• 한국식품과학회지
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• 제54권1호
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• pp.1-7
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• 2022

본 연구에서는 형광등 빛 조사 하에 각종 감광제와 아미노산의 조합에 의한 NBT의 환원 특성을 조사하였다. 기존 SOD 활성 측정에 이용된 Rb-Met 반응계는 증류수나 Tris보다는 PBS 용매 상에서 가장 우수한 효과를 나타냈다. 빛 조사 하에 Rb에 의한 NBT 환원을 위해서는 Met과 His 등의 아미노산이 필요하며, 감광제로서는 isoalloxazine 계열의 Rb와 thiazine 계열의 MB가 효과적인 환원 반응을 유도했다. 하지만 각종 감광제나 아미노산의 조합, 그리고 반응 용매에 따라 NBT 환원정도가 상이하며, 특히 Rb-Met in PBS와 MB-His in Tris 반응계가 가장 큰 반응을 유도하였다. Rb에 의해 유도된 NBT 환원반응은 SOD 및 gallic acid에 의해 효과적으로 저해되었으나, Tris 상에서 MB-His에 의한 NBT 환원은 SOD 및 gallic acid에 의한 저해효과가 미미하여 Rb와는 다른 기작에 의해 NBT 환원이 유도되는 것으로 보인다. 본 결과는 감광제와 아미노산에 따라 빛 조사 하에 다양한 상호작용이 발생하며, NBT 환원을 유도하는데 superoxide anion 뿐만 아니라 다른 요인도 관여할 수 있음을 시사한다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제36권5호
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• pp.364-369
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• 1993

널리 이용되는 검량방법중의 하나인 NBT 환원방법은 계면활성제인 Triton X-100의 존재하에서 그 측정감도가 크게 증폭된다. 본 연구는 이러한 Triton X-100 효과의 물리화학적 본질을 이해하기 위하여 수행하였으며, 이를 위하여 이 계면활성제가 NBT의 환원생성물인 불용성 formazan 콜로이드를 안정화시키는 효과와 수용액 중에서 동시에 진행되는 두 반응 $(NBT-O^-_{\.{^.2}}$ 산화환원 반응과 $O^-_{\.{^.2}}$의 disproportionation반응) 간의 경쟁관계에 미치는 속도론적 영향에 촛점을 맞추었다. Triton X-100 유무 조건하에서 $KO_2-DMSO$ 용액과 $K-PO_4$ 완충용액에 녹인 여러가지 농도의 NBT 용액을 빠르게 혼합하고, 이때 생성된 formazan과 $H_2O_2$를 각각 정량한 결과, 이 계면활성제는 formazan 콜로이드를 안정화 시킴으로써 결과적으로 formazan의 흡수도를 상승시키는 효과를 보일뿐만 아니라 $O^-_{\.{^.2}}$의 자발적인 dismutation을 억제하는 결과를 초래함을 확인하였다. 또한 종합적인 Triton X-100의 효과에 대한 콜로이드 안정화 효과와 속도론적 효과의 상대적 기여도는 실험조건에 따라 바뀌는데 특히 반응계의 $NBT/O^-_{\.{^.2}}$ 농도비율에 크게 좌우되는 것으로 밝혀졌다.

• 한국어병학회지
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• 제14권1호
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• pp.3-10
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• 2001

식물성 생약재의 항균력과 활성산소(superoxide anion, $O_2^-$)의 생산에 미치는 in vitro 효과를 조사하여 금후 in vivo 실험에 적용할 때, 어류 체내 자연 저항성 증진을 꾀할 수 있는 식물성 생약재를 발굴하기 위한 기초자료를 얻고자 하였다. 식물성 생약재는 고삼, 귀전우, 구절초, 박하, 방풍, 연교, 약쑥, 지유, 삼백초, 삼지구엽초, 상백피, 소회향, 편축, 팔각 등 14종류로 이들을 열수추출하여 실험에 사용하였다. 항균력 시험에는 어병세균 Listonella anguillarum(Vibrio anguillarum), Vibrio sp., Vibrio alginolyticus, Edwardsiella tarda, Streptococcus sp., Lactcoccus garvieae를 대상으로 disk법을 사용하였으며, 활성산소의 생산능은 넙치 신장 대식세포를 이용한 nitroblue tetrazolium(NBT) 반응으로써 조사하였다. 그 결과,약쑥이 다른 생약재에 비하여 시험에 사용된 어병 세균에 대한 항균활성이 월등히 뛰어났으며, 또한 넙치 대식세포의 활성산소 생산능을 크게 자극하는 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

