Clinical strains of Mycobacterium tuberculosis, M. terrae complex, M. gordonae, M. avium-intracellulae complex, and M. fortuitum from Korean patients were isolated and analyzed by comparing large restriction fragment (LRF) patterns produced by digestion of genomic DNA with infrequent-cutting endonucleases like AsnI and XbaI. and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Three M. tuberculosis, two M. terrae complex, two M. gordonae, two M. avium-intracellulae complex, and two M. fortuitum strains were compared by using AsnI and XbaI. and this allowed easy visual separation of all epidemiologically unrelated strains. PFGE exhibits different DNA restriction patterns which are easy to compare. Genome size of the strains roughly ranged from 3020 to 3335 kb. The LRF patterns are useful for epidemiologic studies of tuberculosis with regard to drug resistance.
Koh, Won Jung;Kwon, O Jung;Suh, Gee Young;Chung, Man Pyo;Kim, Hojoong;Lee, Nam Yong;Kim, Tae Sung;Lee, Kyung Soo;Park, Eun Mi;Park, Young Kil;Bai, Gill Han
Tuberculosis and Respiratory Diseases
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v.54
no.4
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pp.459-466
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2003
Mycobacterium kansasii is the second most common cause of nontuberculous mycobacterial pulmonary disease in Western countries and Japan. The clinical and radiological features of pulmonary disease caused by M. kansasii usually resemble those of pulmonary tuberculosis including cavitary infiltrates with an upper lobe predilection. It is also now apparent that patients with M. kansasii pulmonary disease can present with noncavitary nodular bronchiectatic infiltrates similar to lung diseases of M. avium complex. With rifampin-containing regimens, treatment success rates are almost 100%. Timely diagnosis before the development of extensive disease and effective overall treatment strategies are very important to ensure that patients receive the appropriate medications for a sufficiently long period of time. To our knowledge, there has been no Korean case report of M. kansasii pulmonary disease in the immunocompetent patient until now. We report three cases of M. kansasii pulmonary disease in immunocompetent adult patients.
Park, Sam-Seok;Kwak, Kyung-Rok;Hwang, Ji-Yun;Yun, Sang-Myeong;Ryue, Chi-Chan;Chang, Chul-Hun;Lee, Min-Gi;Park, Sun-Gue
Tuberculosis and Respiratory Diseases
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v.47
no.6
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pp.747-756
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1999
Background: Acid-fast stain and cultures for diagnosis of pulmonary tuberculosis are primary and essential method, but have their limitation : low sensitivity and time consuming. The objective of this study is comparison of amplified Mycobacterium tuberculosis direct test(MTD) by the conventional AFB smears and cultures in the detection of Mycobacterium tuberculosis in respiratory specimens. Methods: During the period between November, 1997 and May, 1998 a total of 267 respiratory specimens (sputum 173, bronchial washing 94) from 187 patients suspected pulmonary tuberculosis were subjected to AFB smears, cultures and MID test. MID is based on nucleic acid amplification. We compared the MID with 3% Ogawa culture method. In positive AFB smear and negative MID specimen, positive culture identification between nontuberculous mycobacterium and M.tuberculosis was assesed by using Accuprobe M.tuberculosis complex probe. In negative AFB smear and negative AFB culture, MTD results are assessed by clinical follow-up. Results : 1) Compared with culture in sputum and bronchial fluid specimens, sensitivity and specificity of MTD in positive AFB smear is 79.7% and 20.0%, sensitivity and specificity of MTD in negative AFB smear specimens is 75.0% and 79.7%. 2) Discrepant analysis is assessed by clinical follow-up and other specimen results beyond study. Culture negative but MTD positive specimens were proved to be true positive and gave MTD sensitivity 79.2%, specificity of 84.4%, positive predictive value 80.5% and negative predictive value 83.2%. 3) 14 out of 31 specimens in negative AFB smear, negative AFB culture and positive MTD showed pulmonary tuberculosis diagnosed on clinical follow-up and sensitivity is 45.2%. 4) 2 out of 13 specimens in positive AFB smear, positive AFB culture and negative MID diagnosed as non tuberculous mycobacterium by Accuprobe culture. Conclusion: This study suggested that MID in respiratory specimens is simple and rapid diagnostic method, but considered adjuvant method rather than replace the conventional AFB smear and culture.
