토양으로부터 tyrosinase 저해제를 생산하는 방선균 F-97을 분리하여, 이 균이 생산하는 tyrosinase 저해제를 정제하였다. 먼저 배양액을 원심분리하고 이 여액을 pH 4.0으로 조절한 후 IRC-120($NH_4^+$ type column chromatography, Silica gel column chromatography, C18 column chromatography, Sephadex LH-20 column chromatography를 사용하여 정제하였다. 정제도 확인은 ODS HPLC를 이용하여 확인하였으며, 최종 정제 수율은 5.24%이었다. 물리 화학적 특성으로 tyrosinase 저해제는 water, methanol, ethanol 등에는 잘 녹았으나, acetone, butanol, ethylacetate, chloroform 등에는 녹지 않는 수용성 물질이었다. 물을 용매로 UV 흡광도를 측정한 결과 194nm에서 최대 흡광도를 나타내었다. 본 tyrosinase 저해제는 Iodine, Ninhydrin, Millon, Sakaguchi, Xanthoproteic, Emerson 시험에서는 음성이었고, Molish, Benedict, conc. $H_2SO_4$, $KMnO_4$ 시험에서는 양성이었다. 저해제의 열 안정성은 $100^{\circ}C$ 50분까지 안정하였고, pH $4{\sim}9$에서 안정하였다. Tyrosinase 저해제의 mushroom tyrosinase에 대한 $IC_{50}$ 값은 $19.2{\mu}g/ml$이었고, Streptomyces bikiniensis NRRL B-1049에 대한 저해활성은 $1,000{\mu}g/ml$ 일 때 27mm이었다. 그리고 본 저해제의 저해 양상은 경쟁적 저해로 확인되었다.
수납시기 6년근 수삼의 동체중심부의 유리아미노산 조성을 지상부의 고사유무와 관련하여 조사하였다. 유리아미노산의 총합은 고사경의 경우에 증가하는 경향이나 유의성은 없었다. 유리아미노산 총합(3.5~49% 건중)은 ninhydrin법에 의한 총유리아미노산 함량과 차이가 컸으며 이는 수용성비단백질 분획에 상당량의 유리아미노산 이외의 ninhydrin 반응물이 있음을 나타낸다. 경의 고사가 유리아미노산 조성유이도에 영향을 주지는 아니하였다. 17개 아미산중 10개가 경고사에 의하여 증가하는 경향을 보였고 두개(glutamic acid, cysteine)는 감소경향을 보였다. 주요 amino acid는 arginine(상대함량 58%), glycine(6.2), lysine(5.9), serine(5.7), glutamic acid(4.2), aspartic acid(3.5)였다. 이상의 결과는 조기낙엽이나 경고사가 유리아미노산을 감소시키지 아니하므로 유리아미노산이 내백과 관계되지 아니함을 강력히 시사한다. 보고된 모든 경우에 arginine의 함량이 가장 높으므로 질소 대사에 중요한 역할이 있을 것이다. 본 조사결과가 기타 보고된 것과 유리아미노산 조성 유사도에서 arginine을 제외한 경우 유의성이 없는 것을 주로 alanine, phenylalanine, glycine및 proline의 변화 때문이다.
홍삼(紅蔘)의 특징(特徵)이라고 할 수 있는 갈색화반응(褐色化反應)에 의(依)해서 생성(生成)된 갈변물질(褐變物質)의 항산화효과(抗酸化?果)와 여러가지 기본적(基本的)인 성질(性質)을 조사(調査)하였다. 인삼(人蔘) model system을 이용(利用)하여 갈변반응(褐變反應)을 시킨 결과(結果) 갈색도(褐色度)는 반응시간(反應時間)에 비례(比例)하여 증가(增加)하였으나 항산화효과(抗酸化?果)는 반응시간(反應時間) 17시간(時間)까지 갈색도(褐色度)에 비례(比例)하여 증가(增加)하였으나 그 이후에는 일정(一定)한 level을 유지하였다. 증삼시간별(蒸蔘時間別)로 실제(實際) 홍삼(紅蔘)을 제조(製造)하여 갈색도(褐色度) 및 항산화능(抗酸化能)을 조사(調査)한 바 model system에서 얻은 결과(結果)와 유사(類似)하였다. 투석(透析)에 의해서 분리(分離)된 인삼갈변반응물질(人蔘褐變反應物質)은 외액(外液)이 내액(內液)보다 갈색도(褐色度)가 낮았지만 더 강(强)한 항산화효과(抗酸化效果)를 보였다. 인삼갈변물질(人蔘褐變物質)을 Amberlite 이온교환수지(交換樹脂)를 사용(使用)하여 3개의 peak로 분리(分離)하였으며 유출(流出)차례에 따라 fraction I, II 및 III으로 명명(命名)하였다. 가장 갈색도(褐色度)가 강(强)한 fraction II는 전체(全體) peak의 80.7%로 강(强)한 항산화효과(抗酸化效果)를 나타냈으며 Somogyi-Nelson시약(試藥)에 대(對)하여 환원능(還元能)을 보였고 ninhydrin반응(反應)에 양성(陽性)이었다. 인삼갈변반응물질(人蔘褐變反應物質)과 백삼(白蔘) 및 홍삼(紅蔘)의 75% ethanol 추출물(抽出物)이 DPPH에 대(對)한 수소공여성(水素供與性)을 측정(測定)한 바 백삼(白蔘)은 수소공여성(水素供與性)이 거의 없었으나 홍삼추출물(紅蔘抽出物)은 수소공여성(水素供與性)이 강(强)하였다. 특히 인삼갈변반응물질(人蔘褐變反應物質)은 5mg/ml의 농도(濃度)에서 BHA와 같은 level의 수소공여성(水素供與性)을 나타냈다.
