• 한국균학회지
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• 제25권2호통권81호
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• pp.85-90
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• 1997

표고버섯(Lentinula edodes)의 동위효소 양상을 표고 연구의 기초 연구의 일환으로 실시하였다. 균사체의 Tris-HCl 완충액에 용해되는 세포내 효소를 nondenaturing polyacrylamide gel 전기영동 법으로 분리후, peroxidase, esterase, superoxide dismutase, acid phosphatase, alkaline phosphatase, alcohol dehydrogenase, ${\alpha}-amylase$ 효소 활성을 측정하였다. 표고는 peroxidase, esterase, superoxide dismutase, acid phosphatase 활성이 검출되었으며, 본 연구에서 사용한 방법으로 alkaline phosphatase, alcohol dehydrogenase, ${\alpha}-amylase$ 효소 활성은 검출되지 않았다. 표고버섯의 peroxidase, esterase band는 배양 기간에 따라 큰 차이가 없이 안정하였으며, 동위효소는 표고의 유전적 연구 및 원형질체 융합 후 융합체의 특성 연구에 중요하다.

• 대한수의학회지
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• 제40권2호
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• pp.393-401
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• 2000

계난백유래물질(EWD)로 배양한 고양이 말초혈액 단핵구세포(MNC)의 배양상충액에서 다형핵백혈구(PMN)에 대한 유주성인자를 조사하였다. EWD로 배양한 MNC 배양상층액과 human recombinant (hr) interleukin (IL-8)는 고양이 PMN의 유주성을 현저하게 증가시켰다. 이 유주활성물질을 규명하기 위해 EWD 처리 MNC 배양상충액을 gel electro-phoresis(denaturing 조건 18% loading gel 및 nondenaturing 조건 12.5% loading gel)를 실시한 결과, EWD로 배양한 MNC 배양상충액과 hr IL-8는 모두 분자량 6~8kDa에서 band를 나타내었다. Denaturing 조건에서 6~8kDa band의 gel slices에서 용출시킨 용출액에서도 고양이 PMN의 유주활성이 인정되었다. EWD로 배양한 MNC 배양상층액, hr IL-8 및 용출액에 의한 유도된 고양이 PMN의 유주활성은 rabbit anti-feline polyclonal IgG(RAF pIgG)와 hr IL-8에 대한 mAb에 의해 농도의존적으로 억제되었다. 또한 RAF pIgG는 hr IL-8와 결합을 보임으로써 사람의 IL-8와 교차반응을 시사하였다. 이상의 결과로부터 EWD로 배양한 고양이 MNC는 분자량 6~8kDa의 IL-8 양(樣) 유주성인자를 분비하여 PMN의 유주성을 유도하는 것으로 사료되었다.

• Journal of Microbiology
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• 제34권1호
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• pp.82-89
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• 1996

Purine nucleoside phosphorylase (PNP) was purified in Micrococcus luteus (M. luteus) using streptomycin sulfate and amomonium sulfate fractionation, three times by a Sephadex G-100 gel filtration and a DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography. The enzyme was purified 72 folds with a 11% recovery and showed a single band in a nondenaturing gel electrophoresis. The M. W. of PNP turned out to be 1.35 * 10$^{5}$ delton in G-150 gel filtration chromatography. The stability of the enzyme was increased by treatment with both substrates, MgCI$_{2}$ or CaCI$_{2}$, but not significantly kcal/mol. M. luteus PNP catalyzed the phosphorolysis of inosine, deoxyinosine, guanosine and deoxyguanosine with the Km value of 1.5 * 10$^{-3}$ M, 3.0 * 10$^{-3}$ M, 5.0 * 10$^{-4}$ M, respectively. The enzyme was reacted with adenosine, 1-methylnosine and 1-methylguanosine as substrates, which were shown to be poor substrates for mammalian enzyme.

