택서스속 식물세포인 Taxus chinensis 배양에서 식물세포, 세포조각 및 여액에 있는paclitaxel 의 분포는 paclitaxel 생 산량에 의존하였다. 즉, 여액에 녹을 수 있는 paclitaxel에 힌계가 있기 때문에 발효조에서의 생산량이 적을 경우 여 액 에 녹아 있는 paclitaxel양은 상대 적 으로 증가하여 수율 증가 측면에서 이를 반드시 회수하여야 한다. 여러가지 종 류의 흡착제 중에서 HP20 (stylene, high porous polymer)의 경우 흡착 및 탈착 효율이 좋고 가격도 저렴하여 가장 경 제적인 흡착제 임을 알 수 있었다. 식물세포와 세포조각이 포함되어 있는 배양액의 경우 흡착효율이 상당히 떨어져 10 g/l흡착제로 3일 동안 반응시켜도 여액내 paclitaxel은 여 전히 잔존함을 알 수 있었다 데칸터 여 액, 식불세포만 제 거된 배양액의 경우에는 흡착효율이 향상되어 5 g/l흡착제 처리로 1일 정도면 배양액내 paclitaxel이 완전히 흡착됨을 말 수 있었다. 또한 고속원심분리기 여액, 식물세포와 세 포조각이 제거된 여액의 경우 3 g/l흡착제 처리로 1일 정 도면 여 액내 paclitaxel이 완전히 흡착되 어 여 액내 paclitaxel 을 완전히 회수할 수 있었다. 이상의 결과로부터 여액에 녹아 있는 paclitaxel 회수를 위하여 식물세포와 세포조각을 미리 제거한 여액, 즉 고체 함량을 줄인 여액이 더욱 효과 적임을 알 수 있었다.
We examined butanol fermentation by Clostridium beijerinckii NCIMB 8052 using various hydrolyzates obtained from rice bran which is one of the most abundant agricultural by-products in Korea and Japan. In order to increase the amount of fermentable sugars in the hydrolyzates of rice bran, various hydrolysis procedures were applied. Total eight different hydrolyzates were prepared using rice bran (RB) and defatted rice bran (DRB) with enzyme or acid treatment and both. Each hydrolyzate was evaluated in terms of total sugar concentration and butanol production after fermentation by C. beijerinckii NCIMB 8052. Acid treatment yielded more sugar than enzyme treatment and combined treatment with enzyme and acid yielded even more sugars as compared to single treatment with enzyme or acid. As a result, the highest sugar concentration (33 g/L) was observed from the hydrolyzate from DRB (100 g/L) with combined treatment using enzyme and acid. Prior to perform fermentation of the hydrolyzates, we examined the effect of P2 solution containing yeast extract, buffer, minerals, and vitamins on production of butanol during the fermentation. Fermentation of the hydrolyzates with or without additionof P2 was performed using C. beijerinckii NCIMB 8052 in a 1 L anaerobic bioreactor. Although the hydrolyzates RB were able to support growth and butanol production, addition of P2 solution into the hydrolyzates significantly improved cell growth and butanol production. Highest butanol production (12.24 g/L) was observed from the hydrolyzate of DRB with acid and enzyme treatment after supplementation of P2 solution.
형질전환 가금의 생산은 생체반응기(Bioreactor)가금에 의한 고부가가치의 생의약 물질을 저비용, 고효율로 생산할 수 있으며, 배 발달과정 및 유전자 조절기작 규명을 통한 학문적 이용성 등 다양한 분야에 응용될 수 있다. 형질전환 가금을 생산하기 위한 방법 중 닭의 배 발생 초기에 발생하는 성세포(정자 혹은 난자)의 전구세포인 원시생식세포를 이용한 연구가 활발하게 진행되고 있다. 그러나 이를 검증할 원시생식세포 특이적 마커의 부재로 많은 어려움을 겪고 있다. 따라서 본 연구는 원시생식세포의 특성 분석을 위해 PAS(Periodic acid-Schiff) 염색 및 특이항체 (SSEA-1,3,4 & Integrins $\alpha$6, $\beta$l) 그리고 lectins (STA, DBA, ConA, WGA)를 이용하였다. 이번 연구결과를 통한 닭 원시생식세포의 특이적 마커의 개발은 원시생식세포를 이용한 가금의 형질전환 연구에 기여할 것이다.