• 한국수산과학회지
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• 제37권4호
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• pp.275-280
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• 2004

In this study, the effcts of kelp (Ascophyllum nodosum) meal on growth and immune responses of parrot fish (Oplegnathus fasciatus) were studied. Fish were fed an experimental diet supplemented with $2{\%}\;and\;5{\%}$ kelp meal in a controled diet. Several factors such as weight gain, hematological parameters and nonspecific immune responses were evaluated far 0, 2, 4 and 8 weeks after the administration of the kelp meal supplemented diet. Weight gain in the fish fed the diet supplemented with $2{\%}\;and\;5{\%}$ kelp meal was not significant among the tested groups. The NBT reaction of the phagocytes in the head kidney and the phagocytic rate/index of phagocytes in the peripheral blood were significantly higher than the control group. But, there was no significant difference both in complement bactericidal activity, mucus Iysozyme activity and hematology among each group.

• 동의생리병리학회지
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• 제21권4호
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• pp.940-945
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• 2007

We have examined the induction of HL-60 cell differentiation by treatment of 2-chloromethyl-1-dihydroxyphosphinyl pyrrolidine(2C-1DPP), which is derivative of piperidine and pyrrolidine by ${\alpha}-phosphoramidoakylation$ reaction. It was observed that HL-60 cell proliferation was dose- and time-dependently inhibited by treatment with 2C-1DPP. 2C-1DPP treatment caused a significant change in NBT reduction and enhanced ATRA-induced NBT reduction. Treatment of 2C-1DPP to HL-60 cells increased only CD11b expression in the cells, and also increased markedly G0/G1 stage arrest of HL-60 cells. These results can suggest that 2C-1DPP induced the differentiation of HL-60 cells to granulocytes lineage and enhanced ATRA-induced differentiation. Moreover, DNA expression levels of p27 were up-regulated during 2C-1DPP-dependent HL-60 cell differentiation. Our results suggest that 2C-1DPP have potential as a therapeutic agent in human leukemia.

• 방사선산업학회지
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• 제5권3호
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• pp.221-225
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• 2011

To detect superoxide anion ($O_2{\cdot}^-$) or singlet oxygen ($^1O_2$) in biological systems during gamma irradiation, specific chemical probes, 4,5-dihydroxy-1,3-benzene disulfonic acid (Tiron) or 2,2,6,6-tetramethyl-piperidine (TEMP), were evaluated. Tiron or TEMP spin adducts was structurally stable in aqueous solution during gamma irradiation up to 500 or 1,000 Gy, respectively. The signal of Tiron semiquinone radical, a spin adduct of Tiron upon reaction with $O_2{\cdot}^-$, was slightly increased by gamma irradiation. This trend was dose-dependently manifested in $O_2$-saturated aqueous solution using nitro blue tetrazolium (NBT), a common probe for both hydrated electron ($e{^-}_{aq}$) and $O_2{\cdot}^-$. In contrast, a spin adduct of TEMP, was never inducible by gamma irradiation, while its signal was substantially enhanced by photosensitization of riboflavin. These results suggest that Tiron and NBT or TEMP could be utilized to detect $O_2{\cdot}^-$ or $^1O_2$ in biological systems during gamma irradiation, although $O_2{\cdot}^-$ or $^1O_2$ are not the main reactive oxygen species produced by water radiolysis.

