Anthrax caused by Bacillus anthracis is one of the most important zoonotic diseases. The bacterium produces several virulence factors. Of the factors, protective antigen (PA) of tripatite toxin has been identified as a central component in the pathogenesis of anthrax. However, precise roles of PA and other cellular components in the reaction with the target cells remain to be elucidated, especially in the initial stage of the disease. Three B anthracis antigens were prepared for investigation; PA, sonicated cellular antigens (S-Ag) and formalin-inactivaed whole cell antigens (W-Ag). PA was purified from culture supernatant of the bacterium using FPLC system with MonoQ. S-Ag and W-Ag were prepared by sonication and formalin inactivation of the cultured cells, respectively. Purity of the antigens was confirmed by SDS-PAGE and Western blot analysis. The roles of these antigens in the production of inflammatory mediators such as NO, IL-6 and $TNF{\alpha}$ from mouse peritoneal macrophages were investigated. PA alone did not induce the production of the inflammatory mediators while the other antigens, S-Ag and W-Ag, did in a dose and time dependent manner. These results suggested that in addition to major virulence factors, other cellular antigens are also involved in the initial stage of the disease by the induction of inflammatory mediators.
The capacities of bacterial DNA, extracted from Salmonella typhimurium, and lipopolysaccharide (LPS), extracted from Salmonella minnesota, to activate mouse peritoneal macrophages in vitro were compared. Activation was assessed by estimating e levels of 3 cytokines, IL-10, IL-12, and $IL-1{\beta}$, at time intervals of 3, 6, 9, and 24 h after addition of LPS and/or DNA to macrophage cultures. Cytokine levels in culture supernatants were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and cytokine mRNA levels were estimated based on band intensity in cultured cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR). Results obtained demonstrated the ability of DNA and LPS to elicit increased production of all 3 cytokines as compared to controls. In the amount tested, LPS appeared to be a more potent inducer of IL-12, and $IL-1{\beta}$, whereas DNA induced higher levels of IL-10. DNA and LPS, used in combination, exhibited neither an additive nor a synergistic effect. Rather, an antagonist effect appeared to occur. RT-PCR results correlated well with ELISA.
We investigated the immune enhancement effects of JaSaengHwan (JSH). The forced swimming test (FST) has been used as a screening model for new immune enhancement agents. We found that JSH (0.1 mg/ml) significantly reduced the immobility time in the FST compared to the control. Also, we investigated the effect of JSH on the proliferation of T cell and production of cytokines in human T-cell line, MOLT-4 cells and mouse peritoneal macrophages. JSH (1 mg/ml) significantly increased the cell proliferation by $46.78{\pm}6.41%$ (p<0.05) and also significantly increased the interleukin (IL)-2, IL-4 and interferon $(IFN)-{\gamma}$ production compared with media control (about 2-fold for IL-2, 3-fold for IL-4 and 1.5-fold for $IFN-{\gamma}$, p<0.05) at 24 h. In addition, JSH increased the production of IL-12 on the mouse peritoneal macrophages (by 3.6-fold for IL-12, p<0.05). In conclusion, these data indicate that JSH may have an immune-enhancement effect.
The present study was undertaken to examine the effects of obioactin, lonomycin A, and MDP on toxoplasmacidal activities in glycogen-induced mouse peritoneal macrophages. The killing effect of obioactin on Toxoplasma multiplication was increased significantly in proportion to its concentrations. $O_2{^-}$ generation in obioactin-treated macrophages was also increased from twofold to threefold when compared with that of untreated control. Similarly, $H_2O_2$ continued to rise in parallel with increase of the concentration of obioactin. Lonomycin A-treated macrophages also exhibited a good effect of dose-response on toxoplasmacidal activities. However, $O_2{^-}$ and $H_2O_2$ were not generated significantly in lonomycin A-treated macrophages. Macrophages treated with muramyl dipeptide (MDP) were not found to inhibit the prolifi:ration of Toxoplasma but showed the enhancement of $O_2{^-}$ and $H_2O_2$, generation. The released lysozyme levels from macrophages into cultured media were decreased tn dose-dependent fashion by in vitro treatment of obioactin, lonomycin A, and MDP. The intracellular lysozyme levels appeared to be a constant value regardless of increasing the concentrations of obioactin, lonomycin A, and MDP. Therefore, these results suggest that Toxoplasma multiplication within macrophages treated with obioactin was inhibited by the generation of $O_2{^-}$ and $H_2O_2$ and that lysozyme per se within or released from macrophages had no effect on toxoplasmacidal activity.
