느타리는 국내에서 가장 많이 재배되고 소비되는 버섯 중 하나로 재배시스템이 기계화, 자동화되면서 대량생산이 가능해졌다. 기존에 외국에서 도입되어 20년 이상 재배되어온 '수한', '춘추느타리2호' 등의 품종을 순수 국산품종으로 대체하고자 많은 품종들이 개발되었다. 그 가운데 2015년 개발된 '솔타리'는 버섯의 품질은 우수하나 재배가 까다롭고 생산성이 다소 떨어져, 이를 보완하기 위해 국립원예특작과학원 버섯과에서는 보유중인 유전자원 KMCC05165를 선발하여 단포자 간 교잡을 시도하였고, 반복재배시험과 자실체 특성평가를 통해 최종 우량계통 Po-2019-smj22를 선발하고 '오타리'라고 명명하였다. '오타리'의 균사생장 적온은 25~30o℃이고, 버섯 생육 적온은 13~18℃인 중고온성 품종이다. PDA 배지에서의 균사생장은 25℃에서 가장 우수하였고, 25℃ 동일한 온도에서는 PDA, MEA, MCM, YM 4종류 배지에서 모두 균사생장 정도가 비슷하였다. 1,100 mL의 병재배 시, 수량은 약 174g으로 대조품종인 '솔타리'에 비해 약 5% 증수되었고, 유효경수도 약 25개로 더 많았다. 갓의 직경과 높이는 29.8 mm, 17.6 mm로 '솔타리'에 비해 다소 작았고, 대의 굵기는 12.2 mm로 얇고 긴 형태를 띠었다. 또한, 갓의 명도를 나타내는 L index 값은 30.7로 '솔타리'보다 더 어두운 흑갈색을 나타냈다. 균사활력이 우수하여 재배가 쉽고 유효경수가 많고 수량이 높아 생산성이 우수한 신품종 '오타리'가 국내 느타리 농가에 널리 보급되기를 기대해본다.
Inonotus obliquus 균사체의 액상배양을 통한 항당뇨효능의 단백다당체 대량생산 배양공정을 개발하기 위한 첫 단계로 고생산성 균주의 개발을 신속하게 수행하기 위한 방법을 개발하였다. I. obliquus는 균사체로 성장할 때 포자를 형성하지 못하므로 단일 세포를 획득하기 위해서는 원형질체들을 회수하여 이로부터 성장 능력과 단백다당체의 생산성이 높은 우량균주를 선별하여야 한다. 본 연구에서는 이러한 균주개량 공정 중 특별히 장기간의 배양 시간이 요구되어 신속한 균주개발 시 가장 큰 장애 요인으로 작용하는 고체성장배양 단계의 문제점을 극복하고자, 고체배양 환경의 최적화에 대한 연구를 중점적으로 수행하였다. 고체성장배양 시 균사체 성장에 효능이 탁월한 배지성분을 선별하기 위해 우선 Plackett-Burman design 실험을 통해서 유의성 높은 배지성분을 찾아내었고, 이에 근거한 부분요인설계법 fractional factorial design, FFD) 실험을 통해 배지성분 상호간의 관계를 분석 할 수 있었다. 또한 이 FFD 실험결과에 근거해서 설계한 최급상승법 (steepest ascent method, SAM) 실험방법을 적용한 결과, 고체성장배양 시 균사체 성장환의 직경이 기존의 MA 배지와 비교해서 약 41% 증가했을 뿐만 아니라 균사체의 밀도도 크게 향상된 배지조성을 확립 할 수 있었다. 또한 SAM 연구결과를 바탕으로 최적의 배지조성을 확립하고자 각 배지성분의 최적농도를 통계적으로 더욱 정밀하게 조사하는 반응표면분석법 (response surface method, RSM) 실험을 수행하였다. 그 결과 최적고체성장배지의 성분과 농도는 glucose 25.61 g/L, brown rice 12.53 g/L, soytone peptone 12.53 g/L, $MgSO_4$ 5.53 g/L, agar 20 g/L인 것으로 최종 결정되었으며, 이 조건에서 13일 동안 배양시 균사체의 직경이 약 82 mm 정도에 이르는 것으로 나타났다. 이 결과는 상기의 SAM 실험에서 최적농도로 제시한 배지조성과 매우 유사한 것으로 확인되었는데, 이로부터 최종적인 RSM 실험을 수행하기 전에 최적 농도의 근사치를 추정하기 위해서 수행한 SAM 실험이 매우 효율적이었음을 확인할 수 있었다. 또한 배지 최적화 결과 고체성장배양에서의 성장속도의 증가로 인해 배양기간을 기존의 15~20일에서 8일로 획기적으로 줄일 수 있게 되어, 짧은 시간 내에 대규모 균주 선별과 각 균주의 단백다당체의 생산성 확인이 가능하게 되었다.