• 미생물학회지
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• 제26권3호
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• pp.197-206
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• 1988

Klebsiella pneumoniae의 세포외막으로부터 2-furaldehyde를 2-furoic acid로 산화시키는 2-furaldehyde dehydrogenase를 분리하여 그 특성을 조사하였다. 이 효소는 $\beta$-$NAD^{+}$를 특이적으로 요구하였다. 분리과정중의 효소활성도는 2-furaldehyde를 기질로 사용하고 $\beta$-$NAD^{+}$를 조효소로 사용하면서 high performance liquid chromatography에 의해 측정 되었다. 세포외막은 Percoll의 밀도흉배에 의한 초원심분리방법과 $Mg^{2+}$, Triton X-100으로 용해시킨 후, 초원심분리시키는 방법으로 수집되었다. 세포외막단백질은 EDTA와 lysozyme을 처리함으로서 얻어졌고, 효소는 QAE-Sephadex Q-504 S Sephadex G-100-을 사용하면서 column chromatography 방법에 의해 분리되었다. 본 효소는 $85^{\circ}C$, PH9.5, 그리고 1.5% (vol/vol) Triton X-100의 존재하에서 최대활성을 보여주었다. 효소의 분자량은 nondenaturing polyacrylamide gel e electrophoresis의 결과, 88, 000.으로 추정되었고, 2-furaldehyde에 대한 효소의 Km값은 4.72 mM 이였다.

• 미생물학회지
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• 제31권2호
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• pp.136-140
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• 1993

A awamori 의 glucoamylase 유전자와 A. nidolans 의 trpC maker 유전자를 가진 A. nidulans 의 expression vector 를 만들었다. 이재조합 plasmid 를 트립토판 영양요구주의인 A. nidulans B17 에 형질전환시켰다. Southern blotting 으로 vector DNA 가 A. nidulans 의 chromosomal DNA 에 integration 된 것을 확인하였다. Northern blotting 의 결과, glucoamylase 유전자는 induction 조건에서 mRNA 를 합성하였다. glucoamylase 의 역가가 형질전환체에서 증가하였으며, nondenaturing polyacrylamide gel 에서 glucoamylase 의 활성이 나타났다.

• BMB Reports
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• 제30권4호
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• pp.274-279
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• 1997

Acetolactate synthase (ALS) catalyzes the first common step in the biosynthesis of branchedchain amino acids, valine, leucine, and isoleucine. ALS is the target site for several structually diverse classes of herbicides including sulfonylureas, imidazolinones. and triazolopyrimidines. We have purified ALS from etiolated barley shoots to homogeneity. The five major purification steps are ammonium sulfate fractionation, DEAE anion exchange, hydroxylapatite, Bio-Gel A gel filtration, and low pressure Mono-Q chrornatoqraphy. Approximately 170-fold purification was achieved and the yield was 0.45% of initial activity in the crude extract. Both SDS-PAGE and Western blot analysis showed a single polypeptide of ALS with an apparent molecular mass of 64 kDa. The result of nondenaturing gel electrophoresis with activity staining indicated that the molecular mass of its native form is approximately 225 to 250 kDa. The values of $K_m$ for pyruvate. pl. and optimum pH of ALS were determined to be 2.0 mM, 5.2. and 7.0. respectively Feedback inhibition studies showed that ALS is more susceptible to leucine than valine. And $IC_{50}$ value of Cadre, a class of irnidazolinones, is about $1.5\mu{M}$ for ALS.

