M. fortuitum은 호흡기 검체에서 동정되는 경우 대부분 집락화나 일시적인 감염으로 여겨지고 있고, 다른 NTM 폐질환처럼 장기간의 항생제 치료가 필요한 경우는 드물다. 저자들은 객담 항산균 도말과 배양검사에서 강양성을 보이면서, 임상증상과 방사선의 악화소견을 보여 장기간의 경구용 항생제 치료를 실시한 M. fortuitum 폐질환 1예를 경험하였기에 문헌고찰과 함께 보고하는 바이다.
Clostridium perfringens (C. perfringens)와 Mycobacterium fortuitum (M. fortuitum)은 동물과 사람에서 심각한 질병과 관련이 있는 세균들로 알려져 있다. 본 연구에서는, povidone-iodine을 주성분으로 하는 소독제의 살균효과를 C. perfringes와 M. fortuitum을 대상으로 평가하였다. 소독제의 살균효과는 배지희석법을 이용하여, 대상 세균들을 $4^{\circ}C$에서 소독제에 30분 동안 노출시킨 다음, 가장 낮은 소독제의 살균 희석배수를 결정하였다. 소독제는 경수와 유기물로 희석하였으며, 경수 조건에서, C. perfringes와 M. fortuitum에 대해 효과적인 소독제 희석배수는 각각 50과 80배이었다. 유기물 조건에서는, C. perfringes와 M. fortuitum에 대해 효과적인 소독제 희석배수는 모두 15배로 나타났다. 이상의 결과로 부터, povidone-iodine을 주성분으로 하는 소독제는 C. perfringes와 M. fortuitum에 대해 살균효과를 갖는 것으로 확인되었으며, C. perfringes와 M. fortuitum에 의한 질병의 확산을 방지하기 위해 사용될 수 있을 것으로 사료된다.
The steroid 9${alpha}$-hydroxylase activity has been detected in cytosol fraction, $100,00{\times}g$ supernatant of cell free extract of Mycobacterium fortuitum. The activity was not linear with protein concentration in the assay suggesting 9${alpha}$-hydroxylase is a multicomponent enzyme. The 9${alpha}$-hydroxylase system was partially purified through fractional saturation of ammonium sulfate, strong anion exchange (Mono Q) column chromatography, gel filtration (Superose 12) column chromatography, and testosterone affinity gel chromatography. Ammonium sulfate 50~60% saturated fraction of the cytosol gave 9${alpha}$-hydroxylase activity. For further purification, the half-saturated ammonium sulfate fraction was applied to Mono Q, Superose 12, or affinity gel column. The purification factors of 9${alpha}$-hydroxylase containing fraction after Mono Q, Superose 12, and affinity gel chromatography was 13, 11, and 17 respectively.
항산균 감염증의 예방 및 치료를 위하여는 역학적인 연구가 중요하다. 본 연구에서는 감염증의 분자역학적 연구를 위한 기법중 아직 항산균을 대상으로 pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) 분석법을 확립하고자 하였다. PFGE분석에 적절한 제한효소는 DraI, AsnI 및 XbaI 등이었고 각 제한효소마다 최적의 PFGE조건은 서로 달랐다. DraI의 경우는 두단계로 나누어 전기영동을 시행하였다. 제1단계의 initial pulse는 10초 final pulse는 15초였으며 제2단계는 initial pulse는 60초 final pulse는 70초이었다. 전기영동시간은 각 단계마다 각각 14시간씩이었다. XbaI의 경우는 제2단계 없이 initial pulse가 3초 final pulse가 12초였고 전기영동시간은 22시간이었다. AsnI의 경우는 제2단계 없이 initial pulse가 5초 final pulse가 25초였고 전기영동시간은 22시간이었다. 모든 경우에 있어서 전압은 200V로 하였다. 표준균주로는 M. bovis BCG, M. tuberculosis 및 M. fortuitum등을 사용하였는데 PFGE분석상 동일균종내에서 표준균주들 간의 차이는 발견할 수 없었다. 임상에서 분리된 9주의 M. fortuitum 균주를 대상으로 AsnI 제한효소로 PFGE분석을 시행한 결과 2주만을 제외하고는 서로 간의 유전형 분류가 가능하였다. 균주간의 유전적 거리를 결정하기 위하여 cluster analysis를 시행한 결과 M. fortuitum 균주들은 크게 두 집단으로 나뉘었다. 제한효소 AsnI으로 동일 균종의 분류가 안되는 M. fortuitum 균주들은 XbaI 제한효소을 사용한 PFGE분석으로 유전형의 구분이 가능하였다. Cluster analysis를 시행한 결과 크게 두 집단으로 나뉘었던 M. fortuitum 균주들은 보다 복잡한 집단으로 분류되어 XbaI을 사용한 PFGE분석법이 M. fortuitum 균주분류를 위하여는 보다 적절함을 알 수 있었다. Cluster analysis에서 얻은 최대 % dissimilarity 값은 0.74(AsnI) 및 0.75(XbaI)로서 이 값은 arbitrarily primed polymerase chain reaction(AP-PCR)법보다는 높고 restriction fragment length polymorphism(RFLP) 법보다는 낮아 PFGE법이 RFLP를 보완하거나 대치할 수 있는 세균 유전형 분석법임을 알 수 있었다.
