In the purification of elaiophylin from a culture of Streptomyces hygroscopicus MCY -846, mono- and di-methyl-elaiophylin were obtained through a O-methylation of the hemiketal hydroxy group of elaiophylin. All the three elaiophylins showed cytotoxicity against several human tumor cell lines and murine cell lines. Elaiophylin and monomethyl-elaiophylin also showed antimicrobial activities against gram-positive bacteria and potent inhibitory effects on the activation of B cells by lipopolysaccharide as well as on the proliferation of mouse splenic lymphocytes stimulated by mitogens but dimethyl-elaiophylin did not. This result indicates that elaiophylin and monomethyl-elaiophylin would be strong immunosuppressants. Furthermore this result revealed an interesting structure-activity relationship suggesting that the lack of symmetry and/or the free OH group at C-11 of elaiophylin might be important in conferring biological activities.
Background: Our objective was to clarify the clinical and biological characteristics of basal-like breast cancer (BLBC) and non-basal-like breast cancer (TN3BKE) in Heilongjiang. Methods: We examined, by immunohistochemistry, expression of biological markers cytokeratin (CK) 5/6 and epidermal growth factor receptor (EGFR) and B cell specific moloney murine leukemia virus integration site 1( Bmi-1) in triple-negative breast cancer (TNBC). We studied the correlation between BLBC and several factors related to tumor progression, along with its prognostic value. Results: In the 229 cases of operable TNBC, BLBC was detected in 178 (77.7%) and TN3BKE- in 51 (22.2%). There was no significant difference in clinicopathological factors between them, However, BLBC was significantly associated with Bmi-1 expression (P=0.000) and shorter disease-free survival (DFS) (P = 0.045) and overall survival (OS) (P = 0.041). Conclusions: Compared with the non-basal group, patients with BLBC have a high expression of Bmi-1 and a poor prognosis.
BACKGROUND/OBJECTIVES: Platycodon grandiflorum (PG), an oriental herbal medicine, has been known to improve liver function, and has both anti-inflammatory and antimicrobial properties. However, little is known about the immune-enhancing effects of PG and its mechanism. In this study, we aimed to investigate whether fermented PG extract (FPGE), which has increased platycodin D content, activates the immune response in a murine macrophage cell line, RAW 264.7. MATERIALS/METHODS: Cell viability was determined by Cell Counting Kit-8 assay and the nitric oxide (NO) levels were measured using Griess reagent. Cytokine messenger RNA levels of were monitored by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction. To investigate the molecular mechanisms underlying immunomodulatory actions of FPGE in RAW 264.7 cells, we have conducted luciferase reporter gene assay and western blotting. RESULTS: We found that FPGE treatment induced macrophage cell proliferation in a dose-dependent manner. FPGE also modulated the expression of NO and pro-inflammatory cytokines, such as tumor necrosis factor-α, interleukin (IL)-1β, and IL-6. The activation and phosphorylation levels of nuclear factor kappa B (NF-κB) were increased by FPGE treatment. Moreover, 5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotide, an activator of AMP-activated kinase (AMPK), significantly reduced both lipopolysaccharides- and FPGE-induced NF-κB reporter gene activity. CONCLUSIONS: Taken together, our findings suggest that FPGE may be a novel immune-enhancing agent acting via AMPK-NF-κB signaling pathway.
The use of doxorubicin, which is one of the most effective anticancer agents, is often limited by occurrence of acquired resistance in tumor cells. GSH has been shown to be involved in the development of this drug resistance. Transcription factor Nrf2 governs the expression of GSH synthesizing glutamylcysteine ligase (GCL), as well as multiple phase 2 detoxifying enzymes. Here we show that Nrf2 is one of factors determining doxorubicin sensitivity. Nrf2-deficient fibroblasts (murine embryonic fibroblasts, MEF) were more susceptible to doxorubicin mediated cell death than wild-type cells. Doxorubicin treatment elevated levels of Nrf2-regulated genes including NAD(P)H: quinone oxidoreductase (Nqo1) and GCL in wild-type fibroblasts, while no induction was observed in Nrf2-deficient cells. Doxorubicin resistance in human ovarian SK-OV cells was reversed by treatment with L-buthionine-sulfoxamine (BSO), which is depleting intracellular GSH. Finally, transfection of SK-OV cells with Nrf2 siRNA resulted in exacerbated cytotoxicity following doxorubicin treatment compared to scrambled RNA control. These results indicate that the Nrf2 pathway, which plays a protective role in normal cells, can be a potential target to control cancer cell resistance to anticancer agents.
Objectives : The purpose of this study was to investigate the anti-inflammatory effects of extract from Pulsatilla koreana $N_{AKAI}$ (PK) on the peritoneal macrophage. Methods : To evaluate of anti-inflammatory of PK, we examined cytokines and NO production in lipopolysacchride (LPS)-induced macrophages. Furthermore, we examined molecular mechanism using western blot. Results : 1.Extract from PK reduced LPS-induced NO, tumor necrosis factor-a ($TNF-{\alpha}$), interleukin (IL)-6 and IL-12 production in peritoneal macrophages. 2.Extract from PK itself does not have any cytotoxic effect. PK inhibited the activation of extracelluar signal-regulated kinase(ERK 1/2) but not another mitogen-activated protein kinases (MAPKs) such as p38, c-Jun NH2-terminal kinase (JNK) and the degradation of inhibitory kappa B a ($I_{k}B_{a}$) does not any effect in the LPS-stimulated peritoneal macrophages. Conclusion : PK down-regulated LPS-induced NO and cytokines production, which may be provide a clinical basis for anti-inflammatory properties of PK.