민자주방망이버섯의 대량 생산 및 상업적 실용화를 위하여 야생 균주에 비해 재배기간이 짧고 자실체 발생이 잘 이루어지는 신품종을 육성하기 위하여 본 연구를 수행하였다. 민자주방망이버섯 유전자원 18계통을 수집하고 볏짚발효배지를 이용한 상자 재배를 통해 자실체가 발생한 4계통을 교배모본으로 선발하였다. 단포자 교배를 통해 671조합의 교배를 하였으나 'CBMLN-19' 계통과 'CBMLN-30' 계통을 교배한 17조합만이 교배가 이루어졌다. 그 중 균사 생장이 빠르고 밀도가 높은 8계통을 1차 선발하였다. 볏짚발효배지에 유전자원 14계통, 교배계통 8계통을 접종 후 배양기간을 조사한 결과 교배계통 중 6계통은 20일만에 배양이 완료되었으며 유전자원 14계통 중 7계통은 배양이 완료되기 까지 40일 이상이 소요되어 대부분의 교배계통에서 배양기간이 20일 이상 단축되었다. 배양이 완료된 계통은 식양토를 1~2 cm 복토하여 후 배양을 하였고 균사 배양이 완전히 완료되었을 때 균긁기를 한 후 자실체 발생을 유도하였다. 발생 유도 환경은 온도 14℃, 상대습도 95% 이상, CO2농도 1,500~2,000 ppm 이었으며, 야간에 6℃로 온도를 낮추어 하온 충격을 주었다. 그 결과 유전자원 'CBMLN-31', 'CBMLN-44' 2계통, 교배계통 'CBMLN-96', 'CBMLN-103' 2계통 총 4계통에서 자실체가 발생하였다. 접종 후 자실체가 발생되기까지의 기간은 대조구인 유전자원 'CBMLN-31'이 100일로 가장 길었고, 교배계통인'CBMLM-103'이 45일로 가장 짧았다. 자실체 특성 조사 결과 교배계통인 'CBMLN-103'은 개체중이 1.9 g으로 작은 형태를 나타냈으며, 상자 당 유효경수 123개로 4계통 중 발생량이 가장 많았다. 또 다른 교배계통 'CBMLN-96'은 개체중이 5.5 g 으로 'CBMLN-103' 보다 큰 형태를 나타냈으나, 상자 당 유효경수는 30개로 발생량이 적었다. 수량성 조사 결과 대조구인 'CBMLN-31'계통에서 상자 당 수량 783 g으로 가장 높게 나타났고, 교배계통 'CBMLN-96'은 165 g, 'CBMLN-103'은 232 g으로 나타났다. 교배계통 2계통에서 수량성은 대조구 'CBMLN-31'보다 낮았지만 자실체 발생량이 많았으며, 재배기간이 40일~55일 단축되어 이 2계통을 우량계통으로 선발하고자 한다.
