms when the hrpL mutant was applied to the surface of tobacco leaves, mimicking natural infection, was greatly attenuated. These results indicate that the hrpL gene of P. carotovorum 35 may be involved in the development of soft-rot symptoms.
Probing Streptomyces albus ATCC 21838 chromosomal DNA with a proline tRNA sequence resulted in an isolation of a putative integrating element in the 6.4-kb EcoRI fragment. It was found that Streptomyces lividans TK-24 transformed with a cloned DNA fragment on a multicopy plasmid, produced a higher level of spore pigment and mycelial red pigment on a regeneration agar. Furthermore, the transformant S. lividans TK-24 produced a markedly increased level of undecylprodigiosin in a broth culture. A nucleotide sequence analysis of the cloned region revealed several open reading frames homologous to the integrases of integrating plasmids or temperate bacteriophages, signal-transducing regulatory proteins with a conserved ATP-binding domain, oxidoreductases ($\beta$-ketoacyl reductase), and an AraC-like transcriptional regulator. To examine the effect on antibiotic production, each coding region was overexpressed separately from the other genes in the region in S. lividans TK-24 with; pJHS3044 for the expression of the signal-transducing regulatory protein homologue, pJHS3045 for the homologue of oxidoreductase, and pJHS3051 for the homologue of the AraC-like transcriptional regulator. Phenotypic studies of S. lividans TK-24 strains harboring plasmids for the overexpression of individual genes suggested the following effects of the genes on antibiotic production: The oxidoreductase homologue stimulated the production of actinorhodin and undecylprodigiosin, which was influenced by the culture conditions; the homologue of the AraC-like transcriptional regulator was the most effective factor in antibiotic production within all the culture conditions tested; the signal-transducing regulatory protein homologue repressed the effect due to the homologue of the AraC-like transcriptional regulator, however, the antibiotic production was derepressed upon entering the stationary phase.
Oh, Min-Ji;Na, Kyeong Sook;Jung, Hwa Jin;Lee, Young Kuk;Ryu, Jae-San
Journal of Mushroom
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v.20
no.2
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pp.43-49
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2022
Pleurotus ostreatus is a globally cultivated mushroom crop. Cap color is a quality factor in P. ostreatus. However, cap color can spontaneously mutate, degrading the quality of the mushroom on the market. Early detection and removal of mutant strains is the best way to maintain the commercial value of the crop. To detect the cap color mutant Gonji7ho, molecular markers were developed based on insertion/deletions (InDels) derived from the comparison of mitogenomes of Gonji7ho and Gonji7hoM mushrooms. Sequencing, assembly, and comparative analysis of the two mitogenomes revealed genome sizes of 73,212 bp and 72,576 bp with 61 and 57 genes or open reading frames (ORFs) in P. ostreatus Gonji7ho and Gonji7hoM, respectively. Fourteen core protein-encoding genes, two rRNA, and 24 tRNA with some OFRs were predicted. Of the 61 genes or OFRs in the wild type, dpo, rpo, and two orf139 were missing (or remnant) in the mutant strain. Molecular markers were developed based on the sequence variations (InDels) between the two mitogenomes. Six polymorphic molecular markers could detect the mutated mitochondria by PCR. These results provide basic knowledge of the mitogenomes of wild-type and mutant P. ostreatus, and can be applied to discriminate mutated mitochondria.
A recombinant plasmid, pDH3, was obtained from the genomic library of Serattia marcescens KCTC 2172, and several recombinant subclones constructed from pDH3. The nucleotide sequence of a 5,137 bp segment, pPH4, was determined and three open reading frames were detected. The three ORFs encoded the phosphate specific transport (pst) operon, which was pstC, pstA, and pstB, with the same direction of transcription. Comparison of the pst operon of S. marcescens with that of other organisms revealed that the genes for pstS and phoU were missing. A potential CRP bonding site and pho box sequence was found in the upstream of the putative promoter at the regulatory region. Analysis of the nucleotide sequence showed that homology in amino acid sequences between the PstC protein and Yersinia sp., Vibrio sp., and Pseudomonas sp. were 49, 37 and 33%, respectively. The PstA protein and Yersinia sp., Vibrio sp., and Pseudomonas sp. showed homologies of 64, 51, and 47%, respectively. PstB protein and Methanocaldococcus sp., E. coli, and Mycoplasma sp. showed homologies of 60, 50, and 48%, respectively. The pst genes could be expressed in vivo and positively regulated by cAMP-CRP. The E. coli strain harboring plasmid pPH7, with pst genes, increased with the transport of phosphate.
