Ten isolates of the orchid mycorrhizal fungi were isolated from the roots of Korean native orchid plants (Cymbidium goeringii) which inhabitate mainly in southern and western areas of Korea. The growth rates and color of the isolates in potato dextrose agar (PDA) were various. Microscopic observations of the hyphae isolated were identified as Rhizoctonia repens and R. endophytica var endophytica or their related species. R. repens was isolated from the roots of the Korean native orchids, but R. endophytica var endophyica was only isolated from the roots of the commercial orchids introduced from foreign countries. Also, the polymorephic patterns of genomic DNA extracted from selected isolates were compared with those of DNA extracted from the orchid mycorrhizal fungi isolated previously and similar band patterns were observed among those isolates. Five isolates of R. repens were selected and cultured at the oatmeal agar for investigating their symbiosis with orchid plants. The symbiotic specificity between orchid plants and isolated orchid mycorrhizal fungi was observe by growing orchids about six months in the greenhouse. The symbiotic responses of the commercial orchid plants with selected isolates were quite different form different isolates due to the genetic variations.
Orchids are evolutionally known to be the most advanced plants in the order Liliales, and comprise approximately 1,000 genera and 35,000 species world-wide. In Korea, more than 110 species of Orchidaceae have been reported to be cultivated or to be collected in the wild. Orchids aye mostly dependant on orchid mycorrhizae(OM) throughout or in part of their life cycle. The OM endomycorrhizae belonging to basidiomycetes or rarley ascomycetes are needed for orchid seed germination. Various fungi, including plant pathogenic, antagonistic and symbiotic fungi, were isolated from the roots of orchid native to Korea. The OM fungi collected from the roots of Cymbidium goeringii were three species of Rhizoctonia namely, R. repens (anamorph state of Tulsanella repens), R. endophytica (Ceratobasidium cornigerum), and an unidentified species (possibly an anamorph of T. calospora). These symbiotic fungi induced peloton in the cortical cells of orchid roots, and differed biologically and in 18s rDNA sequences from plant pathogenic Rhizoctonia species. Also, the mycorrhyzal fungi enhanced the orchid root absorption of nitrogen sources and minerals from the soil. The activity of mycorrhizal fungal hyphae in the roots caused prevention from pathogenic fungi. In nature, the peloton is observed in the cortical cells of Cymbidium goeriingii roots, indicating mycorrhizal colonization in the native orchid roots. On the other hand, pathogenic fungi such as Fusarium and/or Rhizoctonia species are mostly isolated from commercial orchid plants. These suggest that application of symbiotic mycorrhizal fungi should be needed for orchid cultivation in nurseries and at the time of transplanting.
Kim, Wan-Gyu;Lee, Byung-Dae;Kim, Woo-Sik;Cho, Weon-Dae
The Plant Pathology Journal
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v.18
no.4
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pp.225-227
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2002
Moth orchid plants with yellowing blight and root rot symptoms were collected, and a total of 54 isolates of Fusarium spp. was obtained from roots and leaf bases of the diseased plants. The isolates were identified based on their morphological characteristics. Out of the 54 isolates of Fusarium spp., 42 isolates were identified as F. solani, 5 isolates as F. oxysporum, and 7 as F. proliferatum. Isolates of the three Fusarium spp. were tested for pathogenicity to moth orchid plants by artificial inoculation. All the Fusarium spp. induced root rot of the host plants. The symptoms progressed up to the basal part of the leaves, which later caused yellowing blight. The symptoms induced on the plants by artificial inoculation with the Fusarium spp. isolates were similar to those observed in greenhouses. The present study reveals that F. oxysporum, F. proliferatum, and F. solani cause root rot of moth orchid, and that F. solani is the main pathogen of the disease.
This study was to identify the orchid mycorrhizal fungi and to test whether the orchid plants antificially inoculated with this fungus showed better growth them uninoculated plants. Symbioses in the root cells of the native plants of Cymbidium goeringii collected were observed and the digestive forms of peletons were also observed in various native roots. Two types of hyphae, thick $(7{\sim}10\;{\mu}m)$ and thin $(2{\sim}4\;{\mu}m)$ in thickness, were conclusively found to be from various native orchid roots. The symbiotic fungus was isolated by several agars and identified as a Rhizoctonia repens or a R. endophytica var. endophytica. Symbioses on the plantlets of C. karnan and Cymbidium hybrid 'Onomoron' were evaluated as the isolates inoculated on oatmeal agars. The growth of plantlets were measured with the formations of mycorrhizae in the roots. R. repens was shown to be the better isolate than the other in growth stimulation of plantlets on oatmeal agars when grown for two months. The two types of hyphae in the root cells under nature were speculated from the different fungal isolates of Rhizoctonia. Further isolates would be needed for application works for the orchid industries.
This study was carried out to detect cymbidium mosaic potexvirus (CymMV) and odontoglossum ringspot tobamovirus (ORSV) in cultivated orchid plants in Korea. The standard double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) were carried out for detection of the viruses in the collected orchid samples. ELISA was suitable for massive-scale diagnostic method for virus detection in orchids. RT-PCR was rapid, time-saving and reliable detective method, and detection limit data showed that RT-PCR was 103 times more sensitive than ELISA. Of the 321 individual orchids representing 5 orchids genera tested by the ELISA, CymMV and ORSV were detected in 15.6% and 22.4%, and mixed infection of the both viruses with 4.9%, respectively. Of the Cymbidium plants tested, cultivated plants showed 52.5% virus infection rate with either CymMV or ORSV and both viruses.