Kim, Jun-Young;Yun, Yeo-Hong;Hyun, Min-Woo;Kim, Myeong-Ho;Kim, Seong-Hwan
Mycobiology
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제38권1호
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pp.7-12
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2010
A green mold species that has not previously been reported in Korea was isolated from oak log beds used for shiitake (Lentinula edodes) cultivation that were infested by mushroom flies. In this study, we identify the mold species as Gliocladium viride (an anamorph of Hypocrea lutea) and describe its mycological properties. The fungus was cottony on both potato dextrose agar (PDA) and Czapek yeast extract agar (CYA), but was colored white on PDA and became yellowish green and brown on CYA. Mycelial growth on PDA attained a diameter of 73 mm at $30^{\circ}C$ after 5 days. The fungus grew faster on malt extract agar (> 80 mm, 5 days at $25^{\circ}C$) compared to CYA and PDA (< 68 mm, 5 days at $25^{\circ}C$). Penicillate conidiophores of the fungus are hyaline, smooth walled, branching above typically in four stages, and $120\sim240\;{\mu}m$ in length. Club-shaped or slender phialides are formed on the metulae. Conidia of the fungus were ovate and elliptic, yellowish brown and green, and $2.5\sim3.0\;{\mu}m\times1.8\sim2.3\;{\mu}m$ in size. Typically, slimy conidia are formed in a mass and colored brown to dark green to almost black. The internal transcribed spacer rDNA and translation elongation factor 1 alpha gene sequences of the fungus isolated here show 99% identity with previously identified G. viride strains.
Gummy stem blight, caused by Didymella bryoniae occurs exclusively on cucurbits. This fungus has been known not to produce its pycnidium in vitro unless irradiated. Through this study, we optimized cultural conditions for mass-production of pycnidiospore by Metal Halide Lamp irradiation. In brief, the mycelial was cultured at $26^{\circ}C$ on PDA, for 2 days under the darkness, and then the plate was illuminated with MH lamp continuously for 3-4 days at $26^{\circ}C$, a great number of pycnidia was simultaneously formed. Thus produced pycnidiospores were used as immunogen. From fusions of myeloma cell (v-653) with splenocytes from immunifed mice were car ried out. And, two hybridoma cell lines that recognized the immunogen Didymella bryoniae were obtained. One Monoclonal Antibody, Db1, recognized the supernatant and the other monoclonal antibody, Db15, recognized the spore. Two clones were selected which were used to produce ascite fluid two MAb Db1 and Db15, were immunotyped and identified as IgG1 and IgG2b, respectively. Titer of MAb Db1 and MAb Db15 was measured absorbance exceeded 0.5 even at a $10^{-5}$ dilution. The MAbs reacted positively with Didymella bryoniae but none reacted with other of fungi and CMV, CGMMV Sensitivity of MAb was precise enough to detect spore concentration as low as $10^{3}$ well by indirect ELISA characterization of the MAb Db1, Db15 antigen by heat and protease treatments show that the epitope recognized by the MAb Bb1, Db15 were a glycoprotein.
약용버섯의 균사체(Ganoderma lucidum 7094, Fomitella fraxinea 81003, Phellinus igniarius 26005)를 곡류와 같은 고체재료에 배양하고 발효된 곡류의 유리당 조성 변화를 관찰함으로써 기능성식품 개발의 가능성을 검토하였다. 담자균사체의 대량배양 조건 실험을 실시한 결과, 냉침에 의해 최대수화에 도달한 곡물을 배양용기에 담고, 액체배양 후 균질화한 담자균사체를 곡물에 접종함으로써 접종초기 짧은 시간에 균사가 완전히 활착되도록 할 수 있었다. 또한 균사 배양중기에 멸균 증류수를 첨가함으로써 균사의 활력을 유지시킬수 있었다. 담자균사체는 종류에 따라 유리당 총량 및 구성비에 있어서 큰 차이를 나타내었다. 또한 담자균사체가 배양된 곡물의 유리당 함량을 측정한 결과, 유리당 총량 및 대부분의 유리당 함량이 곡물 자체에서 보다 증가하였으며, 담자균과 곡물배지의 종류에 따라 당의 이용성에 큰 차이를 나타내었다.