B. amyloliquefaciens IUB158-03균주에서 정제된 항진균물질은 극성인 용매에 잘 용해되고, pH 6.0~10.0와 $-70{\sim}121^{\circ}C$에서와 같이 넓은 범위의 온도 및 pH에서 안정성을 보였다. 항진균물질의 FAB-MS, UV 흡수 스펙트럼, 아미노산 조성 등을 분석한 결과 분자량은 1,042 이었고, TLC를 이용하여 분석한 결과 ninhydrin solution에서 보라색으로 발색되었다. UV 스펙트럼은 220 nm, 277 nm에서 ${\lambda}max$를 보였으며, $Asn_3$, $Gln_2$, $Ser_1$$Gly_1$, $Tyr_1$의 아미노산 조성을 갖는 것으로 나타났다. 그리고 $^1H$-NMR spectrum, $^1H$-COSY, HMQC 을 분석한 결과 iturin A계에 속하는 물질로 확인되었다. NIH3T3 섬유아세포에 대해 항진균물질이 세포독성을 나타내지 않는 것은 물론 마우스에 항진균물질을 경구투여하여 장기 내의 변화와 백혈구 수, 생체내의 생리적인 기능면에서 정상 마우스와 차이를 보이지 않았으므로 생체독성이 없는 것으로 나타났다. 따라서 본 연구를 통하여 B. amyloliquefaciens IUB158-03에서 분리된 항진균물질이 앞으로 고추탄저병의 생물적 방제제로 이용될 수 있는 잠재성을 갖고 있는 것으로 사료된다.
Model melanoidin으로서 glucose-glycine, glucose-lysine, xylose-arginine melanoidin을 색도가 동일하게 되도록 조제하여 항산화효과 및 항산화효과와 관련된 특성을 살펴보았다. 실험에 사용한 melanoidin들은 대조군에 비해 강력한 항산화 효과를 나타내었으며 melanoidin들의 갈색도의 정도를 동일하게 하여도 당과 아미노산의 종류에 따라 항산화 효과가 다르게 나타나서 xylose-arginine melanoidin의 항산화 효과가 가장 큰 것으로 나타났다. Xylose-arginine melanoidin의 경우 DPPH에 의한 전자공여성도 실험에 사용한 세 model melanoidin중 가장 커서 xylose-arginine melanoidin의 항산화성과 전자공여성이 관계있음을 알 수 있었다. Melanoidin의 항산화 효과 관련 물질의 특성을 알기위하여 melanoidin을 Sephadex G-50에서 분리하여 그 특성을 조사한 결과 melanoidin의 종류에 따라 다른 분리 패턴을 나타내었다. 분획별 항산화효과를 비교한 결과 xylose-arginine melanoidin이 가장 강한 항산화효과를 나타내었고 다음이 glucose-lysine melanoidin이었으며 glucose-glycine melanoidin이 가장 낮은 항산화효과를 나타내어 당의 경우 glucose보다 xylose에서, 아미노산의 경우 glysine보다 lysine에서 항산화 효과가 큰 것을 알 수 있었다. 분획물의 특성 중 melanoidin의 항산화 효과가 큰 물질은 갈색도가 높으면서 ninhydrin 양성반응을 나타내고 환원성이 강한 특성을 나타내었다. Xylose-arginine melanoidin의 경우 fraction 50에서 65사이의 광범위한 영역에서, glucose-lysine melanoidin의 경우 fraction 65에서, glucose-glycine melanoidin의 경우 fraction 60에서 각각 강한 항산화 효과물질이 검출되었다. Xylose-arginine melanoidin의 경우 광범위한 갈색물질의 용출범위에서 환원작용을 나타내어 앞에서 model melanoidin 중 가장 강한 항산화 효과 및 DPPH에 의한 전자공여성을 나타낸 성질과 일치함을 알 수 있었다.
