• Journal of Microbiology
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• 제38권4호
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• pp.230-238
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• 2000

Class III chitin synthases in filamentous fungi are important for hyphal growth and differentiation of several filamentous fungi. A genomic clone containing the full gene encoding Chs4, a class III chitin synthase in Penicillium chrysogenum, was cloned by PCR screening and colony hybridization from the genomic library. Nucleotide sequence analysis and transcript mapping of chs4 revealed an open reading frame (ORF) that consisted of 5 exons and 4 introns and encoded a putative protein of 915 amino acids. Nucleotide sequence analysis of the 5'flanking region of the ORF revealed a potential TATA box and several binding sites for transcription activators. The putative transcription initiation site at -716 position was identified by primer extension and the expression of the chs4 during the vegetative growth was confirmed by Northern blot analysis. Amino acid sequence analysis of the Chs4 revealed at least 5 transmembrane helices and several sites for past-transnational modifications. Comparison of the amino acid sequence of Chs4 with those of other fungi showed a close relationship between P chrysogenum and genus Aspergillus.

• International Journal of Industrial Entomology and Biomaterials
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• 제1권1호
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• pp.29-33
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• 2000

We cloned and characterized a very late expression factor 1 gene, vlf-1, which regulates the level of very late gene transcripts, from Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus (BmNPV) K1 strain. The 1,140 bp vlf-1 has an open reading frame of 379 amino acid and a MW of 44 kDa. The vlf-1 nucleotide sequence of BmNPV-Kl showed high homology with Autographa californica nuclear polyhedrosis virus and BmNPV T3 strain so far known, and its deduced amino acid residues were identical to those of BmNPV T3. The location of vlf-1 in the BmNPV-Kl genome was confirmed by Southern blot analysis and its expression patterns at the transcriptional level were confirmed by Northern hybridization analysis.

• Journal of Plant Biology
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• 제34권2호
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• pp.121-127
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• 1991

유도된 해녀콩(Canavalia lineata)의 뿌리혹을 발달 단계별로 구분하여 수용성 단백질을 추출하고 SDS-PAGE 및 2차원 전기영동(2-D) 방법으로 뿌리의 수용성 단백질과 비교 분석하였다. SDS-PAGE에 의해 뿌리혹에서만 나타나는 13개의 뿌리혹 특이 단백질 밴드를 검색하였고, 20D 방법으로 분석한 결과 30개의 뿌리혹 특이 단백질 spot을 확인하였다. 이들 단백질은 뿌리혹 발달 단계에 따라 질적 및 양적 차이를 보여, leghemoglobin(Lb) 유사 단백질의 경우 I 단계(b<2mm)에서는 3개, II 단계(d=4-5mm)부터는 5개의 단위체가 차등적으로 검출되었다. 이들은 콩의 경우에 비해 좁은 pI 범위(4.4-5.0)를 갖고 있으나 분자량면에서는 15.7 kd으로 더 크게 나타났다. 또한 콩의 lb 유전자를 탐침으로한 뿌리혹과 뿌리의 전체 RNA에 대한 northern 혼성화반응을 수행한 결과 해녀콩의 lb 유전자는 뿌리혹에서만 조지 특이적으로 발현되고 있음이 확인되었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제37권4호
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• pp.248-254
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• 1994

Bromoxynil은 쌍떡잎 특이적 제초제로써 폭 넓게 이용되고 있으며 반감기가 매우 짧다. Bromoxynil을 3,5-dibromo-4-hydroxybenzoic acid로 분해하는 nitrilase를 암호화한 bxn 유전자를 식물 벡터인 pGA482에 도입하고 Agrobacterium과의 동시배양을 통해 담배와 상추에 형질전환하였다. Kanamycin을 이용해 형질전환 식물체를 선별하고 완전한 식물체로 분화시켰다. Northern hybridization을 통해 bxn 유전자의 발현정도를 검정하고 liaf-disc와 pot assay를 통해 형질전환 식물체가 고농도의 bromoxynil에 저항성을 보임을 확인하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제15권5호
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• pp.1152-1157
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• 2005

The effect of carbon sources on nisin Z biosynthesis in Lactococcus lactis subsp. lactis A164 was studied in batch culture using M17 broth containing different carbon sources. Among the eleven carbon sources tested, glucose, sucrose, and lactose were suitable carbon sources for cell growth of L. lactis A164. In particular, cells grown on lactose produced at least 3-fold greater amount of nisin Z than those on other carbon sources. Galactose resulted in less amount of cell mass than did sucrose or glucose, but gave a higher level of nisin Z activity. Northern blot analysis revealed. that lactose increased the transcription of the nisZ pre-peptide gene. Although galactose was less efficient than lactose, it increased the transcription of nisZ along with a higher level of nisin Z than did sucrose and glucose. These results suggest that the increased nisin Z production is correlated with the induction of nisZ by lactose and galactose. Among all the carbon sources tested, no remarkable differences were observed in nisRK and nisFEG transcripts, indicating that the lactose- or galactose-mediated induction is unique to the nisZ promoter.