Wang, Hye-young;Uh, Young;Kim, Seoyong;Cho, Eunjin;Lee, Jong Seok;Lee, Hyeyoung
Annals of Laboratory Medicine
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v.38
no.6
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pp.569-577
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2018
Background: The increasing prevalence of drug-resistant tuberculosis (TB) infection represents a global public health emergency. We evaluated the usefulness of a newly developed multiplexed, bead-based bioassay (Quantamatrix Multiplexed Assay Platform [QMAP], QuantaMatrix, Seoul, Korea) to rapidly identify the Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) and detect rifampicin (RIF) and isoniazid (INH) resistance-associated mutations. Methods: A total of 200 clinical isolates from respiratory samples were used. Phenotypic anti-TB drug susceptibility testing (DST) results were compared with those of the QMAP system, reverse blot hybridization (REBA) MTB-MDR assay, and gene sequencing analysis. Results: Compared with the phenotypic DST results, the sensitivity and specificity of the QMAP system were 96.4% (106/110; 95% confidence interval [CI] 0.9072-0.9888) and 80.0% (72/90; 95% CI 0.7052-0.8705), respectively, for RIF resistance and 75.0% (108/144; 95% CI 0.6731-0.8139) and 96.4% (54/56; 95% CI 0.8718-0.9972), respectively, for INH resistance. The agreement rates between the QMAP system and REBA MTB-MDR assay for RIF and INH resistance detection were 97.6% (121/124; 95% CI 0.9282-0.9949) and 99.1% (109/110; 95% CI 0.9453-1.0000), respectively. Comparison between the QMAP system and gene sequencing analysis showed an overall agreement of 100% for RIF resistance (110/110; 95% CI 0.9711-1.0000) and INH resistance (124/124; 95% CI 0.9743-1.0000). Conclusions: The QMAP system may serve as a useful screening method for identifying and accurately discriminating MTBC from non-tuberculous mycobacteria, as well as determining RIF- and INH-resistant MTB strains.
Mycobacterium bovis, a member of the M. tuberculosis complex (MTC), is the causative agent of bovine tuberculosis. Detection of M. bovis and M. tuberculosis using conventional culture- and biochemical-based assays is time-consuming. Therefore, a simple and sensitive molecular assay for rapid detection would be of great help in specific situations such as faster diagnosis of bovine tuberculosis (bTB) infection in the abattoirs. We developed a novel multiplex real-time PCR assay which was applied directly to biological samples with evidence of bTB and it was allowed to differentiate between M. bovis and M. tuberculosis. The primers and TaqMan probes were designed to target the IS1081 gene, the multi-copy insertion element in the MTC and the 12.7-kb fragment which presents in M. tuberculosis, not in the M. bovis genome. The assay was optimized and validated by testing 10 species of mycobacteria including M. bovis and M. tuberculosis, and 10 other bacterial species such as Escherichia coli, and cattle lymph nodes (n=113). The tests identified 96.4% (27/28) as M. bovis from the MTC-positive bTB samples using conventional PCR for specific insertion elements IS1081. And MTC-negative bTB samples (n=85) were tested using conventional PCR and the real-time PCR. When comparative analyses were conducted on all bovine samples, using conventional PCR as the gold standard, the relative accuracy of real-time PCR was 99.1%, the relative specificity was 100%, and the agreement quotient (kappa) was 0.976. The detection limits of the real-time PCR assays for M. bovis and M. tuberculosis genomic DNA were 10 fg and 0.1 pg per PCR reaction, respectively. Consequently, this multiplex real-time PCR assay is a useful diagnotic tool for the identification of MTC and differentiation of M. bovis and M. tuberculosis, as well as the epidemiologic surveillance of animals slaughtered in abattoir.
Recently, the detection of Mycobacterium tuberculosis complex (MTBC) in respiratory specimens has decreased, and nontuberculous mycobacteria (NTM) has increased. This study examined the increase in NTM lung disease patients and their age and sex distribution compared to the increase in NTM detection in 132,359 respiratory specimens examined in a Gwangju Secondary Hospital from 2010 to 2019. Furthermore, the prevalence of pulmonary tuberculosis infection in NTM positive patients was investigated. The positive rates of the mycobacterial culture were 21.9% (1,624/7,403) in 2010 and 17.4% (1,937/11,161) in 2019. The NTM recovery rate increased from 38.0% (617/1,624) in 2010 to 72.4% (1,403/1,937) in 2019. The average diagnosis rate of NTM lung disease in the NTM positive patients was 27.1%. Among them, cases of current pulmonary tuberculosis infection decreased from 44.9% in 2010 to 23.4% in 2019, and cases of previous diagnosis or treatment decreased from 15.8% to 10.7%. Of all NTM lung diseases, 69.0% were in their 60s or older, with more females than males. In the future, according to aging and tuberculosis management policies, NTM detection is expected to increase while MTBC decreases and laboratories must pay close attention to this phenomenon and constantly monitor the test results.