나노입자에 기초한 약물 전달 시스템(DDS, Drug Delivery System)은 약물 방출의 매개체로서 약물의 방출량을 조절하고 적합한 장소에 전달하여 효능을 향상시키기 위해 사용되어왔다. 독성이 없고 생 분해성인 Chitosan은 좋은 생체 적합성을 가지고, 뛰어난 흡착력을 가져 약물전달체로 제조할 수 있다. 기본 아미노산 중 하나인 Valine은 근육의 성장과 조직의 회복을 돕는 물질이며 다른 아미노산과 함께 혈당 수치를 낮추고 성장호르몬 생산을 증가시키는 필수아미노산이다. 본 연구에서는 Valine을 약물 흡수가 가능한 자성 Chitosan에 흡착시켜 TPP (tripolyphosphate)와의 cross-linking을 통해 약물전달체를 제조한 후, 흡수 및 방출 경향성에 대해 알아보았다. 안정성이 비교적 높은 Fe3O4를 사용하여 약물전달체가 자성을 띠게 만들어 표적 부위로 약물을 전달할 수 있도록 하였다. 최적의 조건에서 제조한 약물전달체를 아미노산의 정색반응인 Ninhydrin test를 통해 흡수 및 방출 경향성을 UV-Vis로 분석하여 확인하고 입자의 크기를 측정함으로써 약물전달체로 적합한 것을 확인하였다.
This investigation has been carried out to examine the structure of digestive tract from Korean Leech, Erpobdella lineata, using light and electron microscope. The digestive tract is composed of mouth, pharynx, Oesophagus, six-chambered stomach, three-chambered intestine, rectum and anus. Stomach and intestine have not gastric or intestine ceca and consist of only straight tube. All digestive tracts from pharynx to rectum are covered with simple columnar epithelial cells. While the surfaces of endothelial cell of pharynx and rectum are covered with cuticular layer of about $0.3{\mu}m$ in thickness, stomach and intestine are covered with estimated $0.2-0.3{\mu}m$ and $0.5{\mu}m$ microvilli respectively. Circular folds were found only in first and second chambers of stomach, intestine and rectum, but not in pharynx and the other chambers (third to sixth) of stomach. The granules of $0.3-0.8{\mu}m$ and $0.5-1.0{\mu}m$ in diameter were observed in the cytoplasm of stomach endothelial cell. These granules were demonstrated to contain protein which showed a positive reaction to ninhydrin. It was also found that there are well-developed microvilli in the apical portion of intestine endothelial cell in which endocytosis occurs actively.
In order to search for new antibiotics from anaerobic bacteria, a large number of samples from domestic soil were collected and processed by apropriate methods. A potential strain, Streptococcus sp. An-21-1, was found to produce antimicrobial compounds. The Results were as follows; 1. During fermentation, the bacteria grew rapidly up to 20hr, thereafter entered the death phase. The optimal temperature and pH for the bacterial growth were $37^{\circ}C$ and pH 7.0, respectively. 2. Antibiotics were purified from culture broth by solvent extraction, silica gel column chromatography and Sepadex L.H 20 column. 3. Physicochemical properties of Ap-1 and Ap-2 were similar ; Their melting points were between $234-237^{\circ}C$. Color reactions of ninhydrin, 2,7-dichlorofluorescein, 4-dimethylaminobenzaldehyde, Dragendroffs reagent and 20% $H_2SO_4$, were positive. Therefore, we assumed that these antibiotics have amine group, immine group, alkaloid, and lipid components. These were stable to heat. UV spectrophotometry showed two peaks at 210 nm and 260 nm. From above results, we assumed these antibiotics are belong to the peptide antibiotic family.
The mycelium of Rhizopus nigricans was harvested at intervals during the sporulation periods, fractioned into various cell components and analyzed the con!eiits of various cell materials in order to clarify the optimum conditions of sporulation and some characteristics of the metabolism during tke sporulation periods. The changes in enzyme activities, such as amylase and protease, were also measured during the sporulation period,. 1. Mycelium in distilled water culture, as control, did not sporulate but mycelial mat cultured in Petridish without mutrient spourulated. Optimum temperature range for sporulation was $20{\sim}25^{\circ}C$. 2. During the sporulation and maturation periods, proteins, especially alkali-labile protein were decreased remarkably but free amino acid and ninhydrin reactive substances in acid soluble fraction were increased, compared with control. 3. Acid solable polyphosphate was decreased but acid insoluble polyphosphate was increased, during the sporulation. 4. Carbohydrate and hexosamine in acid soluble fraction were increased, while carbohydrate in alkali insoluble residual fraction was decreased during the sporulation periods. 5. Amounts of UV-absorbing material in deoxyribonucleic acid fraction was increased a little but those in ribonucleic acid fraction was decreased, compared with control. 6. Intracellular amylases and proteases activities insporulating mycelial mat were increased continuously during the sporulation and maturation periods.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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