Jo, Sung Jun;Kwon, Hyeokpil;Jeong, So-Yeon;Lee, Sang Hyun;Oh, Hyun-Suk;Yi, Taewoo;Lee, Chung-Hak;Kim, Tae Gwan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제26권9호
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pp.1593-1604
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2016
Recently, bacterial quorum quenching (QQ) has been proven to have potential as an innovative approach for biofouling control in membrane bioreactors (MBRs) for advanced wastewater treatment. Although information regarding the microbial community is crucial for the development of QQ strategies, little information exists on the microbial ecology in QQ-MBRs. In this study, the microbial communities of biofilm were investigated in relation to the effect of QQ on anoxic/oxic MBRs. Two laboratory-scale MBRs were operated with and without QQ-beads (QQ-bacteria entrapped in beads). The transmembrane pressure increase in the QQ-MBRs was delayed by approximately 100-110% compared with conventional- and vacant-MBRs (beads without QQ-bacteria) at 45 kPa. In terms of the microbial community, QQ gradually favored the development of a diverse and even community. QQ had an effect on both the bacterial composition and change rate of the bacterial composition. Proteobacteria and Bacteroidetes were the most dominant phyla in the biofilm, and the average relative composition of Proteobacteria was low in the QQ-MBR. Thiothrix sp. was the dominant bacterium in the biofilm. The relative composition of Thiothrix sp. was low in the QQ-MBR. These findings provide useful information that can inform the development of a new QQ strategy.
During the nitrogen-fixing process, ammonia ($NH_3$) is incorporated into glutamate to yield glutamine and is generally not secreted. However, in this study, $NH_3$-excreting strains of nitrogen-fixing Paenibacillus were isolated from soil. The ammonium production by the Paenibacillus strains was assayed in different experiments (dry biomass, wet biomass, cell-free extract, and cell-free extract adsorbed on nano $TiO_2$ particles) inside an innovative bioreactor containing capsules of $N_2$ and $H_2$. In addition, the effects of different $N_2$ and $H_2$ treatments on the formation of $NH_3$ were assayed. The results showed that the dry biomass of the strains produced the most $NH_3$. The dry biomass of the Paenibacillus strain E produced the most $NH_3$ at 1.50, 0.34, and 0.27 ${\mu}M$$NH_3$/mg biomass/h in the presence of $N_2$ + $H_2$, $N_2$, and $H_2$, respectively, indicating that a combined effluent of $N_2$ and $H_2$ was vital for $NH_3$ production. Notwithstanding, a cell-free extract (CFE) adsorbed on nano $TiO_2$ particles produced the most $NH_3$ and preserved the enzyme activities for a longer period of time, where the $NH_3$ production was 2.45 ${\mu}M$/mg CFE/h over 17 h. Therefore, the present study provides a new, simple, and inexpensive method of $NH_3$ production.
Xu, Zhaoxian;Cao, Changhong;Sun, Zhuzhen;Li, Sha;Xu, Zheng;Feng, Xiaohai;Xu, Hong
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제25권11호
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pp.1819-1826
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2015
Poly(ε-ʟ-lysine) (ε-PL) is a novel bioactive polymer secreted by filamentous bacteria. Owing to lack of a genetic system for most ε-PL-producing strains, very little research on enhancing ε-PL biosynthesis by genetic manipulation has been reported. In this study, an effective genetic system was established via intergeneric conjugal transfer for Streptomyces albulus PD-1, a famous ε-PL-producing strain. Using the established genetic system, the Vitreoscilla hemoglobin (VHb) gene was integrated into the chromosome of S. albulus PD-1 to alleviate oxygen limitation and to enhance the biosynthesis of ε-PL in submerged fermentation. Ultimately, the production of ε-PL increased from 22.7 g/l to 34.2 g/l after fed-batch culture in a 5 L bioreactor. Determination of the oxygen uptake rate, transcriptional level of ε-PL synthetase gene, and ATP level unveiled that the expression of VHb in S. albulus PD-1 enhanced ε-PL biosynthesis by improving respiration and ATP supply. To the best of our knowledge, this is the first report on enhancing ε-PL production by chromosomal integration of the VHb gene in an ε-PL-producing strain, and it will open a new avenue for ε-PL production.