• 아시안잔디학회지
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• 제4권1호
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• pp.12-23
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• 1990

The chlorophyll-protein complexes were separated from thylakoid membranes of Spinach oleracea and Zoysia japonica by two gel Systems of LiDodSO4-PAGE and LiDodSo4/Urea- PAGE under nondenaturing conditions. Seven chlorophyll~protein complexes of CPI*, CPI, CPII*. CP47, CP43, CP29 and CPII were fractionated from both S,oleracea and Zjaponica by LiDodSO4-PAGE. CPI, CP47 and CP43 contained more chlorophyll a than chlorophyll b. The patterns of their absorption spectra at room temperature were similliar to that of chlorophyll a, judging by their UV-spedtroscopy. On the other hand, CPII* and CPII contained approximately equim-olar quantities of chlorophyll a and b. Additional five chlorophyll-protein complexes not separated in the LiDodSO4-PAGE system were electrophoretically isolated from both S, oleracea and Zjaponica by LiDodSO4/Urca-PAGE. The chlorophyll-protein complex just above LRCII $\alpha$in the gel appears CCII-RC separeted recently. 23 kDa and 20 kDa cho-protein complexes is probably LHCIa and LHCIb as judged from their molecular weight. Two novel chlorophyll~protein complexes designated "CPI7" and "CPI6" were fractionate by this gel system. Their molecular weights respectively. Although the stoichiometry of their components and their roles in thylakoid membranes are not apparant, It is thought that they are another kinds of LHCI.other kinds of LHCI.

• BMB Reports
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• 제29권5호
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• pp.411-416
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• 1996

In order to study the role of the protein shell in both iron uptake and iron core formation of ferritin, we constructed a deletion mutant of the ferritin gene and expressed the mutant gene in Escherichia coli, This mutant was obtained by introducing an amber mutation at position Pro-157 and a deletion of the 19 amino acid residues at the carboxy-terminus of the recombinant tadpole H-chain ferritin. The deleted amino acids correspond to E-helix forming the hydrophobic channel in the protein. E. coli harboring the plasmid pTHP157, which contains the deleted gene, was grown at $23^{\circ}C$ in the presence of 0.1 mM IPTG, and the induced protein appeared to be partly soluble. Nondenaturing polyacrylamide gel electrophoresis showed that the expressed mutant H-chains coassemble into holoprotein, suggesting that E-helix is not necessary for assembly of the subunits as reported for human H-chain ferritin. Its ability in iron core formation was proven in an Fe staining gel, the result disagreeing with the observation that the hydrophobic channel is necessary for iron core formation in human H-chain ferritin.

• 생명과학회지
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• 제16권7호
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• pp.1148-1157
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• 2006

초고온성 세균인 Thermotoga maritima로부터 ${\beta}-glucosidase$ 유전자를 클로닝한 후 대장균 숙주에서 발현시켰다. 이 효소는 salicin, arbutin, $_pNPG$과 같은 탄소원의 ${\beta}$-글루코시드 결합을 가수분해하였다. 721개의 아미노산을 암호화하는 2,166 bp의 DNA 염기서열로된 유전자이였다. 다른 ${\beta}-glucosidase$ 효소들과 단백질 유사성을 비교한 결과 glycosyl hydrolase family 3에 속하였으며 MUG-nondenaturing PAGE와 SDS-PAGE에 의해 확인된 단백질의 크기는 약 81 kDa이었다. 효소활성은 pH 7.0, $80^{\circ}C$에서 가장 높은 활성을 나타냈으며 이 효소의 아미노산 서열에 있는 두 개의 아미노산 잔기 (232번 글루탐산과 242번 아스파르트산 잔기)를 알라닌으로 치환시켜 활성이 없어지는 것으로 보아 이 두 잔기가 효소활성에 중요한 역할을 하는 것으로 추정된다.

• 생명과학회지
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• 제13권3호
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• pp.248-251
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• 2003

갑상선호르몬의 전구체인 thyroglobulin (Tg)이 어떻게 dimerization이 일어나는지를 조사하였다, 변성 혹은 비변성전기영동법으로 관찰한 결과 새롭게 만들어지기 시작한 Tg는 15분에 처음으로 구조적으로 불안정하지만 folded monomer가 관찰되었다. 그 이후에 monomer가 dimer로 바뀌어 결국 30분에 dimer Tg가 만들어지기 시작하여 40분에는 dimer Tg가 관찰되었다. 최종적으로 60분에 완전하게 dimerization된 Tg가 만들어졌다.