The pathogen Mycobacterium avium complex (MAC) is the most common cause of nontuberculous mycobacterial pulmonary disease worldwide. The decision to initiate long-term antibiotic treatment is difficult for the physician due to inconsistent disease progression and adverse effects associated with the antibiotic treatment. The prognostic factors for the progression of MAC pulmonary disease are low body mass index, poor nutritional status, presence of cavitary lesion(s), extensive disease, and a positive acid-fast bacilli smear. A regimen consisting of macrolides (clarithromycin or azithromycin) with rifampin and ethambutol has been recommended; this regimen significantly improves the treatment of MAC pulmonary disease and should be maintained for at least 12 months after negative sputum culture conversion. However, the rates of default and disease recurrence after treatment completion are still high. Moreover, treatment failure or macrolide resistance can occur, although in some refractory cases, surgical lung resection can improve treatment outcomes. However, surgical resection should be carefully performed in a well-equipped center and be based on a rigorous risk-benefit analysis in a multidisciplinary setting. New therapies, including clofazimine, inhaled amikacin, and bedaquiline, have shown promising results for the treatment of MAC pulmonary disease, especially in patients with treatment failure or macrolide-resistant MAC pulmonary disease. However, further evidence of the efficacy and safety of these new treatment regimens is needed. Also, a new consensus is needed for treatment outcome definitions as widespread use of these definitions could increase the quality of evidence for the treatment of MAC pulmonary disease.
Keun Ju Kim;Seung-Hwan Oh;Doosoo Jeon;Chulhun L. Chang
Tuberculosis and Respiratory Diseases
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v.86
no.1
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pp.47-56
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2023
Background: There is a global increase in isolation of nontuberculous mycobacteria (NTM). The aim of the study was to analyze longitudinal trends of NTM identification and pattern of antimicrobial susceptibility testing. Methods: NTM recovery rates, distribution of NTM species identification, and antimicrobial susceptibility pattern of NTM at Pusan National University Yangsan Hospital between January 2016 and December 2020 were retrospectively analyzed. Results: A total of 52,456 specimens from 21,264 patients were submitted for mycobacterial culture, of which 2,521 from 1,410 patients were NTM positive over five years (January 2016 to December 2020). NTM isolation showed an increasing trend from 2016 to 2020 (p<0.001, test for trend) mainly caused by Mycobacterium avium complex. The vast majority of M. avium complex were susceptible to key agents clarithromycin and amikacin. For Mycobacterium kansasii, resistance to rifampin and clarithromycin is rare. Amikacin was the most effective drug against Mycobacterium abscessus subspecies abscessus and Mycobacterium subspecies massiliense. Most of M. subspecies massiliense were susceptible to clarithromycin, while the majority of M. abscessus subspecies abscessus were resistant to clarithromycin (p<0.001). Conclusion: There was an increasing trend of NTM isolation in our hospital. Resistance to key drugs was uncommon for most NTM species except for M. abscessus subspecies abscessus against clarithromycin.
The differential diagnosis of atypical mycobacteriosis caused by atypical mycobacteria (with the exception of Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium bovis, and Mycobacterium leprae) which are widly distributed in soil and water, from pulmonary tuberculosis is possible only when atypical mycobacteria are isolated and identified. In this investigation, attempts were made to isolate atypical mycobacteria from persons registered as tuberculosis patients in the Anyang Health Center in Anyang City, Kyungki province, Korea. Biological and biochemical tests were performed for the atypical mycobacteria isolated from these patients, also retrospective analysis of clinical and X-ray findings of the patients with bacteriologically confirmed atypical mycobacteriosis were done. The results can be summarized as follows: 1. 103 strains of mycobacteria were isolated among 334 sputum samples from patients. 2. Among the isolated mycobacteria, 10 strains (9.7%) were found to be a atypical mycobacteria and 93 strains (90.3%) were tubercle bacilli of human type. 3. On the basis of Runyon's grouping of atypical mycobacteria, there were 3 strains (30.0 %) of scotochromogen and nonphotochromogen respectively, 4 strains (40.0%) of rapid grower, and no photochromogen. 4. By biochemical tests, 3 strains of scotochromogen were identified as Mycobacterium scrofulaceum (2 strains) and Mycobacterium szulgai (1 strain) 3 strains of nonphotochromogen were Mycobacterium avium-complex (2 strains) and Mycobacterium terriae (1 strain), and 4 strains of rapid grower were Mycobacterium fortuitum (3 strains) and Mycobacterium chelonei. 5. In drug sensitivity tests, all 10 strains isolated atypical mycobacteria showed resistance to various concentration of INH and SM and low concentration (10mcg, 40mcg and 50mcg) of EB, TH, and CS, and were sensitive to only high concentration (20mcg and 100mcg) of EB, TH, CS, and RFP. 6. In analysis of clical findings by the patients with bacteriologically confirmed atypical mycobacteriosis, it was found that clinical symptoms of these patients appeared not to be mild than those of patients with pulmonary tuberculosis. The patients with atypical mycobacteriosis had been treated for pulmonary tuberculosis for a long time and they showed no improvement.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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