Park, Kyoung-Joo;Cho, Kyoung-Sook;Kim, Jeong-Bo;Lee, Min-Gyu;Lee, Byung-Hun;Hong, Young-Ki;Kim, Joong-Kyun
한국생물공학회:학술대회논문집
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한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVII)
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pp.450-455
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2005
To treat wastewater efficiently by a one-step process of nitrogen removal, a new strain of $N_2-producing$ bacteria from $NH{_4}{^+}$ under an aerobic condition was isolated and identified. By 16S-rDNA analysis, the isolate was identified as Enterobacter asburiae with 96% similarity. The isolate shows that the capacity of $N_2$ production under an oxic condition was approximately three times higher than that under an anoxic condition. The optimal conditions (pH, temperature and C/N ratio) of the immobilized isolate for $N_2$ production were found to be 7.0, $30^{\circ}C$ and 5, respectively. Under all the optimum reaction conditions, the removal efficiency of $COD_{Cr}$ and TN reached 56.1 and 60.9%, respectively. The removal rates of $COD_{Cr}$ and TN were highest for the first 2.5 hrs (with the removal $COD_{Cr}$ ratios of 32.1), and afterwards the rates decreased as reaction proceeded. For application of the immobilized isolate to a practical process of ammonium removal, a continuous bioreactor system exhibited a satisfactory performance at HRT of 12.1 hr, in which the effluent concentrations of $NH{_4}{^+}-N$ was measured to be 15.4 mg/L with its removal efficiency of 56.0%. The maximum removal rate of $NH{_4}{^+}-N$ reached 1.6 mg $NH{_4}{^+}-N/L/hr$ at HRT of 12.1 hr (with N loading rate of 0.08 $Kg-N/m^3-carrier/d)$. As a result, the application of the immobilized isolate appears a viable alternative to the nitrification-denitrification processes.
The food self-support rate on the basis of cereals in Korea is approximately 27%, which will threaten the national food security. The dramatic increase in population accompanied by rapid industrialization in developing countries has caused imbalances in the supply of food and energy. To cope with these global crises over food and energy supplies as well as environmental problems, it is urgently required to develop new environmentally friendly industrial crop varieties to be grown on marginal lands including desertification areas for sustainable development. Sweetpotato (Ipomoea batatas (L.) Lam.) ranks seventh in annual production among food crops in the world. Its wide adaptability on marginal lands and rich nutritional content provide a high potential for preventing malnutrition and enhancing food security in the developing countries. In addition, sweetpotato can be developed as a bioreactor to produce valuable industrial materials including bio-ethanol, functional feed and antioxidants by molecular breeding. In this respect, we focus on the molecular breeding of sweetpotato with multi-function on marginal lands. The strategies for development of environmentally friendly industrial sweetpotato will be introduced and discussed.
Trehalose is a non-reducing disaccharide in increasing demand for applications in food, nutraceutical, and pharmaceutical industries. Single-step trehalose production by trehalose synthase (TreS) using maltose as a starting material is a promising alternative process for industrial application due to its simplicity and cost advantage. Pseudomonas monteilii TBRC 1196 was identified using the developed screening method as a potent strain for TreS production. The TreS gene from P. monteilii TBRC 1196 was first cloned and expressed in Escherichia coli. Purified recombinant trehalose synthase (PmTreS) had a molecular weight of 76 kDa and showed optimal pH and temperature at 9.0 and 40℃, respectively. The enzyme exhibited >90% residual activity under mesophilic condition under a broad pH range of 7-10 for 6 h. Maximum trehalose yield by PmTreS was 68.1% with low yield of glucose (4%) as a byproduct under optimal conditions, equivalent to productivity of 4.5 g/l/h using enzyme loading of 2 mg/g substrate and high concentration maltose solution (100 g/l) in a lab-scale bioreactor. The enzyme represents a potent biocatalyst for energy-saving trehalose production with potential for inhibiting microbial contamination by alkaline condition.
Microalgae have great potential in the biomedical and pharmaceutical industries as a new type of bioreactor that can produce proteins for specific purposes, including recombinant proteins, pharmaceuticals, and industrial enzymes. Despite the production advantages and importance of microalgae-based expression systems, studies on secretion efficiency are limited. In this study, for stable expression and efficient secretion of the heterologous protein (human SCF and human INFγ) in Chlorella vulgaris, we constructed SP:hSCF:His and SP:hINFγ:His plant binary vectors using the signal peptide (SP) of Chlamydomonas reinhardtii, and we obtained stable transformants through the effective agrobacterium-mediated transformation of these vectors. Transformants with accurately inserted hSCF and hINFγ demonstrated stably increased mRNA and protein expression using RT-PCR and western blotting under the same culture conditions. Following the analysis of the proteins secreted into the culture medium using ELISA, it was confirmed that hINFγ was effectively produced in the transformed C. vulgaris culture medium. The overall findings indicate that the combination of heterologous protein and SP may be crucial for ensuring the expression and secretion of recombinant proteins in Chlorella culture systems.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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