Promoters inducible by paraquat, a superocide-generating agent, were isolated from Escherichia coli using a promoter-probing plasmid pRS415 with promoterless lacA gene. Twenty one promoters induced by paraquat were selected and further characterized. From sequence analysis, thirteen of the promoters were mapped to their specific loci on the Escherichia coli chromosome. Several promoters were mapped to the upstream of known genes such as usgl, katG, and mglB, whose relationships with superoxide response have not been previously reported. Other promoters were mapped to the upstream region of unknown open reading frames. Downstream of HC 96 promoter are uncharacterized ORFs whose sequences are homologous to ABC-transporter subunits. Downstream of HC84 promoter is an ORF encoding a transcriptional regulator-like protein, which contains a LysR family-specific HTH (helix-turn-helix) DNA bindign motif. We investigated whether these promoters belong to the soxRS regulon. All promoters except HC96 were found to belong to the soxRS regulon. The HC96 promoter was significantly induced by paraquat in the soxRS deletion mutant strain. The basal transcription level of three promoters (HE43, HC71, HD94) significantly increased at the stationary phase, implying that they are regulated by RpoS. However, paraquat inducibility of all promoters disappeared in the stationary phase, suggesting that SoxRS regulatory system is active only in rapidly growing cells.
IEIE Transactions on Smart Processing and Computing
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v.1
no.3
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pp.152-160
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2012
This paper proposes a frame-level rate control algorithm for low delay video applications to reduce the fluctuations in the bitrate. The proposed algorithm minimizes the bitrate fluctuations in two ways with minimal coding loss. First, the proposed rate control applies R-Q model to all frames including the first frame of every group of pictures (GOP) except for the first one of a sequence. Conventional rate control algorithms do not use any R-Q models for the first frame of each GOP and do not estimate the generated-bit. An unexpected output rate result from the first frame affects the remainder of the pictures in the rate control. Second, a rate-distortion (R-D) cost is calculated regardless of the hierarchical coding structure for low bitrate fluctuations because the hierarchical coding structure controls the output bitrate in rate distortion optimization (RDO) process. The experimental results show that the average variance of per-frame bits with the proposed algorithm can reduce by approximately 33.8% with a delta peak signal-to-noise ratio (PSNR) degradation of 1.4dB for a "low-delay B" coding structure and by approximately 35.7% with a delta-PSNR degradation of 1.3dB for a "low-delay P" coding structure, compared to HM 8.0 rate control.
Choi, In Young;Lee, Ju-Hoon;Kim, Hye-jin;Park, Mi-Kyung
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.27
no.12
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pp.2151-2155
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2017
Bacteriophages have gained substantial attention as biocontrol and biorecognition agents, substituting antibodies. In this study, a Salmonella Enteritidis-specific bacteriophage, KFS-SE1, was isolated, identified, and characterized. This Siphoviridae phage infects S. Enteritidis with high specificity. This phage is highly stable under various pH (5-11), temperature ($4-60^{\circ}C$), and organic solvent conditions. The KFS-SE1 genome consisted of 59,715 bp with 73 predicted open reading frames and 57.14% GC content; it had a complete set of genes required for phage reconstruction. Comparative phylogenetic analysis of KFS-SE1 revealed that it was very similar to the other Salmonella phages in the Siphoviridae family. These characteristics suggest that KFS-SE1 with its high specificity and host lysis activity toward S. Enteritidis may have various potential applications.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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