Glucose oxidase (GOD) is an oxidoreductase catalyzing the reaction of glucose and oxygen to peroxide and gluconolacton (EC 1.1.3.4.). GOD is a widely used enzyme in biotechnology. Therefore the production of monoclonal antibodies and antibody fragments to GOD are of interest in bioanalytics and even tumor therapy. We describe here the generation of a panel of monoclonal antibodies to native and heat inactivated GOD. One of the hybridomas, E13BC8, was used for cloning of a single chain antibody(scFv). This scFv was expressed in Escherichia coli XL1-blue with the help of the vector system pOPE101. The scFv was isolated from the periplasmic fraction and detected by western blotting. It reacts specifically with soluble active GOD but does not recognize denatured GOD adsorbed to the solid phase. The same binding properties were also found for the monoclonal antibody E13BC8.
Purpose: It is the purpose of this study to investigate the anti-inflammatory effects and mechanism of cheukbaekjurpihwan(CBJPH) extract on LPS (lipopolysaccharide)-induced inflammatory mediators in murine peritoneal macrophages. Methods: To evaluate anti-inflammatory effects of CBJPH extract, the production of cytokines(TNF-${\alpha}$(tumor necrosis factor-alpha), IL(interleukin)-6, IL-12) and NO(nitric oxide) was measured in vitro and in vivo. And western blot analysis has been done to look into the mechanism. Results: CBJPH extract reduced LPS-induced NO, TNF-${\alpha}$ and IL-6, IL-12 productions in peritoneal macrophages. CBJPH extract inhibited the activation of JNK(c-Jun N-terminal kinase), but didn't inhibit the activation of MAPKs (mitogen-activated protein kinases) such as p38, ERK1/2(extracelluar signal-regulated kinase1/2) and the degradation of $I_{\kappa}B-{\alpha}$(inhibitory kappa B-alpha) in the LPS-stimulated peritoneal macrophages. CBJPH extract suppressed LPS-induced endotoxin shock and the productions of TNF-${\alpha}$, but not of IL-6, after an oral administration of CBJPH extract Conclusion: CBJPH extract suppressed the productions of LPS-induced NO and cytokines by preventing JNK from phosphorylation, which may provide a clinical basis for anti-inflammatory properties of CBJPH.
Insulin-like growth factor-I (IGF-I) rich fraction, collected components between 1 kDa and 30 kDa, was fractionated from bovine colostral whey using an ultrafiltration membrane. IGF-I was confirmed in the collected IGF-I rich fraction by both SDS-PAGE and Western blotting. The concentration of IGF-I in the IGF-I rich fraction was 10 ng/mg protein. One hundred microliters of the reconstituted IGF-I rich fraction was intraperitoneally injected into ICR male mice for 2 weeks at 24 h intervals. The functions of peritoneal macrophages, including phagocytosis, interleukin (IL)-6 and tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$ production, and nitric oxide and hydrogen peroxide production, were enhanced significantly by the administration of the IGF-I rich fraction in a dose-dependent manner (p<0.01). The proliferation of Concanavalin (Con) A-stimulated and Lipopolysaccharide (LPS)-stimulated splenocytes was also determined to have been enhanced significantly by the administration of the IGF-I rich fraction in a dose-dependent manner (p<0.01). Our results indicate that the administration of IGF-I rich fraction obtained from bovine colostral whey enhances both innate and acquired immunity for ICR male mice.
Cirsium japonicum var. ussuriense is known to have a variety of biological activities, including anti-inflammatory, analgesic activity and antipyretic activity. In this study we investigated the role of polyacetylene compound, 1-Heptadecene-11, 13-diyne-8, 9, 10-triol (PA) from the root of Cirsium japonicum var. ussuriense as an immune-modulator. PA was evaluated as inhibitors of some macrophage functions involved in the inflammatory process. We tested the effect of PA on the production of pro-inflammatory cytokines, interleukin-1beta (IL-$1{\beta}$) and tumor necrosis factor-alpha (TNF-$\alpha$), and nitric oxide (NO) in murine macrophage cell line, RAW264.7. There was no effect on cytokine production of macrophages by PA itself. However, PA inhibited lipopolysaccharide (LPS)-induced IL-$1{\beta}$ and TNF-$\alpha$ production by macrophages at a dose dependent manner. PA also suppressed the NO production of macrophages by LPS. LPS-induced NF-${\kappa}B$ activity was decreased by treatment of PA. Therefore, these results suggest that PA has anti-inflammatory effect by inhibiting the NF-${\kappa}B$ activation.
To investigate a possible biological activity of iridoid glucosides, six compounds, aucubin, catalpol, gardenoside, geniposide, rehmannioside and swertiamarin, were studied in relation with their potential influences in RNA and protein biosyntheses in murine tumor cell, sarcoma 180, in vitro. Protein biosynthesis was slightly inhibited by aucubin, gardenoside and swertiamarin. Degree of inhibition of RNA biosynthesis by those iridoid appeared to be more sensitive than that of protein biosynthesis. When aucubin was pretreated with ${\beta}-glucosidase$ to produce its genin form and the sarcoma 180 cells were exposed to this aucubigenin, the protein and RNA biosyntheses in the cells were profoundly inhibited. The results indicate that a biologically active from of iridoid compounds is the hydrolytic products of glycoside, i.e. genin form. It is also suggested that sarcoma 180 cells used in the experiments appear to lack of ${\beta}-glucosidase$, since the inhibitory actions of iridoid glucosides were so slight that those glucosides were not hydrolysed by the enzyme to their genin forms.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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