We developed a giant colony test system with rapidly growing mycobacteria by stab-culture with a loopful inoculum of cells into Middlebrook 7H10 agar medium containing soluble extracts of the fruits of Gardenia jasminoides(7H10-crocin agar medium) and assessed the significance of the giant colony test with 28 strains of 10 clusters of rapidly growing mycobacteria classified by the simple biological 5-test characters. Of the 10 clusters of mycobacteria tested, some of strains which belonged to cluster No. 1a, 5a and 11a did grow as gravis types, whereas most of other clusters gave mitis or intermedius types in their colonial sizes at 12 days culture. By this test, pathogenic strains of M. fortuitum-chelonei complex which belonged to cluster No. 5a, b, 7a and 8a, b could be divided into gravis, intermedius and mitis colony types and the gravis ones were characterized by bluish-white "mushroom-shaped" colonies with central complexes in the texture, whereas the intermedius gave grayish-white "flower-shaped" colonies with radiated folds, but without any central complexes. The mitis colonies were characterized by grayish-white smooth or smooth mucoid colonies and were common among the clusters in their shapes. The colony of M. chelonei was bluish-white mitis type and was characterized by its hilly rhizoid colony. The gravis colony of cluster No. 1a identified as M. phlei was characterized by yellow "round straw- mat-shaped" or "chrysanthemum-shaped" colony with whole complexes in the texture, and the gravis colonies of the cluster No. 11a gave grayish-white "flower-shaped" colonies with central stamens, radiating trough and fine cup-shaped strands in the texture. The four colony types of pathogenic species of M. fortuitum-chelonei complex on 7H10-crocin agar medium were distinctive from those of other clusters of rapidly growing mycobacteria and these results indicated that the giant colony test, in conjunction with the simple 5-test characters, would be of value in the differentiation of M. fortuitum complex from other clusters of rapidly growing mycobacteria.
A study on the production of mycobacterial antogens has been made in order to improve immunological reactivity and specificity, which have long been explored for the better use of immunological diagnosis of mycobacterial infections. Instead of culture filtrate cell extract was used as a starting material for the production of antigens in this study. Cell extract was fractionated though several steps such as salting out, gel filtration and ion exchange column chromatography and reactivity and specificity of the fractions so produced were enaluated by the various serological methods. The result showed that the species-specific antigenic components distributed mostly in the fractions, Tc of M. tuberculosis, Kc of M. kansasii, Sa of M. scrofulaceum, Aa of M. avium and Fa, Fb, Fc (FF1) of M. fortuitum, which were fractionated by ion exchange column prior to concentrating by salting out and molecular sieving.
The NADH reductase component of the steroid 9.alpha.-hydroxylase from Mycobacterium fortuitum was purified to homogeneity. Recovery of the enzyme from the 50-60% ammonium sulfate saturated fraction was 49%, with a purification factor of 100-fold. The NADH reductase has a relative molecular of 60 KDa as determined by SDS-PAGE. The absorption maxima at 410 and 450 nm indicate the presence of iron-sulfur group and flavin. These prosthetic groups seemed to function as redox groups that transfer electrons from NADH to the following protein. The $K_M$ value for NADH as substrate was $68{\mu}M$. The $NH_2$-terminal amino acid sequence of the reductase was determined as Met-Asp-Ala-Ile-Thr-Asn-Val-Pro-Leu-Pro-Ala-Asn-Glu-Pro-Val-His-Asp-Tyr-Ala-Thr. This sequence does not show a homology with the $NH_2$ -terminal sequences reported for the reductase component of other monooxygenases, suggesting that the NADH reductase component of the steroid 9.alpha.-hydroxylase system is novel.