• Journal of the Korean Association of Oral and Maxillofacial Surgeons
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• 제28권6호
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• pp.434-439
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• 2002

Oral squamous cell carcinoma (OSCC) is one of the most common head and neck cancers. OSCC generally has a poor prognosis due to its tendency towards a local invasion and subsequent metastasis, which is mediated by multiple proteolytic enzymes and angiogenesis. Soy products contain high levels of isoflavonoids, including the tyrosine kinase inhibitor, genistein, which has been identified as a potent inhibitor of cell proliferation and in vitro angiogenesis. The purpose of this in vitro study is to evaluate the anti-cancer effect of genistein with respect to the angiogenesis and basement membrane invasion in OSCC. The highly invasive OSCC cell line, HSC-3 cells were cultured in the presence of $10{\mu}M$ genistein for 24h. To evaluate the effects of genistein on the invasiveness and the gelatinolytic activity, in vitro invasion assay and zymography were performed. In order to evaluate the effect on the VEGF and bFGF mRNA expression, RT-PCR and northern hybridization reaction, and chemiluminescence detection were applied. The in vitro invasion assay showed that the genistein treatment reduced the cellular invasion through the artificial basement membrane and significant difference between the control group and the genistein treated group was shown in MMP-2 activity. Especially, the 62 kDa activated form of MMP-2 in the control group was 1.8 times higher than that in the genistein treated group. The results of the northern blot analyses indicated that VEGF mRNA expression in the genistein treated group was significantly down regulated. This study showed that genistein inhibits angiogenesis and reduces basement membrane invasion in OSCC. It seems to support the possibility of genistein as an anti-cancer agent.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제52권1호
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• pp.39-44
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• 2014

효율적인 형질전환 누에 시스템 구축을 위해서는 새로운 전이인자의 개발과 함께 선발을 위한 마커 유전자 및 transposase 발현을 효과적으로 조절할 수 있는 다양한 유전자 프로모터 개발이 필수적이다. 이와 관련하여 선행연구를 통해 누에 후부실샘으로부터 고발현하는 RNA binding protein-1 homologue(RBP-1) 유전자를 선발한 바 있다. 본 연구에서는 RBP-1유전자의 누에 발육시기별 및 유충 조직별 발현양상을 Northen blot hybridization 방법으로 분석한 결과, RBP-1 유전자는 유충기로부터 번데기 후기까지의 전기간에 걸쳐 발현하였으며, 두부, 표피, 중장, 지방체 및 견사선 등 실험한 모든 유충 조직에서 고발현 하는 것으로 관찰되었다. 또한, 누에 게놈 유전자은행을 제작한 후 RBP-1 cDNA 유전자를 탐침으로 5'-UTR 영역을 클로닝하고 luciferase assay 방법으로 RBP-1 유전자 프로모터의 활성을 분석하였다. 실험 결과, RBP-1 cDNA를 탐침으로 RBP-1 유전자 ORF와 5'-UTR이 포함된 약 1,660 bp 영역의 게놈 유전자를 클로닝하였다. RBP-1 유전자 프로모터 활성검정을 위해 전사 개시점(+ 30)으로부터 상류의 -740 bp 영역을 PCR로 분리한 후 pGL3 basic vector에 도입하여 luciferase 활성 측정을 위한 전이벡터, pGL-RBP1를 제작하였다. 제작된 pGL-RBP1는 곤충 세포주(Sf9)에 transfection 한 후 luciferase 발현량을 측정한 결과, 기존의 BmA3 유전자 프로모터 대비 10% 가량 높은 발현 효율을 확인할 수 있었다.