Hong, A Reum;Yun, Ji Ho;Yi, Su Hee;Lee, Jin Heung;Seo, Sang Tae;Lee, Jong Kyu
Journal of Forest and Environmental Science
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제34권5호
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pp.395-404
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2018
Since the mass mortality of Quercus mongolica has been first reported in Gyeonggi province at 2004, the disease spread rapidly over Korean peninsula annually. Ambrosia beetle (Platypus koryoensis) was known as the insect vector of oak wilt fungus, Raffaelea quercus-mongolicae, and control methods of the disease had mainly been focused on eradication of insect vector. However, for the efficient management of the disease, combined control methods for both of the pathogenic fungus and insect vector are strongly required. As one of the efforts to suppress the pathogenic fungus, antifungal activities of Streptomyces isolated from oak forest soil were assayed in this study. Optimum culture condition for the selected isolates was also studied, As a result, Streptomyces blastmyceticus cultured in PDB (Potato Dextrose Broth) at $25^{\circ}C$ for 1 week showed the strongest antifungal activity against oak wilt fungus. Mycelial growth inhibition rates (MGIRs) of Streptomyces isolates were compared on culture media supplemented with heated and unheated culture filtrates of S. blastmyceticus. MGIRs on culture media with unheated culture filtrates were generally higher than those on culture media with heated culture filtrates. Antagonistic mechanism to get involved in the inhibition of hyphal growth and spore formation of the pathogen is due to the antifungal metabolites produced by Streptomyces. This study will provide the fundamental information in developing biocontrol agents for the environment-friendly management of oak wilt disease.
Since July 2005, survey of chestnut ink disease was carried out in chestnut stands located at southern parts of Korea. Dead chestnut trees showing inky ooze on necrotic trunks were found in two different locations. In order to isolate and identify the causal fungus, infected tissues and soil samples around dead or dying trees were collected and placed on Phytophthora-selective medium. Rhododendron and chestnut tree leaves were used as a bait to isolate the fungus from soil samples by attracting zoospores in soil suspensions. On V-8 culture medium, the isolates produced homothallic oogonia with protuberances ($34.0-46.2{\times}21.9-26.7{\mu}m$) abundantly, but did not produced sporangia. Mass production of sporangia was possible by immersing agar plugs with actively growing mycelium in the creek water at $18^{\circ}C$ for 3 days. Sporangia were papillate, and ovoid to obpyriform ($17.0-38.9{\times}14.6-29.2{\mu}m$) in shape. Comparison of the ITS sequences revealed that the isolates had 100% identity to the P. katsurae isolates from Japan and New Zealand and 99.6% identity to other P. katsurae isolates. All of the examined isolates from Korea were completely identical to each other in ITS sequence. Numerous sporangia were formed in filtered as well as unfiltered creek water, but no sporangia formed in sterilized distilled water. Light induced sporangia formation, but has no influence on oospore formation. Amendments of ${\beta}$-sitosterol in culture media have no significant effect on mycelial growth but significantly stimulate oospore and sporangia formation.
좀구멍버섯균(Schizopora paradoxa)은 백색 부후 균으로 망간이 배지에 첨가되지 않으면 MNP와 GOX는 동시에 생성되지 않았으며 고농도의 망간 첨가시 (40ppm)에는 기본적 농도(11.15ppm)에 비해 MNP와 GOX가 모두 높은 활성을 보였다. 그러나 망간농도에 따른 균사생장량에는 별 차이가 없었다. 구리와 veratryl alcohol에 대해서도 같은 실험을 실시하였으나 농도에 따른 MNP와 GOX의 변화가 상관관계를 갖지 않는 것으로 나타났다. MNP와 GOX의 생성조절과 관련하여 cAMP의 영향을 조사한 결과 cAMP생성효소 억제제인 atropine을 농도별로 배양액에 첨가시 정도의 차이는 있었으나 MNP와 GOX생성이 동시에 억제되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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