Two cases of pulmonary disease in a 54 year-old female and a 70 year-old male patient due to Mycobacterium avium-intracellulare complex(MAIC) and a case of pulmonary infection ina 69 year-old male patient due to M. fortuitum(MF) were found recently in this institute. All three patients had a long history of anti-tuberculous chemotherapy because they were initially diagnosed as pulmonary tuberculosis. A 70 year-old male patient infected with MAIC had an unsuccessful chemotherapy history of isoniazid(INH), para-aminosalicylic acid(PAS) and streptomycin(SM) with an incomplete, temporary, symptomatic improvement, for three years since 1964 when he was first diagnosed as pulmonary tuberculosis on physical examination. A 54 year-old female patient infected with MAIC also had an unsuccessful chemotherapy history with the various anti-tuberculous drugs since 1958. Both patients discharged large number of MAIC in their sputum specimens for at least more than one year, but no M. tuberculosis at all. A 69 year-old male patient infected with MF was diagnosed as moderately advanced pulmonary tuberculsis in 1977. Combined chemotherapy with INH+PAS+pyrazinamide(PZA) improved his clinical symptoms, however, his chest radiograph was deteriorated again in 1980 one year after he stopped therapy. Therefore he started chemotherapy again with INH+ethionamide(TH)+cycloserine(CS) but no improvement was noticed. MF was cultured from his sputum in August 1981 and he continuously discharged the same bacilli until last examination of January 1982. Whether all three patients were initially !infected with nontuberculous mycobacteria or complicated with predisposing tuberculosis was not clear because there were no reliable bacteriological examination records.
세균 및 진균류의 증식을 억제하는 능력이 있는 것으로 보고된 누로와 대계의 추출물을 사용하여 Mycobacterium smegmatis 및 Mycobacterium fortuitum의 증식을 억제하는 능력이 있는지를 시험하였다. 그 결과, 누로의 추출물에서는 증식억제능을 발견할 수 없었으나, 대계의 추출물에서는 뚜렷한 증식억제능이 관찰되었다. 따라서 본 연구에 사용된 대계(엉겅퀴)에 대한 분류학적 또는 진화적 분석을 수행하기 위하여 genomic DNA를 추출한 후, ITS1, 5.8S rRNA 유전자 및 ITS2를 포함하는 부분을 PCR로 증폭시켰다. PCR 산물의 염기서열을 분석한 결과, 733-bp의 염기서열이 얻어졌고, 이것을 GenBank에 등록하였다(accession number GU188570). 이렇게 얻어진 염기서열을 사용하여 BLAST analysis를 수행한 결과, 염기서열이 일치하는 생물체는 아직까지 GenBank에 보고된 적이 없고, 가장 가까운 식물들로는 귀화식물로서 전국적으로 분포하는 Carduus crispus (지느러미엉겅퀴) 및 현재까지 국내에 자생하는 것으로 보고된 적이 없는 Carduus defloratus로서 각각 3개씩의 염기가 다른 것으로 나타났다.
Clinical strains of Mycobacterium tuberculosis, M. terrae complex, M. gordonae, M. avium-intracellulae complex, and M. fortuitum from Korean patients were isolated and analyzed by comparing large restriction fragment (LRF) patterns produced by digestion of genomic DNA with infrequent-cutting endonucleases like AsnI and XbaI. and pulsed-field gel electrophoresis (PFGE). Three M. tuberculosis, two M. terrae complex, two M. gordonae, two M. avium-intracellulae complex, and two M. fortuitum strains were compared by using AsnI and XbaI. and this allowed easy visual separation of all epidemiologically unrelated strains. PFGE exhibits different DNA restriction patterns which are easy to compare. Genome size of the strains roughly ranged from 3020 to 3335 kb. The LRF patterns are useful for epidemiologic studies of tuberculosis with regard to drug resistance.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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