• 대한약리학회지
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• 제21권1호
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• pp.12-26
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• 1985

흰쥐 뇌 미토콘드리아에 의한 $O^{-}_{2}{\cdot}$ 의 생성과 이 radical의 유해작용 및 그 작용기전을 알아보기 위하여 본실험을 수행하였다. Succinate와 antimycin존재하에서 미토콘드리아는 $O^{-}_{2}{\cdot}$을 생성하였으며 이는 SOD-inhibitable NBT환원으로 확인되었다. 동일 조건에서 $H_2O_2$는 일차생성물인 $O^{-}_{2}{\cdot}$의 dismutation으로 생성됨을 알수 있었다. 상기조건에서 미토콘드리아의 막지질이 파괴되었고 반응액에 첨가된 isocitrate dehydrogenase와 적혈구에 각각 불활성화와 용혈이 초래되었다. 이같은 작용은 $Fe^{++}$이 있을때만 관찰 되었다. 그리고 독작용은 superoxide dismutase 혹은 castalase에 의해서 억제되었다. 또한 methional을 첨가하였을 때 ethylene이 생성되었으며 그 생성은 $Fe^{++}$에 의하여 현저히 증가하였다. Ethylene 생성 역시 상기 효소에 의하여 억제되었다. 따라서 미토콘드리아에서 발생된 $O^{-}_{2}{\cdot}$은 거대분자 및 세포에 독성을 나타낼수 있으며 이같은 작용은 $Fe^{++}$의 촉매작용에 의한 $O^{-}_{2}{\cdot}$와 $H_2O_2$의 상호작용으로 발생되는 $OH{\cdot}$ 에 의한것으로 추측되었다. 이상의 결과는 미토콘드리아가 유독성 산소 radical을 발생하므로 조직손상을 시킬 수 있다는 가능성을 시사하는 증거라고 생각되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제33권3호
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• pp.378-383
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• 2001

중금속 이온 존재 하에서 AsA 자동산화반응 과정에서의$O_2\bar{{\bullet}}$ 생성을 조사하기 위해, 수용액, 완충용액, 그리고 메탄올 용액 중에서 산소가스를 통기하면서 AsA 산화반응을 유도하였다. 우선, 수용액 및 완충용액 중에 SOD를 이용하여, $O_2\bar{{\bullet}}$로부터 생성되는 $H_2O_2$를 소거하기 위해 CAT를 첨가해서, SOD 무첨가의 경우와 비교하여 실험하였다. 그 결과, 수용액 중에서도 완충용액 중에서도 SOD가 $O_2\bar{{\bullet}}$를 소거하고, SOD의 존재에 따라 AsA 산화 반응이 억제되는 것이 밝혀졌다. 또한, 완충용액 중에서는 XTT를 가지고 $O_2\bar{{\bullet}}$ 생성을 재확인하기 위해, $O_2\bar{{\bullet}}$에 의한 XTT의 환원생성물인 formazan의 생성량이 470nm에서 흡수극대를 갖는 것을 확인한 후, AsA 산화반응 과정 중에 $O_2\bar{{\bullet}}$가 생성되는 것을 확인하였다. 이처럼, Fe(III)이온 및 Cu(II)이온이 존재하는 경우에도 비존재하의 경우와 마찬가지로 AsA 자동산화반응 과정 중에서 $O_2\bar{{\bullet}}$가 생성되는 것이 확인되었다. 또한, 메탄올 용액 중에서 Fe(III)이온 및 Cu(II)이온 존재하에서의 AsA 자동산화반응 과정에서의 $O_2\bar{{\bullet}}$ 생성을 조사하기 위해 NBT법을 이용하여 흡수극대 560nm에서 NBT의 환원생성물인 bule formazan을 측정하고,$O_2\bar{{\bullet}}$ 생성을 확인하였다. 반응개시로부터 15분이 경과하면서 반응액의 색변화를 눈으로 관찰할 수 있었으며, 560nm에서의 흡광도 측정치가 높아지는 경향을 나타내어 실험적으로 $O_2\bar{{\bullet}}$가 생성되는 것을 확인하였다. 또한, AsA 산화반응을 일으키는 과정에서 산소 농도의 증가에 따라 formazan 생성량이 증가한 사실과 AsA 농도의 증가에 따라 formazan 생성량이 낮아지는 경향을 보인 사실, 그리고, AsA 농도에 따른 분해율을 조사한 결과, 본 실험에 사용된 $50\;{\mu}M$의 AsA 농도에서는 분해된 양이 거의 변화가 없는 것으로 보아 NBT가 아닌 AsA 자동산화반응 과정에서 생성된 $O_2\bar{{\bullet}}$에 의해 formazan이 생성된 것임이 확인되었다. 한편, Fe(III)이온 및 Cu(II)이온 존재 하에서 $0.01\;{\mu}M$이하의 낮은 농도에서는 $O_2\bar{{\bullet}}$ 생성이 중금속 이온 비존재 하에서의 경우보다 유의적으로 높은 것으로 밝혀졌지만, 그 이상의 농도에서는 낮은 수치를 나타내었다 이상의 결과로 보아 수용성계에서 뿐 만 아니라, 비수용성계에서도 중금속 이온 존재 하에서의 AsA 자동산화반응에서의 $O_2\bar{{\bullet}}$ 생성이 시사되었다.