• Animal Systematics, Evolution and Diversity
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• 제15권2호
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• pp.153-164
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• 1999

한국, 중국, 러시아에 서식하는 등줄쥐 Apodemus agrarius 6아종 111마리를 이용하여, 미토콘드리아 DNA를 8개의 제한효소로 절단한 단편들을 blot hybridization법으로 분석하였다. 모두 32개의 단편들이 보여졌고, 9개의 haplotype이 밝혀졌으며, 평균 발산값이 0.896에서 1.150%인 4아군이 나타났다. 결론적으로 세 형을 인정할 수가 있었다: [I. 아종 chejuensis (제주도, 한국)], [ll, 아종 pallescens(남서 한국), coreae(중앙 한국), 및 septentrionalis(러시아)], and [lll, 아종 manchuricus(북동 중국)와 pallidior(북부 중국)]. 그러나 아종 coreae의 일부 표본들은 다른 6아종의 표본들과 다소 차이를 보였고, 아종 pallidior의 일부 표본들은 아종 septentrionalis의 모든 표본들과 같아서 동일한 haplotype을 형성하였다. 아종 a. agrarius chejuensis는 독특한 아종중의 하나이고, 아종 corea(pallescens포함)도 독특한 아종중의 하나이며, 아종 manch-uricus와 pallidior는 아종 ningpoensis의 동아종이명이고, 아종 septentrionalis도 아종 agrarius의 동아종이명임이 재확인되었다. 뿐만 아니라, 등줄쥐는 염색체 핵형이 일정하며, 미토콘드리아 DNA 유전형에 약간의 변이를 보이고, 형태형질의 상당한 발산을 보이고 있지만, 이들 분류형질의 변이 정도의 파악과 아종분류의 재검토를 위하여 유라시아산 등줄주의 보다 많은 표본을 이용한 분석이 앞으로 필요하다.

• 한국양식학회지
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• 제19권3호
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• pp.157-165
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• 2006

우리나라 주요 담수 어종인 미꾸라지를 ecotoxicogenomic 연구 모델 어류로 개발하기 위한 연구의 일환으로 본 어종이 고온 스트레스 자극에 노출되었을때 야기되는 산화성 스트레스를 검출하고자 항산화 효소(antioxidant enzyme; AOE) 유전자의 발현 양상을 분석하였다. 주요 항산화 효소인 superoxide dismutase (SOD), catalase (CAT), glutathione-S-transferase (GST) 및 glutathione peroxidases (GPXs)의 transcript들을 특이적으로 정량화할 수 있는 semi-quantitative RT-PCR, real-time PCR 또는 northern blot분석을 통해 $23^{\circ}C$에서 $32^{\circ}C$까지 설정된 실험어의 간 조직내 AOE유전자들의 mRNA level을 분석하였다. 고온에 노출되었을 때 본 어종의 AOE들은 일반적으로 증가된 유전자 발현 양상을 나타내었고, 특히 SOD (2배)와 plasma GPX (3배) 유전자가 가장 유의적인 mRNA 증가를 나타내었다. GST의 경우 상대적으로 적은 증가량을 나타내었고 CAT의 경우 고온자극에 반응하지 않았다. 본 어종은 $29^{\circ}C$ 이상에서 AOE 유전자의 발현 증가를 나타내었고 $32^{\circ}C$에 노출되었을 때 1일째부터 SOD와 plasma GPX mRNA의 증가가 관찰되었다.

• 생명과학회지
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• 제14권6호
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• pp.1023-1027
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• 2004

본 연구는 출아형 효모 Saccharomyces cerevisiae에서 자외선의 상해 시 이를 정상으로 회복시키는 절제회복(excision repair) 유전자로 알려진 RADS의 특성 규명을 위하여 균류 Coprinus cinereus에서 이와 유사한 유전자를 분리하였다. RADS 유사 유전자를 분리하기 위하여 균류 C. cinereus의 염색체 DNA를 전기영동하여 분리한 다음 효모 RADS DNA를 probe로 하여 이와 hybridization하였다. 이 결과 RADS유사 유전자는 3.4kb의 insert DNA를 갖고 있었다. 또한 Southern hybridization으로 이 유사 유전자는 fungus C. cinereus의 염색체에 존재함을 확인하였다. 분리한 RADS 유사 유전자의 전사체 크기는 2.8kb 였으며, 자외선의 상해시 전혀 자외선에 대한 유도성이 없음을 Northern hybridization으로 확인하였다. 또한 유사유전자 부분을 삭제하였을 때 이 부분이 없는 세포는 전혀 생존을 못하였다. 이 결과 분리한 RADS 유사유전자는 세포의 생존에 필수적인 유전자임을 알 수 있었다.