The present investigation has been made to study the deficiency symptoms of boron on the formation of cell wall and the development of the individual components of the orchid cell wall. Analytical samples were taken from two sources; one from the individual orchid plants started from an apical meristem culture followed by the generation of the protocorm-like body which was developed into a plant, the other from the plant cultivated in water for 30 days. The amount of boron in the cultrues were controlled and the deficiency symptoms were observed under theelectron microscope, optical microscope with samples taken from the zones of elongation of leaves and compared the dry weight of cell walls and finally the various fractions of the cell wall components. The following results were obtained: (1) The growth of roots and leaves was hampered in the boron deficient plants. (2) In the boron-deficient leaves a severe necrosis and cracks were developed in the tissue of zone of elongation besides the decrease in growth. (3) under the electorn microscope the cell walls of boron-deficient plants showed rough undulated structures unlike the smooth control cell walls. (4) the dry weight of total cells and cell walls of boron deficient plants were higher than the control plants. (5) In the boron deficient plant the amout of pectin and hemicellulose isolated from cell walls were higher and the amount of protein was lower than the controlled plots.
Cymbidium mosaic virus (CyMV) was purified from CyMV infected orchid plant leaves by Sephacryl S-500 HR column chromatography. Partial purification was done by solubilization with Triton X-100 (alkylphenoxypolyethoxy ethanol) and precipitation with polyethylene glycol (PEG 6,000) followed by ultracentrifugation on 30% sucrose cushion. Based on the spectrophotometric analysis, 33 mg of CyMV could be obtained form 100 g of CyMV-infected orchid plant leaves. The purified CyMV represented one distinct homogeneous band by SDS-PAGE, and electron microscopy revealed that it was highly homogeneous and not fragmented. Bioassay demonstrated that the purified CyMV had a normal infectivity to Chenopodium amaranticolor and orchid plants. Based on these results, the purification method in this work could be served as an improved method for the purification of CyMV and similar viruses with good yield, high purity and native integrity.
Orchidaceae species account for one-tenth of all angiosperms including more than 30,000 species having significant ecological, evolutionary, and economic importance. Despite Orchidaceae being one of the largest families among flowering plants, crucial cytogenetic information for studying species diversification, inferring phylogenetic relationships, and designing efficient breeding strategies is lacking, except for 10% or less of orchid species cases involving mostly chromosome number or karyotype analysis. Also, only approximately 1.5% of the identified orchid species from less than a hundred genera have genome size data that provide crucial information for breeders and molecular geneticists. Various molecular cytogenetic techniques, such as fluorescence in situ hybridization (FISH) and genomic in situ hybridization (GISH), have been developed for determining ploidy levels, analyzing karyotypes, and evaluating hybridity, in several ornamental crops including orchids. The estimation of genome size and the determination of nuclear DNA content using flow cytometry have also been employed in some Orchidaceae subfamilies. These different techniques have played an important role in supplementing beneficial knowledge for effective plant breeding programs and other related plant research. This review focused on orchid breeding summarizes the status of current cytogenetic tools in terms of background, advancements, different techniques, significant findings, and research challenges. Principal roles and applications of cytogenetics in orchid breeding as well as different ploidy level determination methods crucial for breeding are also discussed.
Lee, Joung Kwan;Kwon, Young Hee;Kim, Hee Kyu;Kim, Kyung Ok;Park, Jae Seong;Jeong, Mi Jin;Son, Sung Won;Suh, Gang Uk
Proceedings of the Plant Resources Society of Korea Conference
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2018.10a
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pp.37-37
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2018
We use two different methods for laboratory propagation from seed of lady's slipper orchid(Cypripedium macranthos Sw.); immature seed which also called green capsule or fully mature seed about 120~130 days from pollination. In green capsule culture, the seed pods should be collected within precisely right time. The right time of seed collection could be diverse under the wether conditions or nutritional factors of the plants. In fully matured seed culture, the more complicated procedures are needed to break the dormancy of the seed; thermal or chemical treatment. The seedlings in this study were easily germinated from immature seeds in Harvais medium; 53 days after pollination(DAP) in Cypripedium pubescens, DAP 65 in C. parviflorum and C. macranthos. The germinated seedlings were transplanted to hormone free media immediately to avoid abnormal growth of seedlings. When the seedlings have roots with a minimum length of around 2-3cm and have visible dormant buds, the seedlings were removed from the flask and stored in refrigerator for vernalization. To examine the correlation of seedlings and maternal plants, the 125 seedlings of C. macranthos were transplanted in the soil bed at a distance of 20-100 cm from mother plants on April 20. The survival rate of seedlings were 92% in 20 cm distance from the ripe plants, and 56 % in 100 cm distance. The seedlings which were transplanted near mother plants showed vigorous growth in plant height, leaf width, and especially dormant buds. Considering the existence of mycorrhiza which is a symbiotic association between a fungus and the roots of a orchid vascular, the various fungus from mother plants could affect the growth of the seedlings. These results indicate the possibility of high and stable production and practical industrialization of endangered lady's slipper orchids.
Gelatin particle agglutination test (GPAT) was used to detect Cymbidum mosaic virus (CymMV) in Cattleya plants. Gelatin particles were coated with purified anti-CymMV immunoglobulin of 25-100 $\mu\textrm{g}$/ml and were subjected to several different concentrations of purified CyMfV as well as varying dilutions of orchid leaf extracts. The GPAT detected purified CymMV up to a minimum concentration of 10 $\mu\textrm{g}$/ml. CymMV was detected from crude sap extract of infected Cattleya leaves and roots up to 1:51,200 and 1:25,600 dilutions, respectively. However, the optimum range of leaf and root sap dilutions was between 50-100. Non-specific reactions were not encountered from any of the healthy orchid plants tested. The entire GPAT process was completed within 2-3 hours. This test was found to be very useful for the detection of CymMV in orchids because it is sensitive, economical, and easy to perform.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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