• Journal of Plant Biology
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• 제33권2호
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• pp.111-118
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• 1990

In order to characterize the chloroplasts of Korean ginseng as a semi-shade plant and radish as a sun plant, effects of growth light intensity on photosynthetic electron transport (PS) activity in chloroplasts and superoxide (O2.-) production in thylakoid membrane by irradiation were investigated. High-light chloroplasts of both plants showed higher PS activities than those grown under ow growth light intensity. High PS II and low PS I activities in ginseng chloroplasts (ratio of PS II/PS I : 1.1) were observed, but radish chloroplasts showed low PS II and high PS I activities (ratio of PS II/PS I : 0.3). PS II activity of both plants was little affected by temperature in range of 15-35$^{\circ}C$. Activities of whole -chain (PS II+I) in ginseng and PS I in radish were increased at high temperature (4$0^{\circ}C$). Preincubation of chloroplasts at 4$0^{\circ}C$ during 30 min, as a mild heat stress, caused rapid decrease in PS II and PS II+I activities of both plants. However PS I activity was not decreased in ginseng and rather increased in radish. O2.- production (NBT reduction) in Mehler reaction in the thylakoid membrane was inhibited by DCMU in both plants. DMBIB inhibited O2.- production in ginseng, but radish was insensitive to DMBIB. Electron flow system in ginseng thylakoid membrane was more susceptible to damage of photooxidation than that of radish.

• Korean Journal of Acupuncture
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• 제28권2호
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• pp.23-36
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• 2011

목적 : 이 연구는 관절 및 심혈관계 질환 치료에 사용되는 송절(松節)(Pinus densiflora Gnarl)을 약침용 시료로 조제하여 본 약물의 항산화 효능을 규명하고자 하였으며 이를 다양한 시스템에서 검토하였다. 방법 : $FeCl_2$-ascorbic acid system에서 흰쥐 간조직의 지질과산화 반응을 관찰하였고, Fenton reaction system에서 자유기에 의한 plasmid DNA 분절을 유도하였다. 또한 deoxyribose assay를 통해 hydroxyl radical 소거능을 관찰하였고, NBT reduction assay로 superoxide radical 소거능을 검토하였다. 또한 human low-density lipoprotein(LDL)의 산화를 유도하기 위해 $CuSO_4$와 AAPH를 사용하였으며 relative electrophoretic mobility (REM) assay로 LDL 산화 억제 효능을 대조 항산화물질과 비교 검토하였다. 결과 : 송절 약침액은 자유기에 의한 간조직의 지질과산화(p < 0.01)및 DNA 분절을 현저하게 억제하였으며, hydroxyl radical, superoxide radical (p < 0.01), nitric oxide 및 peroxynitrite를 강하게 소거하였다. 또한 $CuSO_4$ ($IC_{50}=9.2{\pm}0.2\;{\mu}g/ml$)와 AAPH ($IC_{50}=34.8{\pm}5.1\;{\mu}g/ml$)에 의해 유도된 human LDL의 산화를 억제하였고, REM assay에서도 산화 억제 효능을 재확인할 수 있었다. 결론 : 송절 약침액은 활성산소종 및 활성질소종를 소거하였고, 지질과산화를 억제하였으며, 특히 human LDL의 산화적 손상을 방어하였다. 이에 본 약물은 자유기에 의한 심혈관의 산화적 손상을 효과적으로 보호할 것으로 판단된다.