Objective : Nelumbinis Folium (NF) is used for diarrhea, headache and dizziness in traditional medicine. In this paper, we examined the anti-inflammatory effects of the methanol extract of NF in mouse macrophages. Methods : Peritoneal macrophages from thioglycollate medium-injected mice were cultured and stimulated with lipopolysaccharide(LPS) or LPS/interferon(IFN)-${\gamma}$ for viability assay, cytokine measurement and Western blotting. Results : NF methanol extract suppressed the levels of nitric oxide (NO) through reduction of inducible NO synthase in a concentration-dependent manner. The extract reduced LPS/IFN-${\gamma}$-stimulated STAT1 phosphorylation and LPS-induced $I{\kappa}B{\alpha}$ degradation through inhibition of $I{\kappa}B{\alpha}$ kinase activation. The extract also inhibited p38, JNK/SAPK and ERK1/2 activation. Conclusions : Our findings suggested that NF has anti-inflammatory activity, and have a potential for therapeutic application. Further research is required to investigate its anti-inflammatory active compounds.
Seo, Min-Jeong;Kang, Byoung-Won;Kim, Min-Jeong;Lee, Hye-Hyeon;Seo, Kwon-Il;Kim, Kwang-Hyuk;Jeong, Yong-Kee
Korean Journal of Food Science and Technology
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v.46
no.1
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pp.68-72
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2014
The effect of cordycepin purified from Cordyceps militaris on macrophage activation was investigated in peritoneal macrophages isolated from C57BL6 mice. Lipopolysaccharide-induced mouse peritoneal cells showed that cordycepin treatment increased the expression of the inflammatory cytokines interleukin (IL)-$1{\beta}$, IL-12, and tumor necrosis factor-${\alpha}$ (TNF-${\alpha}$), leading to early inflammation-mediated reactions, the activation of immunological responses, and T lymphocyte activation. T lymphocytes, activated by a greater production of IL-6, resulted in antibody-generating immune reactions, suggesting that cordycepin was effective at inducing immunological responses. Consistent with the increase in the inflammation-mediating factors including nitric oxide (NO) and hydrogen peroxide ($H_2O_2$), the toxic response of macrophages was activated and effectively induced inflammation. These findings demonstrate that cordycepin is involved in reducing cell injury provoked by inflammatory reactions. Therefore, these results suggest that cordycepin treatment of mouse peritoneal cells induces inflammation-mediated immunological responses and immunostimulation.
Inhibitory effect of the lectins (KML-C) isolated from Korean mistletoe (KM; Viscum album coloratum) on tumor metastases produced by murine tumor cells (B16-BL6 melanoma, colon 26M3.1 carcinoma and L5178Y-ML25 lymphoma cells) was investigated in syngeneic mice. An intravenous (i.v.) administration of KML-C (20-50 ng/mouse) 2 days before tumor inoculation significantly inhibited lung metastases of both B16-BL6 and colon 26-M3.1 cells. The prophylactic effect of 50 ng/mouse of KML-C on lung metastasis was almost the same with that of 100 $\mu$ g/mouse of KM. Treatment with KML-C 1 day after tumor inoculation induced a significant inhibition of not only the experimental lung metastasis induced by B16-BL6 and colon 26M3.1 cells but also the liver and spleen metastasis of L5178Y-ML25 cells. Furthermore, multiple administration of KML-C given at 3 day-intervals after tumor inoculation led to a significant reduction of lung metastasis and suppression of the growth of B16-BL6 melanoma cells in a spontaneous metastasis model. In an assay for natural killer (NK) cell activity. i.v. administration of KML-C (50 ng/mouse) significantly augmented NK cytotoxicity against Yac-1 tumor cells 2 days after KML-C treatment. In addition, treatment with KML-C (50 ng/mouse) induced tumoricidal activity of peritoneal macrophages against B16-BL6 and 3LL cells. These results suggest that KML-C has an immunomodulating activity to enhance the host defense system against tumors, and that its prophylactic and therapeutic effect on tumor metastasis is associated with the activation of NK cells and macrophages.
Objective: The purpose of this study was to investigate the effects of Kamikwiryongtang (KKT) on the immune response and growth in a young mouse (3 weeks mice). Methods The viability of thymocytes and splenocytes in vivo and in vitro system, the population of helper T (Th) cells and cytotoxic T (Tc) cells in thymocytes and increased the population of T-lymphocytes and the population of Th cells in splenocytes, the production of ${\gamma}$ -interferon, interleukin-2 and interleukin-4 in splenocytes was investigated. KKT (500mg/kg) was administerd p.o. once a day for 7 days. Results: KKT increased the viability of thymocytes and splenocytes in vivo, but did not affect the viability of thymocytes and enhanced the viability of splenocytes in vitro system. In addition, KKT did not affect the population of helper T (Th) cells and cytotoxic T (Tc) cells in thymocytes and increased the population of T -lymphocytes and the population of Th cells in splenocytes. Also, KKT increased the production of ${\gamma}$-interferon, interleukin-2 and interleukin-4 in splenocytes. Furthermore, KKT increased the production of nitric oxide in vivo, but did not affect the production of nitric oxide in vitro system. KKT enhanced the phagocytic activity of peritoneal macrophages in vivo, but decreased the phagocytic activity in vitro system: KKT increased the body weight of a young mouse. Conclusions: KKT stimulates the specific immune response via increase of, the viability of thymocytes and splenocytes and the non-specific immune response via increase of phagocytic activity of peritoneal macrophages and stimulates the growth of a young mouse.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.26
no.5
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pp.978-982
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1997
In order to investigate the immunomodulatory mechanism of Ganoderma lucidum, the effects of protein-bound polysacchride of Ganoderma lucidum on the proliferation and cytokine gene expression of mouse peritoneal macrophages was studied. In the macrophage proliferation assay using the BrdU labeling reagent, the GLA component extracted from Ganoderma lucidum or GLB from the bud of Ganoderma lucidum were added to the medium at the concentration of 0 to 256ug/ml. DNA synthesis of the macrophage was increased at 16ug/ml of GLA and 64ug/ml of GLB, respectively. In the reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR), the cytokine(TNF, IL-1, and IL-12) gene and $\beta$-actin expression were also analyzed. 20$\mu\textrm{g}$/ml of either GLA or GLB increased TNF and IL-1 expression of the macrophages.
This study was done to know the effect of Giyuetang on the inflammatory response, contact hypersensitivity (CH), and rosette forming capacity of spleen cells. The effects of Jiyutang with Fructus Immaturus Ponciri on the inflammatory response were evaluated by measuring the production of such reactive oxygen intermediate(ROI) as $O_2^-$ and $H_{2}O_2$ in the peritoneal neutrophils and macrophages. The effects of Jiyutang with Fructus Immaturus Ponciri on the CH were evaluated by checking the ear swelling response against dinitrofluorobenzene(DNFB). The administration of Jiyutang with Fructus Immaturus Ponciri on the mouse decreased the amount of ROI in both neutrophils and macrophages. Jiyutang with Fructus Immaturus Ponciri depressed CH without affecting the rosette forming capacity of spleen cells. The results of this study showed that Jiyutang with Fructus Immaturus Ponciri might have anti-inflammatory effects by decreasing the amounts of ROI in the phagocytes and suppressing the CH, without affecting the rosette-forming capacity of spleen cells.
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